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【求助】最近做western blot 背景很不干净，请大家帮忙分析
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这个帖子发布于2年零309天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近做western blot 总是出现背景上很多渣渣点点的情况，也不知道什么原因。请大家帮忙分析一下。这是第一次显影的条带，很浅，压片大约30min才出来。怀疑二抗问题，然后重新孵育一次二抗。就变成这样了，背景很脏。用的稀释液是5%脱脂奶粉。请大家帮忙指点，谢谢！！
不知道邀请谁？试试他们
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奶粉要溶充分了，颗粒可能会少些
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haks 奶粉要溶充分了，颗粒可能会少些哦，谢谢。在摇床 上摇40分钟够不够？还是要再长点时间？
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nienpieces 哦，谢谢。在摇床 上摇40分钟够不够？还是要再长点时间？为什么用摇床呢，有没有磁力搅拌器，几分钟就可以了，实在没有你就先玻璃棒搅拌再摇床吧
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洗膜时间严格执行~
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我觉得是条带信号太弱，导致背景影响变大。蛋白量低。你制样和电泳缓冲液SDS用多少浓度，什么牌子的啊
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黑点的信号应该都是来自于奶粉吧。奶粉溶好以后，过一道0.2um的膜，把溶不了的颗粒过掉，再做，至少点点没有了。
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看没看过爸爸去哪了？奶粉溶的时候要先把TBST量好了放在皿里，在加奶粉，这样奶粉几下就溶解了！大家可以试试。背景高一般和二抗浓度和洗膜次数有关系。调整洗膜次数和二抗浓度
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楼主问题解决了么？遇到同样问题了
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lql 楼主问题解决了么？遇到同样问题了多亏了上边几位大神，我后来就把配好的脱脂奶粉静置过夜，只取表面的部分，或者在稀释抗体之前充分震荡，保证没有大颗粒。还有我觉得一定要注意器皿的干净。不好意思才回复你。
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【求助】Western-blot图片结果问题
向园子里的高手们请教一个问题：1. 论文中Western-blot的结果应该如何表示？我用考马斯亮蓝染色的Marker条带照片放于DAB显色的膜照片旁，显示膜上条带的分子量，可以不？老师说不应该放“考”的照片，可是我觉得不能说明条带的位置，应该如何解决？2. 论文中ELISA直方数据图表示时是不是必须得有标准差？ELISA用三个复孔取平均值的结果是否可行？ELISA是不是必须得做三次实验，每次做三个复孔？还是只做一次就可？方法成熟的前提下。谢谢各位大侠！1. 没必要放“考”的照片。现在有专门用于western-blot的Marker了，用这个是最好。不用的话，可以直接在图片旁边人工标明分子量就可以。借用SCI杂志编辑的话（我的理解，呵呵）：“没有人会凭空怀疑作者标注的真实性，因为真实是科研工作者的生命。”2.最好有标准差。用三个复孔取平均值是可以的，做三次实验也可以，两者得出的统计学意义不同。如果实验结果分析与ELISA的方法本身无关，则不应做3次实验了。一点拙见。对，用预染marker吧，比较好。谢谢楼上的两位大侠！迫于实验室经费有限，只能用普通MARKE了。另外，to kingtea:“用三个复孔取平均值是可以的，做三次实验也可以，两者得出的统计学意义不同。” 能否详细的解释一下二者的区别？我还想问下，在什么情况下才应做三次实验呢？谢谢！据我看到的文献，多是做两次试验，每次试验做三个重复孔。非常感谢楼上的高手！我刚开始也是坚持用三个复孔，但学校有位老师说他们一般做酶联都是用两个复孔，所以我也用的是两个复孔。不知道哪位知道正规的应该是什么样子？
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