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请大家帮我看看我的southern blot 图片，不知道问题出在哪里了，谢谢
southern blot 实验目的是为了验证突变体基因被敲除（1,2分别是两个不同突变体）
1.使用单酶切5小时左右；
2.基因组DNA浓度约为450ng/uL，上样量每孔50微升，跑胶（0.8%）5小时左右，条带很亮；
3.试剂盒是Roche Kit I, 洗脱条件为：68℃&&2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃&&0.5×SSC，0.1%SDS 洗15min，洗两次；
4.探针是PCR目的基因部分片段的回收产物，大小约为400和700bp。
探针第一和第二次用的相同，第一次Marker（TAKARA DL15000）未杂出条带，目的基因野生型与突变体有目的条带；
第二次-1基因做出来了，-2效果不太好；
第三次-1是新做的探针，有杂带，背景信号也很高，-2仍是之前的探针，却没有杂出目标条带。
麻烦大家帮我分析分析是什么原因，有什么好的解决方法。不甚感激~~~~
第一次-1.jpg
第一次-2.jpg
第二次-1.jpg
第二次-2.jpg
第三次-1.jpg
第三次-2.jpg
PCR目标基因上游或者下游片段，回收后与marker煮沸后加入1号液制成。
我做的是细菌的，每孔总量为20ug左右。我后面用相同的DNA又做了一次，这次效果还不错，条带都很清晰，不过不同的是把探针换了，而且探针煮沸后冰浴着，再加入杂交液的。
不知道您有没有检测探针浓度的方法，Roche Kit I 的英文说明书有些看不明白。。。。
细菌总DNA不需要这么多，是不是浓度测定方法有大误差或者是酶切后纯化时损失太多？一般情况核酸浓度确定需要电泳和分光光度计测定结合，探针标记前测定即可。
之前探针使用时煮沸后未冰浴。。。。实验室流传下来的方法没有这一步。
细菌基因组DNA是用仪器测的，探针用的片段未测浓度。。。
酶切之后，我们没有纯化，第二天直接上样跑电泳的。。。。。
高温灭菌的。。。背景高可能是探针浓度过高了，吸取一点探针出来稀释3~5倍试试。。。Marker亮度如何？目的条带都能杂交出来么？
谢谢，我试着高压灭菌，把探针浓度降低5倍，阳性对照条带明显，但是实验组没有条带，我提取的DNA 浓度是238ng/ul用TAKALA的酶进行酶切，酶切体系是
EcoR1 1ul，BUf 2ul， DNA5ul(说明书上说DNA&1ug), 无菌水12ul，酶切后上样40ul,这样上样量才2ug。请问您是怎么保证上样量20ug的？？？谢谢
对不起额，最近上课比较忙，很久没来小木虫看了。。。我记得我是每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话 酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。。。。
好的，谢谢，那你的上样量差不多就100ul 啊！？
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改成 &小羽我爱你背景要这个颜色
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格式不对要GIF的要不传不了 麻烦了在帮我把这个背景换这2个颜色谢谢了
提问者评价
谢谢哈麻烦帮我弄下
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格式要GIF的谢谢 能换这个背景么
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这对焦再怎努都有限,也会失真
我帮一个朋友转发的
我想这张照片对他肯定很重要
所以 。。。
不想你白费功夫才说,要不你先试著放大看看就能理解了
总之，还是谢谢你了&#128513;
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第二题的答案应该是B、C,先看C,这里在不带电是,TA等于两个的重力,在带电以后,把两物体看成是以整体,结果还是两物体的重力和,用了整体分析法.当然也可以用隔离法,不过要繁一点.对于B,你是知道的了,我就不说了
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tpDV82UA54
对的 我对着这道题越看 越晕
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