PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别?希望能稍微介绍一下这两种PCR的原理
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右）,DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.普通PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）.以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强.在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值.这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况.
实时荧光定量PCR的结果 亮度越强代表着什么？
体系中的核酸越多。（如果染料足够的话）
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扫描下载二维码实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用--《食品与发酵工业》2015年03期
实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用
【摘要】：实时荧光定量PCR技术是一种新兴的核酸定量分析技术,与普通PCR定性分析相比,具有简单高效、准确灵敏、实时分析等更多的优势,是一项实用性很强的技术方法。文中主要对实时荧光定量PCR技术的操作原理、荧光类型及其在食品检测和科学研究领域中的应用进行综述。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：TS207.3;O657.3【正文快照】：
近年来,实时荧光定量PCR技术因其独特的优点,被广泛的应用于兽医、畜牧、动物检疫、水产养殖等研究领域,成为分子生物学研究中一项重要的技术工具。在食品检测方面也都有了很大进展,包括致病菌检测、转基因食品检验、食品掺假检测等。1实时荧光定量PCR技术概述1.1实时荧光定量
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09年查出乙肝病毒携带现在依据这个定量看严不严重会不会传染
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共2条医生回复
因不能面诊，医生的建议仅供参考
职称：医生会员
专长：皮肤科
&&已帮助用户：38169
指导意见：你好，你的检查结果考虑乙肝病毒定量有一点高 表示有一定的活性和传染性 ，遵医嘱耐心治疗，
职称：主治医师
专长：皮肤科
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指导意见：你好，据你所述，乙型肝炎是由乙型肝炎病毒感染引起来的，可以抽血，化验乙肝五项，肝功能，做肝胆B超检查，明确诊断，酌情治疗。
问定量实时荧光定量PcR2·26
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专长：消化不良、婴儿腹泻、婴儿湿疹
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指导意见：这个病毒复制程度还是比较高的，需要在临床医生的指导下积极进行抗病毒治疗的。
问实时荧光定量的正常参考值是多少
职称：医生会员
专长：消化不良、婴儿腹泻、婴儿湿疹
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指导意见：你说的是cpr的检查吧，具体的是检查的什么项目你一个详细的说明，
问用实时荧光定量pcr检查出怀孕吗
职称：医师
专长：功血,子宫息肉,子宫肥大,阴道毛滴虫病,避孕后闭经综合征,阴道念珠菌病,细菌性阴道病,无排卵型功能失调性子宫出血
&&已帮助用户：1375
问题分析：你好，建议你最好用晨尿做一个早孕试纸 测试看一下情况。意见建议：建议你保持心情愉快，减少思想压力，禁食生冷辛辣刺激性食物。
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职称：医师
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指导意见：你好，一般考虑可能存在免疫力低下的问题，可能存在病毒性感染引起的，需要进一步检查药物修复调理的
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职称：医师
专长：中医内儿妇科常见病、慢性病
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问题分析：你好。实时荧光定量PCR3.35E+07IU/mL高于正常参考值5.O0E+O2，不正常，说明乙肝病毒复制活跃，传染性强。意见建议：再检查肝功，如果正常，精神状态基本良好，不用治疗，否则要考虑治疗。
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评价成功！实时荧光定量PCR 问题汇总
&1.&定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？ &&&&　　按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭信号收集软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。 2.&哪些种类的反应管和盖子适合定量PCR实验使用？有何需要注意的地方？ &&&&　　定量PCR实验可以使用以下耗材：96孔光学反应板配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖。ABI公司生产的定量PCR耗材的具体使用方法和货号见下表： &&3.&为什么要定期对电脑进行磁盘碎片整理？怎样整理？ &&&&　　当运行实时定量PCR仪及使用软件分析实验结果时，计算机会删除并创建若干文件，计算机硬盘的空闲空间会被分割成越来越多的小块。当硬盘驱动器上文件以分解的碎片存储时，程序需要更长的时间才能存取文件，因为必须多次寻找文件碎片以存取不同的片断。碎片整理实用程序将一个文件分解开的多个碎片合并在一起，并存储到硬盘的同一个位置，从而清除文件碎片，进而优化系统性能。碎片整理的方法如下： &&&&&&&&& 在Windows桌面上，选择开始(start),我的电脑(My computer)。 &&&&&&&&& 在(我的电脑)窗口中，用鼠标右键单击硬盘驱动器，并选择(属性)property。 &&&&&&&&& 在(属性)对话框中选择工具(Tools)选项卡，单击开始整理(Defragment now)。 &&&&&&&&& 单击碎片整理(Defragment)。 &&&&&&&&& 当显示&碎片整理完毕&对话框时，单击（确定）。 &&&&&&&&& 在&本地磁盘属性&对话框中，单击（确定）。 &&&&&&&&& 为计算机机中剩余的驱动器重复如上步骤。&4.&何时执行windows service pack更新？ &&&&　　不要执行该操作。除非美国应用生物系统公司代表通知您更新操作系统，否则请不要更新控制定量 PCR 仪的计算机的操作系统。新版本的 Microsoft Windows 操作系统有可能与SDS 软件存在冲突，并导致仪器不能正常运行。如果您希望安装 service pack（更新包）以更新操作系统，应查看随 SDS 软件提供的版本说明，避免兼容性问题。5.&应该备份哪些数据？ &&&&　　应该定期备份您的实验数据，备份频率推荐每周一次，用光盘刻录。同时您也应该备份定量PCR仪的各种纯荧光光谱校正文件、背景文件和安装验证实验数据，这些文件所在的目录是C：/Appliedbiosystems/SDS Document。下图是校正文件的样本。
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&6.怎么样的实验室环境才能保证仪器设备正常运行？ &&&　　&良好的实验室环境有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。推荐做到以下几个方面： &&&&电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。 &&&&通风：仪器的通风应该没有阻挡。 &&&&温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10-30&C之间。 &&&&湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。 &&&&空间：易于操作，安全。7.&&怎样判断仪的样本加热块是否被污染？怎样清除污染？ &&&&　　一个办法是运行背景校正反应板，当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号，则表明该孔可能被荧光污染物。另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下，执行ROI的校正，当某个孔的信号明显高出其他孔时，则表明该孔被污染。 &&&&清除样本加热块污染的步骤如下： &&&&用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。 &&&&吹打数次。 &&&&将废液吸入废液杯中。 &&&&重复以上步骤：乙醇三次，去离子水三次。 &&&&确认反应孔中的残留液体蒸发完oBoss.C
8.&什么是背景校正？多长时间执行一次背景校正？ &&&&　　背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60 &C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件，从实验数据中扣除背景信号。 &&&&因为背景荧光的信号强度随着许多外界因素（比如外来的污染、反应板/反应管的生产厂商不同、水的纯度等）而变化，所以推荐定期进行背景校正，一般每三个月到半年校正一次。9.&什么是纯荧光校正？多长时间校正一次？ &&&&　　纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器&认识&各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。 &&&&推荐每隔半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。10.96孔板怎样封膜？ &&&&　　当使用96孔板做实验的时候，推荐使用光学膜代替盖子来密封反应孔。正确的封膜方法是：先沿着96孔板的纵向压膜，然后横向，最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示：
& &11.使用单管或8连管做实验时，在样品加热块上应该怎样安排放置？ &&&&　　使用单管或8连管做实验，并且样本数量不多的时候，建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品，最好是纵向放置，并且优先放在第6列或第7列，然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜，各个反应管的受力和受热都比较均匀，提高孔与孔之间的数据精密性。12.绝对定量与相对定量有什么区别？ &&&&　　绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。举例来说，如果研究项目中包括处理过的和未经处理的对照样本，通常可以将未经处理的样本指定为基准，规定其目的基因浓度为100%，将经处理的样本的定量结果除以对照样品的定量结果，就可以计算各个处理样本的基因含量相对于未处理样品的百分比。 &&&&绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品，必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线，也可以不做标准曲线。 &&&&&相对定量实验有两种方法：标准曲线法和CT值比较法。如果使用标准曲线法，可以使用绝对标准品，也可以使用相对标准品，而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。 &&&&CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分比，其计算公式是&&&&&&&&&&绝对定量的数据易于理...
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