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SLE患者自体外周血纯化造血干细胞移植后自身抗体的变化
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SLE患者自体外周血纯化造血干细胞移植后自身抗体的变化
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3秒自动关闭窗口蛋白纯化，抗体保存(抗体,蛋白纯化,蛋白,电泳) - 免疫实验 - 生物秀
标题: 蛋白纯化，抗体保存(抗体,蛋白纯化,蛋白,电泳)
摘要: [蛋白纯化，抗体保存(抗体,蛋白纯化,蛋白,电泳)] 各位侠士，有两个问题请教大家，万望帮忙！！！！1 抗体制备完成后，在何种条件下保存或经何种方法处理后，能使其效价得以保持不下降或下降很少，这方面的报道好像没见过，请高人指点！2 我现在正在提纯一种蛋白，通过跑PAGE电泳后，将其中的一个条带切割下来，再跑水平电泳，将蛋白从胶中跑出来，用这种方法得到提纯蛋白太麻烦，不知那位高人能指点一种简单方法，万分感激！！！！ 关键词:[抗体 蛋白 蛋白纯化 电泳 条带 效价]……
各位侠士，有两个问题请教大家，万望帮忙！！！！1.抗体制备完成后，在何种条件下保存或经何种方法处理后，能使其效价得以保持不下降或下降很少，这方面的报道好像没见过，请高人指点！2.我现在正在提纯一种蛋白，通过跑PAGE电泳后，将其中的一个条带切割下来，再跑水平电泳，将蛋白从胶中跑出来，用这种方法得到提纯蛋白太麻烦，不知那位高人能指点一种简单方法，万分感激！！！！
回复1,抗体可以加等量的甘油在负20度保存，最好小量分装，避免反复冻融。2，蛋白的纯化有很多方法，比较简单的可以过柱。回复各位侠士，有两个问题请教大家，万望帮忙！！！！1.抗体制备完成后，在何种条件下保存或经何种方法处理后，能使其效价得以保持不下降或下降很少，这方面的报道好像没见过，请高人指点！2.我现在正在提纯一种蛋白，通过跑PAGE电泳后，将其中的一个条带切割下来，再跑水平电泳，将蛋白从胶中跑出来，用这种方法得到提纯蛋白太麻烦，不知那位高人能指点一种简单方法，万分感激！！！！1、关于抗体保存楼上的站友已经说了！无非是小量分装，低温保存！有的也可以冻干保存！这样的效价可以保持几年甚至几十年！2、关于蛋白提纯的问题我的看法是:a：采用亲合层析；b：过葡聚糖柱子；c：饱和硫酸铵沉淀；等等。a方法费用高，但纯度高；b方法费时，纯度还可以；c方法省时省力省钱，但纯度不是很高！各种方法各有千秋！你可以权衡采用！你的做法“提取”的蛋白是变性蛋白，这种蛋白不可复性！它的抗原位点是线形的！对其学特性研究没有任何价值！Good luck！回复1、关于抗体保存楼上的站友已经说了！无非是小量分装，低温保存！有的也可以冻干保存！这样的效价可以保持几年甚至几十年！2、关于蛋白提纯的问题我的看法是:a：采用亲合层析；b：过葡聚糖柱子；c：饱和硫酸铵沉淀；等等。a方法费用高，但纯度高；b方法费时，纯度还可以；c方法省时省力省钱，但纯度不是很高！各种方法各有千秋！你可以权衡采用！你的做法“提取”的蛋白是变性蛋白，这种蛋白不可复性！它的抗原位点是线形的！对其学特性研究没有任何价值！Good luck！是不是也可以用乙醇来沉淀啊，比如说浓度为95％的乙醇？还有就是，不同的蛋白质应该用不同浓度的硫酸铵沉淀，是不是？如何确定它的浓度啊？回复可以用有机溶剂来沉淀，但是注意变性问题，可用来测浓度，浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260
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【求助】求助啊：血清加了甘油以后还可不可以用于抗体纯化？
楼层直达：
这个帖子发布于8年零114天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
求助啊：血清加了甘油以后还可不可以用于抗体纯化？
有经验的同仁指点一下吧！
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影响应该不大。如果你用亲和层析法纯化，需要稀释很多倍血清,所以甘油将得到稀释，不会影响到结合和流速的。如果你用辛酸-硫酸铵沉淀法沉淀，影响就更小的。
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影响应该不大。如果你用亲和层析法纯化，需要稀释很多倍血清,所以甘油将得到稀释，不会影响到结合和流速的。如果你用辛酸-硫酸铵沉淀法沉淀，影响就更小的。
真的！那太好了！我还是个新手，不留意给血清里面加了甘油，现在在想还有没有办法补救。谢谢你哦~
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求助啊：血清加了甘油以后还可不可以用于抗体纯化？有经验的同仁指点一下吧！
个人觉得辛酸法、硫酸铵法都没大问题，这种血清我这么做过，就是注意辛酸法时血清体积的换算；亲合法纯化时最好如楼上所说，多稀释点，有人讲甘油会干扰抗体配体结合，可能主要是黏度影响把，不过我曾经也用亲和法纯化过加了甘油的血清（50%），稀释1倍后纯化的效果也还行。
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个人觉得辛酸法、硫酸铵法都没大问题，这种血清我这么做过，就是注意辛酸法时血清体积的换算；亲合法纯化时最好如楼上所说，多稀释点，有人讲甘油会干扰抗体配体结合，可能主要是黏度影响把，不过我曾经也用亲和法纯化过加了甘油的血清（50%），稀释1倍后纯化的效果也还行。
我就是打算用亲和法纯化的。现在检验了一下抗体，发现杂带非常多，连marker上居然都有条带。。。不知道这样的抗体纯化一遍以后有好的可能吗？
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多抗虽然会有一些非特异的条带,但是你的marker上也有反应条带,我认为你一抗浓度太高了,有时候合适的一抗浓度可以减少多抗的非特异条带.
用抗原特异的亲和层析可以有很好的结果,用ProteinG/A的亲和层析法一般都能提高一些效果,但是也有可能会丢失一些目的抗体.(目的抗体在血清中只占1~10%)
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你要实在是担心可以透析一下啊，这样甘油不就透析掉了吗。
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