Hind III 和Sal I双酶切反应体系如题，谢谢
以20微升体系为例方法一Buffer
Tango™ 4微升 HindIII
微升Incubate at 37°C 2-3小时方法二Buffer R
2.4Incubate at 37°C 2-3小时注意：最好用第一种方法，效果更好
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Xba1和Kpn1双酶切
想要将目的基因用潮霉素替换掉，上游下游片段各1KB，上游片段加了Kpn1和Xba1的酶切位点，上游片段连入了T载体中，做双酶切，却切不开，上游引物
Up-f2：ggggtaccGGTCGTCAATCTCGTCATT&&Kpn1
Up-r2：gctctagaAGACGAAGAGAACAAAGGC&&Xba1
大家帮我看看是什么问题，内切酶用的Thermo的快速内切酶
你好，我用的高保真酶，也会突变吗？
与PCR酶没有关系，我是想看看酶切位点处是不是连接的时候出了些突变。一开始看见你帖子，我第一想到的是甲基化，但是发现并不是甲基化的原因。所以只要测序看看了，用T载体上的通用引物测序，就可以看到你酶切位点处的序列是不是正常。
pUCATPH这个是从别的实验室借的
能共享吗？我们也可以用实验室的跟你交换
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扫描下载送金币用TAKARA的HindⅢ和XbaⅠ双酶切33.5μg基因组DNA，按照说明书来计算，需要酶切4个小时才能完全切开。但是限制性内切酶的活性能保持多久呀（37 ℃条件下）？
酶只是一种蛋白质，理论上讲，如果环境条件不变，那么蛋白就不会发生变性，酶的活性也就可以一直保持下去。
酶是蛋白质，这你是知道的。蛋白质变性的温度是多少？具体的蛋白变性温度各有不同，但是通常是65 ℃以上，只要不超过这个温度就不会变性。HindⅢ和XbaⅠ在37 ℃上反应，说明这是两个酶的最适活性温度。只要你加入的酶量足够（参照相关文献），那么在4个小时之内，切完所有的DNA，那是没有问题的。不用去考虑酶性的问题。简单一点儿，商业的东西怎么可能会忽悠你？人家还等着你去再买一次呢。...
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【求助】TaKaRa的BamHⅠ和XbaⅠ两个酶双酶切好切吗？如何切？请大侠指导。
楼层直达：
这个帖子发布于4年零66天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用的载体是PBBR1MCS2
不知道邀请谁？试试他们
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这两个酶切位点相隔多少碱基？如果在10 bp以内，建议分步酶切，两个酶切之间做个乙醇沉淀。双酶切之前用这两个酶做个单酶切看看效果，xba I容易受甲基化影响，可能切不开。
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两个酶切位点之间只有6个bp，这能切开吗？分布切时，中间回收时，可以用胶回收试剂盒吗？
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6个bp很短，而且这两个酶布适合同时使用，建议你进行分两步酶切。同时二楼的同学也指出XBA1的甲基化的问题，如果条件允许，把环状载体转化JM110感受态，去除甲基化的影响，在进行酶切。
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推荐一个双酶切的软件，可以精确计算酶的用量，还同步推荐适合双酶切的buffer。而且还列出了甲基化对酶切活性的可能存在的影响。目前可以免费使用，用户名和密码都是test，
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感谢大家，我实验室没有JM110这个菌株，呵呵，我先切了看看
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两个酶单切的时候都挺好切的，酶切体系参照酶的说明书。
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关于丁香园帮忙告诉几个有xba1和hind3酶切位点 的原核表达载体 - 实验交流 - 生物秀
标题: 帮忙告诉几个有xba1和hind3酶切位点 的原核表达载体
摘要: [帮忙告诉几个有xba1和hind3酶切位点 的原核表达载体] 感谢回答问题的朋友。 关键词:[酶切位点 原核表达 载体]……
感谢回答问题的朋友。
pet-15b,17b,28a,30a,32a等,
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