半定量RT-PCR技术半定量是什么意思_百度拇指医生
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?半定量RT-PCR技术半定量是什么意思
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就是说拖过条带亮度比较，知道是上升还是下降，大概变化了多少，但是不是具体的多少倍。具体的要做定量
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半定量RT-PCR技术服务
最新科研速递：上海中医药大学陈瑜教授和凯斯西储大学Krzysztof Palczewski教授合作的一篇研究论文，研究证实协同作用的G蛋白偶联受体激动剂与拮抗剂可以阻止光感受器细胞退化。研究人员采用了一种系统药理学方法，利用光诱导视网膜退化小鼠模型来鉴别出潜在联合疗法。研究人员证实联合使用对不同的GPCRs起作用的药物，显示出协同活性保护了视网膜免于光诱导的退化，甚至是在低剂量给予每种药物时。这项研究由此支持了采用一种系统药理学方法来鉴别视网膜病变的治疗方法，并且这一方法还可以扩展应用于其他的复杂疾病。摘自&《Science》期刊旗下《Science Signaling》杂志&
由此可见，如今细胞学、生物学、医学等各个领域对技术的要求越来越高。
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半定量RT-PCR技术服务|实验技术|细胞培养一般步骤：
DMEM培养基(DMEM/F-12，，货号，添加NaHCO3 2.0g/L)，85%;马血清，10%;胎牛血清，5%。气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
传代次数 1:3~1:8传代;每2~3天换液1次。
半定量RT-PCR技术服务 由上海斯信生物提供，为你的科研项目、实验研究提供重要的技术基础，是各高校及研究所的细胞学、免疫学、病理学、生物医学、临床医学等实验室常需技术服务。
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公司主营产品：细胞株和菌株、胎牛血清、、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、、实验耗材和消耗品、仪器设备。
公司提供其他除半定量RT-PCR技术服务外同等专业相关实验相关技术如下：
半定量RT-PCR技术服务BFISH01荧光原位杂交FISH服务
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RT-PCR方法
半定量 RT-PCR 方法一
反转录—第一链 cDNA 的合成
参照Promega RT-PCR试剂盒说明书进行。取2 μg植物 total RNA，与Oligo（dT）引物以0.5 ug primer/ug total RNA 的比例混合，体积不超过11 μL，70℃ 5 min，冰上冷却。加入各种反转录试剂混合：
10× reverse transcript buffer
RNase Inhibitor
dNTP Mixture
Reverse Transcriptase
RNase free Water 补足
混匀后，42℃ 1 h；75℃ 10 min。
PCR 合成第二链
取第一链产物0.5 μL为模板，按常规PCR程序进行PCR扩增。以拟南芥Actin7基因为反应的内标对照。
反转录-聚合酶链反应（RT-PCR扩cDNA）
第一步：1.0 μg拟南芥总RNA和1.0 μL oligo(dT) 引物，用水稀释到总体积5.0 μL的体系，70℃加热5 min后，迅速置冰上。
第二步：在反转录作用下由随机引物引导反转录成cDNA第一条链。反应体系如下：
表1 RT-PCR反应体系
Table 1 The reaction system of RT-PCR
MgCl2（25mM）
5×Rxn Buffer
dNTP Mixture（25mM）
rRNasin Ribonuclease inhibitor
Reverse Transcriptase
RNAtal 2.0 μL 4.0 μL 1.0 μL 0.5 μL 1.0 μL 1.0 μg
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