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【求助】新手上路----10%SDS？
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这个帖子发布于10年零1天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
菜鸟问题：10%SDS需要调pH值吗？我看有的版本说要调（调到7.2），有的没有提。要是不调对试验的影响大不大？我们没有PH计，要上别人那里去调。挺麻烦的。 还有，不同厂家的SDS是否不能一起配？我同学配的时候，不够了就把两个厂家的混杂在一起配了，结果室温下是浑浊 的。
不知道邀请谁？试试他们
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不用调，没关系
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1、试过用超声清洗仪来助溶，其产生的热量有助于SDS溶解又不产生气泡。2、或者直接用较高温度的蒸馏水（微波一下）配置，溶解度增大。放置到室温即可使用。3、不必调PH值。4、不同厂家的SDS质量不一样，溶解度有差别，但不会影响实验效果。关键是用冷水配往往混浊。
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是的 最好先加一点点水 让其成为糊状 然后加水 然后直接超声 最后定容
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要调的话不要用pH计，里面的氯化钾遇到SDS会沉淀
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冰风颤木 是的 最好先加一点点水 让其成为糊状 然后加水 然后直接超声 最后定容请问是用细胞用的超声粉碎仪吗？时间什么的怎么设置啊？
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关于丁香园【求助】SDSPAGE蛋白漏样求解决方法 - 经验共享 - 分析测试百科网 - 分析测试百科网
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【求助】SDSPAGE蛋白漏样求解决方法
查看完整版本请点击这里：
样品跑离点样孔以后就发现了如图所示的漏样问题，因为要做WB ，导致最后的结果没有意义~
浓缩胶5% 分离胶12%，均是按着宝生物的配方所配置~
希望得到相应的解决，再次谢过了~查看完整版本请点击这里：
wmp1234 ( 16:25:37)
玻璃板肯定是洗干净的，这个现象也不是每次都有 就是感觉时不时的发生，所以很是费解~
ha111 ( 16:26:25)
请问楼主的问题解决了吗？换个loading buffer试试？
IAM007 ( 16:26:44)
我感觉是你的胶或者板不好
avi317 ( 16:27:25)
请问楼主的问题解决了吗？换个loading buffer试试？
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我是准备换个BUFFER试试，然后再减少上样量，实验还在继续中~
张先生 ( 16:28:06)
我感觉是你的胶或者板不好
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这个应该没问题的，换新的也是漏，感觉是样品和BUFFER的问题~还在检验中
ero11 ( 16:28:56)
换个人操作试一下，有时候加样时拿枪太用力的抵在小玻璃板上导致有的空下面的胶与玻璃板之间剥离。。。。。
张先生 ( 16:29:54)
QUOTE:原帖由 ero11 于
16:28 发表
换个人操作试一下，有时候加样时拿枪太用力的抵在小玻璃板上导致有的空下面的胶与玻璃板之间剥离。。。。。 嗯，已经很注意这个问题了，这个不是主要原因~呵呵
flower-201 ( 16:30:59)
BUFFER的问题，其中一层胶或两层胶缩得过快，导致两层胶之间产生缝隙。
utt0989 ( 16:31:19)
不知道楼主找到原因没，我以前也同样遇到过这种情况，换了个loading,减少上样量就好了。
张先生 ( 16:32:13)
BUFFER的问题，其中一层胶或两层胶缩得过快，导致两层胶之间产生缝隙。
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BUFFER我也是换的新买的，结果早上电泳的时候还是漏了，上样体积不大25微升，其中试剂都是新配的。找不到原因，很是纠结~
张先生 ( 16:32:31)
不知道楼主找到原因没，我以前也同样遇到过这种情况，换了个loading,减少上样量就好了。
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早上换了buffer，碧云天的，上样量25微升，结果问题还是发生了，问了能问的人，按着别人给的各种建议，还是没解决，我做的是半定量实验，这个问题解决不了，实验就停滞不前~
mysmdbl ( 16:33:00)
还有个可能就是浓缩胶有点干，收缩了...
此外25ul不少了，上10ul漏不漏？
遇到这种情况不如买几块预制胶先把试验给做了，你的时间不至于不值那点钱吧
张先生 ( 16:35:07)
QUOTE:原帖由 mysmdbl 于
16:33 发表
还有个可能就是浓缩胶有点干，收缩了...
此外25ul不少了，上10ul漏不漏？
遇到这种情况不如买几块预制胶先把试验给做了，你的时间不至于不值那点钱吧 ... 我们实验室跑蛋白电泳跑了很久了，别人那都不是问题，到我这就是问题了
，所以很是郁闷~目前这个问题还没有得到解决~
duoduo ( 16:35:27)
我用我们实验室的坏了的一套装置做的时候也出现过这种情况，坏在关门夹板的那个门的轴断了，bio-rad的，我当时估计的是没加紧导致玻璃板与胶之间有空隙，检查一下你的电泳槽是不是有什么问题，什么原因导致夹不紧了？希望楼主解决问题，静待你的好消息
张先生 ( 16:35:54)
我用我们实验室的坏了的一套装置做的时候也出现过这种情况，坏在关门夹板的那个门的轴断了，bio-rad的，我当时估计的是没加紧导致玻璃板与胶之间有空隙，检查一下你的电泳槽是不是有什么问题，什么原因导致夹不紧了？希望楼主解决问题，静待你的好消息
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我的问题还是没有得到解决啊，现在买的试剂盒做胶还是漏啊，十微升的上样体积啊~
caihong ( 16:38:05)
出问题最烦了~要慢慢排查~不能一下子变多个变量，到头还是弄不清是什么的原因。
低电压，低上样量试试看。
张先生 ( 16:38:49)
出问题最烦了~要慢慢排查~不能一下子变多个变量，到头还是弄不清是什么的原因。
低电压，低上样量试试看。
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嗯是的，我换了别人的装置，浓缩是低电压，还在继续中，谢谢关注
lxh031 ( 16:39:22)
我有时也遇到这样的问题，只是不太严重，所以也没花太多的精力关注它。不过我感觉有可能是玻璃板用的时间过长导致的，换一套新的玻璃板或者上海生工有玻璃硅化的试剂，把旧玻璃板硅化一下再试试。
希望楼主能找到原因，我也非常关注这个问题。
yao ( 16:40:03)
我也遇到这样的问题！情况和你如出一辙，我上样量才10微升，电压80V，一直这样，晚上睡也睡不好，怎么办啊？
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