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即送15丁当
【心得】关于全血的保存-DNA提取-pcr个人经验（经常在线回复）（血中rna提取在后边ps：5）（组织中提DNA ps6）
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ivanxiao 楼主，我用的肝素管，全血放在-30，这样能存多久，而且肝素管是不是不得行，谢谢你！ 很久，2年没有问题
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可爱的李明芳 楼主，我是新手，师姐们提取的RNA做实验，实验期间一直放在-20保存，做完以后才放到-80，一年以后还能用吗？我比较担心降解不能用会降解，基本能用
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sunshine0825 你好，楼主，我用的天根试剂盒DP318，提取血的DNA，是用抗凝管抽的血，放在4度冰箱保存了7天之内，然后提取的DNA，可是提出来浓度很低，只有几十ug/ml，纯度在1.8-2.0，每次加血都加300-400ul，加CLi细胞裂解液加2倍，之后都是按照说明书做的。因为一直浓度只有几十，我以为是裂解细胞不彻底，在裂解那一步我还重复了一次，可是浓度一点都没升高。不知道究竟哪里出错了？想提取DNA做突变测序呢，不知道能做出来吗？4度放的时间太长，如果是ug那也差不多，就是这个浓度了，你提取的不差
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sunshine0825 用天根法提取，加无水乙醇那一步，做了很多次都没有出现过絮状沉淀没有就没有接着做，然后跑胶看看即可问题不大
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瞬间永恒0109 你好，问一下楼主，我刚开始做实验，很多都不懂，想问下我想检测dna，抽病人的血就用普通的采血管就行了吗？还要加什么东西吗？听说现在可以口腔唾液检测，我取唾液检测是不是也可以呢？edta抗凝管最好
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mo 我也遇到了跟楼主一样的问题，我都是手动把它打散的，下一步加了tb和蛋白酶k以后溶液基本是透亮的 我一般是让蛋白酶k这一步延迟到2小时，管他有没有团块
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楼主，你好，我有个问题想请教你。我想冻存一批人外周血单个核细胞（采用的血清是全血离心之后的血清），但是冻存后复苏的效果一直不佳，能否指点一下如何怎样冻存效果更佳，谢谢！
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licheng04510 楼主，你好，我有个问题想请教你。我想冻存一批人外周血单个核细胞（采用的血清是全血离心之后的血清），但是冻存后复苏的效果一直不佳，能否指点一下如何怎样冻存效果更佳，谢谢！这个不清楚，我这样提取DNA做遗传学的，不做细胞
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楼主辛苦了。真心感谢
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感谢楼主的经验分享，我想请教点问题，主要是样本处理的问题。之前也用过天根的试剂盒进行DNA提取，当时是采了抗凝血直接取了200ul就提了，其他的血样本冻存。现在需要重新抽提，冻存的样本是需要先迅速37℃溶解后混匀了取样进行抽提，其他的再冻起来么？还是需要怎样处理的过程？因为样本比较珍贵，怕损坏了，请指教，谢谢！
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楼主好，读了您的帖子受益良多，非常感谢！我想请教两个问题：1.采全血后，打算两个月内提取DNA, 全血需保存在-20还是-80？ 2. 另外看到您说自己是研究遗传方面的，我想请教下，做50K SNP 的话，大概需要多少DNA。谢谢，还望不吝赐教！
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xh1103 楼主，天根提取的DNA保存时间那么短吗？我用的是天根的噢，提取后放在-70度保存，不知道会不会对后续的实验有影响放70度没有任何问题，哪个公司的都可以保存2年以上
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jiaoyongzhuo 楼主，你好，你提供的信息很好啊，谢谢。。希望大家都能像你这样，常把自己的一些经验分享给大家，我们一起进步。我有个问题，我也是从全血提DNA，但是之前没考虑到，我采血用的是肝素钠抗凝管，据说肝素钠对后面的PCR有影响，有没有什么挽救措施啊。非常感谢问题不大，就PCR来说肝素也不会有影响
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tnt6341811 感谢楼主的经验分享，我想请教点问题，主要是样本处理的问题。之前也用过天根的试剂盒进行DNA提取，当时是采了抗凝血直接取了200ul就提了，其他的血样本冻存。现在需要重新抽提，冻存的样本是需要先迅速37℃溶解后混匀了取样进行抽提，其他的再冻起来么？还是需要怎样处理的过程？因为样本比较珍贵，怕损坏了，请指教，谢谢！DNA保存比血更容易，你可以全部的血都提取了，然后把DNA分成2批冻存比较好
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爱笑的头头 楼主好，读了您的帖子受益良多，非常感谢！我想请教两个问题：1.采全血后，打算两个月内提取DNA, 全血需保存在-20还是-80？ 2. 另外看到您说自己是研究遗传方面的，我想请教下，做50K SNP 的话，大概需要多少DNA。谢谢，还望不吝赐教！-20和-80都可以，SNP吗看你用什么方法了，你确定方法后问问公司即可
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楼主你好，想请教一下，我打算做外周血单个核细胞（PBMC）荧光定量PCR，想血标本收集齐之后集中做，有什么办法可以长期保存而不影响荧光定量ＰＣＲ，看到文献中说提出PBMC后加入trizol液裂解5min后放入-80°冰箱中保存，这样可以吗，还是有更好的方法,O(∩_∩)O谢谢！
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楼主你好，想请教一下，我打算做外周血单个核细胞（PBMC）荧光定量PCR，想血标本收集齐之后集中做，有什么办法可以长期保存而不影响荧光定量ＰＣＲ，看到文献中说提出PBMC后加入trizol液裂解5min后放入-80°冰箱中保存，这样可以吗，还是有更好的方法,O(∩_∩)O谢谢！这种方法可以的，当时时间不能太长，1个月没有问题在长就不好说了，我放过1年年结果不太理想，，我建议你收集起来1个周提取一次RNA，然后逆转录为Cdna,CDNA放到-80去，1年不会有问题我试过了，按道理来说可以2-3年不会有问题
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楼主，您好！请问EDTA抗凝管抽取人的血液，4度冰箱放置一星期对提取DNA有影响吗？谢谢！
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楼主您好，我跟楼上一样，不过在4℃放了一个月了，这样DNA会不会降解了很多了，还能提取吗？谢谢
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zm 楼主你好，想请教一下，我打算做外周血单个核细胞（PBMC）荧光定量PCR，想血标本收集齐之后集中做，有什么办法可以长期保存而不影响荧光定量ＰＣＲ，看到文献中说提出PBMC后加入trizol液裂解5min后放入-80°冰箱中保存，这样可以吗，还是有更好的方法,O(∩_∩)O谢谢！不保险，最好把RNA提取好然后逆转录为CDNA后可以保持2年没有问题-80度
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baobei 楼主，您好！请问EDTA抗凝管抽取人的血液，4度冰箱放置一星期对提取DNA有影响吗？谢谢！会影响，估计困难，提取一下试试运气好应该没有问题
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八云白 楼主您好，我跟楼上一样，不过在4℃放了一个月了，这样DNA会不会降解了很多了，还能提取吗？谢谢会影响，估计困难，提取一下试试运气好应该没有问题，肯定会讲解，搞不好都没有了
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y9798912 八云白 楼主您好，我跟楼上一样，不过在4℃放了一个月了，这样DNA会不会降解了很多了，还能提取吗？谢谢会影响，估计困难，提取一下试试运气好应该没有问题，肯定会讲解，搞不好都没有了谢谢，试着做了还有，不过产量比较少了，200μl全血只有2μg左右
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我们提的DNA 是做Taqman探针
。用的天根的非离心柱法。说明书说，3ml抗凝血 提取的DNA保存在300UL tb溶液里。楼主，您可否知道做taqman的DNA 有何要求。比如说，就按照3ml血液---300ulDNA保存在TB里？还是要稀释了保存？
做Taqman 需要DNA溶液的量是多少啊 ？ 如果楼主不能回答我的问题的话，那我又应该在哪里去查询相关信息 呢。科研小白，在此谢过。
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eileen311 edited on
你好，我现在有一批血样已经提取了白细胞，现在想做基因多态性研究，看到提取DNA有酚-氯仿抽提法和碘化钾提取法，哪种方法比较方便而且经济呢？还有做PCR的话一次需要多少白细胞提取DNA？刚刚开始做实验，不懂得太多了，期盼你的指导，谢谢
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请教一下，全血提dna需要先离心分离血浆吗？
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eileen311 我们提的DNA 是做Taqman探针
。用的天根的非离心柱法。说明书说，3ml抗凝血 提取的DNA保存在300UL tb溶液里。楼主，您可否知道做taqman的DNA 有何要求。比如说，就按照3ml血液---300ulDNA保存在TB里？还是要稀释了保存？
做Taqman 需要DNA溶液的量是多少啊 ？ 如果楼主不能回答我的问题的话，那我又应该在哪里去查询相关信息 呢。科研小白，在没有什么要求，300tb里没有问题，放到-20度即可，做的时候可以DNA一般是可以稀释10倍后再加入pcr体系做TAQMAN,例如拿5ulDNA溶液放到新的EP管，然后加50ul的去离子水，20ul体系加稀释后的1-2ul就可以做snp了
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若薇幻玉 你好，我现在有一批血样已经提取了白细胞，现在想做基因多态性研究，看到提取DNA有酚-氯仿抽提法和碘化钾提取法，哪种方法比较方便而且经济呢？还有做PCR的话一次需要多少白细胞提取DNA？刚刚开始做实验，不懂得太多了，期盼你的指导，谢谢我只用过试剂盒提取，试剂盒也很便宜估计提取一个就1-3块钱，200ul血的淋巴细胞提取后用100ul溶解了一次做用1ul可以做90多次
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chiefns 请教一下，全血提dna需要先离心分离血浆吗？不用分离也可以
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y9798912 若薇幻玉 你好，我现在有一批血样已经提取了白细胞，现在想做基因多态性研究，看到提取DNA有酚-氯仿抽提法和碘化钾提取法，哪种方法比较方便而且经济呢？还有做PCR的话一次需要多少白细胞提取DNA？刚刚开始做实验，不懂得太多了，期盼你的指导，谢谢我只用过试剂盒提取，试剂盒也很便宜估计提取一个就1-3块钱，200ul血的淋巴细胞提取后用100ul溶解了一次做用1ul可以做90多次太感谢了
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若薇幻玉 y9798912 若薇幻玉 你好，我现在有一批血样已经提取了白细胞，现在想做基因多态性研究，看到提取DNA有酚-氯仿抽提法和碘化钾提取法，哪种方法比较方便而且经济呢？还有做PCR的话一次需要多少白细胞提取DNA？刚刚开始做实验，不懂得太多了，期盼你的指导，谢谢我只用过试剂盒提取，试剂盒也很便宜估计提取一个就1-3块钱，200ul血的淋巴细胞提取后用100ul溶解了一次做用1ul可以做90多次太感谢了您好，我还想请教一个问题，全血抗凝后放入-20度大概一周，再放入液氮罐转运一天，再放入-80度冰箱保存，过几个月还能提取DNA吗？由于我们是从外地收集样本，收集好了别人帮忙放入-20度冰箱，大概一个星期过去拿一次，老板要求用液氮罐转运，来回大概一天，这样解冻后细胞都破了，提取DNA会不会有问题啊？
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请教楼主：
溶血对RNA提取有影响吗？我经常发现溶血的血浆提出来的RNA含量明显比没溶血的要高，不知是样品差异还是溶血所致？盼复！
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你好，我现在用天根的DP348提取，加入蛋白酶K和GB后一直是褐色，延长了也没有什么用处，提出来的DNA 浓度特别低
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感谢楼主分享！！！我有一个问题请教您，如何在DNA中加入TE？我用的是天根的试剂盒提取的是粪便中的DNA，因为最后没有用TE保存，也用了TB,就想在提取完成后，加入一些TE，关于如何加的问题在网页上找到的答案如下，但我还是不太明白...”用TE保存DNA, 就是在提完DNA之后,最后一步,用75%乙醇洗并晾干后,直接加入盛有DNA的小管中,即可. 若DNA量较少,一般加20ul即可.也有加100ul的。“试剂盒说明书的最后一步为：“彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液后，将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50ul洗脱缓冲液TB，室温放置2-5min，12000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。“我困惑的是，这一步的TB需要晾干吗？还是用TE直接代替TB？或是直接在有TB的DNA中直接加入TE？期待您的回复，谢谢！
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