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K.pneumniae XJPD-Li甘油脱水酶与复活因子的克隆表达及其复活关系研究.pdf85页
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K.pneumniae XJPD-Li甘油脱水酶与复活因子的克隆表达及其复活关系研究.pdf
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要 以自主筛选的产1，3-丙-二醇菌株为基础，研究了甘油脱水酶的催化反f每特性，通过克隆和表达
甘油脱水酶与复活Wf，定颦研究了复活冈子_手II其它内素与火活甘油脱水酶的复活关系。通过研究
得到以F结果：
鉴定后命名为足pneumoniae g'L‘。5L发酵罐批式发酵袭明该菌住
40* 2，pfl8，0，硫酸铵6．OgrLl，底物H+油209-L‘和葡萄塘2．5
8h内可消耗209?L1汁油，I，3-丙：醇浓度达12．2g?L。，甘油的脖尔转化率达理论值0．75。补料批
菌是具高转化率的1，3-丙二醇生产菌株。 以X．IPD-Li菌甘油脱水酶为酶源研究了其酶促反应特性。结果表明该酶的表达合成与菌体生妖
早现明显的耦合关系。催化反应的最适温度为40℃。且在40"C以卜酶的稳定性较好。最适pH值为 0．3mol?L 1希1
别以甘油和1，2-丙一：醇为底物时鼹高反麻浓度分别为0．15mol?L
1左右，动力学常数蜀， 利川PCR方法从XJPD．Li基冈坌fIDNA中分别克隆山甘油脱水酶荩闪dhaBCE和什油脱水酶复活
冈子基因dhaFG片段。分圳构建表达载体PET-28aI + -dhaBCE霸I
BL21 DE3 ，在25"C、O仉。为0．6时HJ0．4栅IPT6诱导后均成功表达出具有生物活性的目标蟹向，
甘油和氧火活的脱水酶活力均恢复90％以上。 重组菌中甘油脱水酶在以甘油为底物催化反应时，3min酶活就损火约35％，Ih后活性仅剩 umol-L一、甘油脱
的复活效果确定其最佳的复活条rl：为：ATP50,tool?L～、Mg”lOmol?L～、辅酶Bt：3 97．3％。
水酶与复活网子的质茸比4：l，在此条tl：F甘油蓿l氧火活脱水酶的活力可分别恢复98．9％ 11
各因子对甘油脱水酶的复活贡献拌度研究表明。脱水酶与复活冈子质域比和ATP对脱水酶有效复活
的贡献榉度最人，但四种刚f均是甘油脱水酶复活的必需网子。复活
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