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人胎肝细胞长期培养及重组HBV腺病毒感染.pdf 59页
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南方医科大学
硕士学位论文
人胎肝细胞长期培养及重组HBV腺病毒的感染
姓名：王雪刚
申请学位级别：硕士
专业：内科学（传染病）
指导教师：侯金林
硕士学位论文
人胎肝细胞长期培养及重组HBV腺病毒的
硕士研究生：王雪刚
指导老师：侯金林教授
乙肝病毒(|{BV)感染仍然是一种严重影响人类健康的全球性疾病，全球大
约有20亿人曾经感染过乙肝病毒，其中超过3．5亿人成为慢性感染者，每年可导
致120万患者死亡，而且每年有32万患者死于llBV感染导致的肝癌。我国属于肝
炎高发区，现患乙型肝炎为2800力．。
乙肝患者中25％～40％最终将死于肝硬化和肝癌，失代偿性肝硬化的5年生存
率约为15％，对于重症肝病的治疗，以保守治疗为主，不能解决根本问题，最终
只能寄希望于原位肝移植。
由于健康供体肝脏的严重短缺且费用昂贵，仅有少数需要肝移植的患者可
以接受原位移植治疗。肝细胞移植技术为解决这一矛盾提供了新的思路和方法，
同时也可能更适合我国大量患者的经济承受能力。肝细胞移植治疗重症肝病，
具有创伤性小、费用低廉、安全性高，免疫原性小，而且一个供体可以为多个
受体提供细胞来源。经过多年的基础研究，肝细胞移植已经初步应用于临床，
目前已有多位患者接受了同种异体肝细胞移植或自体肝细胞移植(应用或不应
用基因修饰)，证实肝细胞移植对于治疗肝脏遗传性疾病及各种原因引起的肝衰
竭有应用价值。
目|j仃用于临床肝细胞移植的细胞主要来源包括：成体肝细胞、胎肝细胞。
处于临床前研究阶段的细胞束源包括：异种肝细胞、肝前体／千细胞、永生化肝
细胞、基因修饰自体肝细胞移植等。
本文主要探讨胎肝细胞的长期培养及重组1．3拷贝HBV腺病毒感染人胎肝
1、为肝细胞移植的临床应用及科研提供可靠的细胞来源。
2、建立长期培养胎肝细胞的平台，为进一步研究胎肝细胞做基础。
3、建立重组1．3拷贝HBV腺病毒感染胎肝细胞的体外模型，观察了解HBV在胎肝
细胞中的复制表达情况。
1、材料与方法；
1、胎肝细胞的分离
1．1胎肝来源于南方医院妇产科流产胎儿。
1．2采用改良两步胶原酶灌注法，经脐静脉灌注胎肝分离胎肝细胞。
2、胎肝细胞的冻存：胎肝细胞的保存：冻存细胞密度为5—7×10“／fIIL：冻存液
温法，即4&C、60分；一20℃、30分；一80℃、184,时；最后置于液氮中保存。
3、胎肝细胞的复苏：采用常规快速复温法，液氮中取出冻存管，迅速投入37～
38℃水浴中，1分钟快速融化。
4、长期培养胎肝细胞方法的建立：胎肝细胞在用血清培养基贴壁生长4小时后，
F12基础培养基洗涤细胞，以去除培养液中胎牛血清、造血细胞及未贴
壁的胎肝细胞。更换用Ham'sFl2基础培养基做母液，其中添加地塞米松、胰岛
素、胰商血糖素、转铁蛋白、表皮生长因子和生长激素等配制成不含血清的
条件培养基，每2天更换一次新鲜配制的条件培养基，
5、重组1．3拷贝HBV腺病毒感染胎肝细胞
5．1重组1．3拷贝HBV腺病毒：本室保存。
5．2胎肝细胞：我科分离冻存的胎肝细胞，细胞活力为84％。
5．3重组1．3拷贝HBV腺病毒感染胎肝细胞，孵育24,时后，洗涤细胞10次，细胞
硕士学位论文
培养7天后收集上清，培养上清中HBsAg、HBeAg的表达水平用雅培全自动微粒
子酶联免疫分析法进行检测；上清中HBVDNA载量采用实时荧光定量
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注射生长激素安全么?
有些人害怕生长激素有副作用，通过正确的使用是很安全的。 【针对邹刚网友的问题在此做一个解答】 国家控制用激素类的药是指没有激素使用适应症的情况下滥用，而医生是在经过检查之后，认为有使用适应症才会建议打生长激素。 生长激素的作用机理是促进骨骺线性增长，只有性激素才会促进性发育的，打生长激素是不会引起性早熟的、特发性矮小、轻度的水肿、序列及蛋白质空间结构与人垂体生长激素完全一致，只要在医生指导下，生长激素在这些适应症治疗中已经使用了几十年，具有较好的安全性。常见的副作用有：注射部位的红肿，一过性的头痛，经过对症处理都可以恢复正常。 最早的生长激素是从刚死去的人脑垂体中提取出来的，自1958年在美国用于儿童生长激素缺乏症的治疗，1985年体外重组人生长激素合成成功，减量或停几天就会好转，再用一段时间逐步适应就好了。同时，还有由于生长加速致关节痛等，这些反应一般程度都较轻，由于生长加速，甲状腺素的需要量随之增加，其实这是完全没有必要担心的，治疗期间加用小剂量甲状腺素就可以纠正，另外，目前美国FDA批准生长激素适应症包括：儿童生长激素缺乏症、慢性肾功能不全肾移植前、HIV感染相关性衰竭综合征、特纳氏综合征。其他严重副作用极为少见、成人生长激素缺乏症，因为人工合成的生长激素的氨基酸含量、小于胎龄儿，这是由于水钠储留造成的，由于生长素激素抑制糖代谢，偶尔也会出现血糖增高者，因此这两项指标在用药期间需要定期复查，生长激素开始在临床大量使用注射生长激素已经成为专家公认的最有效的增高方法之一。生长激素是人体自身分泌的促进生长发育的最主要的激素，但是很多矮小患者因疾病或其它的因素引起生长激素缺乏，这样就必须通过注射人工合成的生长激素才能达到甚至超过同龄人的身高，有导致甲状腺功能减低的可能、软骨发育不全等
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