您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
实验十双层平板法观察蛭弧菌斑实验分析报告.ppt 18页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
下载提示
1.本站不保证该用户上传的文档完整性，不预览、不比对内容而直接下载产生的反悔问题本站不予受理。
2.该文档所得收入(下载+内容+预览三)归上传者、原创者。
3.登录后可充值，立即自动返金币，充值渠道很便利
需要金币：350 &&
你可能关注的文档：
··········
··········
双层平板法观察噬菌蛭弧菌斑实验
一、蛭弧菌简介
蛭弧菌(Bdellovibrio)是寄生于其他细菌并能导致其裂解的一类细菌。它虽然比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，是一类能&吃掉&细菌的细菌。
1962年首次发现于菜豆叶烧病假单胞菌体中，随后从土壤、污水中都分离到了这种细菌。
特征 蛭弧菌属于蛭弧菌科。具有细菌的一切形态特征： 单细胞，弧形或逗点状，有时呈螺旋状 0.3-0.6×0.8-1.2微米，或仅为杆菌长度的1/3-1/4 端生鞭毛，比其他细菌的鞭毛粗3-4倍，运动活跃 革兰氏染色阴性。 细胞中蛋白质含量较高，有的占干重的60-70%。DNA含量5%，GC百分数为42-51%。 生活方式 有寄生型，也有兼性寄生，极少数营腐生。非寄生型营腐生生活，可在蛋白胨和酵母提取物培养基上生长繁殖，绝大多数都丧失了寄生性。
从自然界分离得到的蛭弧菌都是依赖寄生型，迄今为止，还没有直接从自然界分离得到非寄生型。不依赖宿主的蛭弧菌，只能生活在实验室条件下。 生长要求 寄生型蛭弧菌生长，要求pH6.0-8.5；温度23-37℃，低于12℃，高于42℃时均不生长；能稳定分解蛋白质，一般不利用碳水化合物，而以肽、氨基酸作碳源和能源；能液化明胶；严格好氧。 侵入对象 蛭弧菌与宿主细胞之间，常表现出一定的特异性。不过，有的特异性较差，能侵入多种细菌。例如不同的蛭弧菌菌株，能侵入各类不同的植物病原菌。
侵入机理 周质空间 分布和分离 广泛存在于自然界，土壤、河水、附近海洋水域及下水道污水。 将蛭弧菌与敏感菌混合倒平板，在适宜条件下培养2-3天，平板上便会出现类似噬菌体的噬菌斑，并逐渐扩大，宿主细胞完全被溶解而形成透明区。从这些透明区中就可分离到蛭弧菌。利用这一特征，还可计算出蛭弧菌噬菌体的数目。同时可追踪增殖过程、寄生潜伏时间、新产生蛭弧菌的数量以及它们的活性等。
用于净化水体和清除工、农、医等方面的有害细菌。 大量存在于污水中，对大肠杆菌和沙门氏菌属的细菌均有广泛的寄生性，因此，有人以蛭弧菌作为水域污染程度的一项最终指标 理论研究：宿主细菌-蛭弧菌-蛭弧菌噬菌体这个&三位一体&的寄生系统。 二、实验目的
1. 了解噬菌蛭弧菌的生物特性
2. 掌握双层平板法分离蛭弧菌技术
显微镜，生化培养箱，电子天平，高压灭菌锅，电热干燥箱，超净工作台，冰箱，高速离心机，普通离心机。
菌种 　　大肠杆菌（Escherichia coli）、噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovoru）。 实验试剂
（1） 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉粉5g（0.5%）；蛋白胨10g（1%）；琼脂20g（2%）；蒸馏水1000ml；pH 7.0～7.2
（2） 双层平板培养基 　　　 下层琼脂培养基：琼脂17.5g（1.75%）；蒸馏水1000ml 　　　 上层LB培养基：蛋白胨5g（0.5%）；酵母提取物1.5g（0.15%）；NaCl 2.5g（0.25%）；琼脂4g（0.4%）；蒸馏水1000ml。
大肠杆菌的制备
将大肠杆菌接种牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，放在37℃培养箱里培养24 h后，备用。
　　　　　 四、实
序 　　1. 利用双层平板法分离噬菌蛭弧菌
　2. 观察噬菌蛭弧菌斑出现及其形态的观察
即：通过双层平板法使噬菌蛭弧菌对大肠杆菌的裂解而形成噬菌斑。
　　　 双层平板法主要优点： 五、实验方法及操作 1、 蛭弧菌悬液的制备：挑取蛭弧菌单斑浸泡于1.5 mL 无菌水中，捣碎混匀，10000 g离心1 min，得到蛭弧菌悬液，备用。
2、大肠杆菌悬液的制备：取0.5 mL无菌水在大肠杆菌的斜面上，用接种环钩分散乳化菌苔，制备菌悬液，备用。
3、倒入融化的琼脂培养基20ml于无菌培养皿中，冷却凝固，备用。制作下层琼脂培养基。
4、吸取3.5 mL上层LB培养基（50℃）中加入0.2mL蛭弧菌液和0.3 mL大肠杆菌菌悬液，混匀后立即倾注于下层培养基上，待凝固后置于35℃培养箱内培养24h-120 h。 试验操作注意事项
1、上层LB培养基温度必须控制在50℃左右，温度过高导致大肠杆菌和蛭弧菌失活。
2、加入0.2mL蛭弧菌液和0.3 mL大肠杆菌菌悬液时动作要快，倒入下层培养基上迅速摇匀，避免LB培养基凝固。
3、一定要等培养基凝固后，在倒置培养。 六、实验结果
1、观察噬菌斑出现及大小
2、记录噬菌斑个数 七、思考题 1.比较双层平板法与
正在加载中，请稍后...君，已阅读到文档的结尾了呢~~
双层平板法,双层琼脂平板法,双层平板法原理,抑菌圈,双层平板法步骤,双层平板b40法的作用,单层平板法,双层平板法优点,双层蝴蝶结的系法图解,细菌素
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
双层平板法
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer--144.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口平板划线法与稀释涂布平板法的区别_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
总评分3.8|
浏览量27815
用知识赚钱
阅读已结束，下载文档到电脑
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢双层平板法快速选育高产蛹虫草菌株
蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草,与冬虫夏草(Cordyceps sinensis)同属虫草属。多项研究发现,蛹虫草具有抗缺氧、抗炎症、抗衰老及抑制细胞分裂的作用[1-2]。随着野生资源日渐枯竭,人工培植蛹虫草大势所趋,然而在实际生产中,蛹虫草菌种极易产生退化现象,一般传代3次左右就开始逐步显现。原本正常的菌种出现子实体不分化或分化率低、产量降低、子实体纤细短小等问题,严重影响蛹虫草产量和品质[3]。为了避免人工培植过程中菌种退化所带来的影响,有针对性地展开菌种分离纯化工作十分关键。蛹虫草菌种选育,多采用平板划线和涂布的分离方法。这类随机挑取单菌落的方法虽然简单,但比较盲目、工作量大、选育耗时长,而且成功率低。本研究针对上述问题,从蛹虫草菌种特性出发,以PDA平板培养基为基础,通过改变培养基的成分和组合等方法[4-5],研究不同双层平板对菌种分离、筛选效果的影响。以期在尽量排除不理想菌落影响的同时,...&
(本文共5页)
权威出处：
虫草是子囊菌纲(Ascomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属[1](Cordyceps)的真菌感染昆虫使其僵化后,在适宜的条件下,从僵化后的虫体长出真菌子实体而形成的僵虫真菌子座复合体,人们俗称其为虫草。据清水大典(1994)统计,全世界已报道的虫草种类约400多种,我国现已记载100种左右[2]。在我国已知的100多种虫草中,由于寄主不同,又有不同的物名,主要常见的有药用价值的有冬虫夏草、蛹虫草(北虫草)、蝉虫草、亚香棒虫草等,还有很多虫草种类还未进行深入研究开发利用。而在众多的虫草种类中,以冬虫夏草和蛹虫草在中药领域最为著名,冬虫夏草目前还不能完全人工栽培正在驯化中,《全国中草药汇编》记载:“北虫草(蛹虫草)的子实体及虫体也可作为冬虫夏草入药[2]”。已有的研究表明,从人工培育的蛹虫草已检测或分离到的有效药用成分和活性物质如虫草素、虫草酸、虫草多糖和SOD等...&
(本文共3页)
权威出处：
蛹虫草属子囊菌亚门核菌纲球壳目麦角菌科虫草属,与冬虫夏草同属异种[1]。蛹虫草作为传统珍贵中药材,在中药典籍中早有记载。现代研究表明,蛹虫草中含有虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质,在抗炎、抗癌、抗菌、增强免疫等方面起着重要的作用,可作为冬虫夏草的代用品[2-4]。近年来,蛹虫草的开发利用倍受关注,特别是野生虫草资源有限,许多研究人员关注并致力于蛹虫草的人工栽培研究,取得较大进展。我国是第1个对蛹虫草进行商业化栽培的国家,1986年吉林省蚕科研究所以家蚕和柞蚕为寄主培养蛹虫草,获得与天然蛹虫草相一致的子实体,开启了我国蛹虫草人工栽培的新纪元。自1992年开始推广蛹虫草大规模人工栽培技术起,蛹虫草的固体发酵、液体发酵培养已被广泛研究。本文对近年来蛹虫草的人工栽培研究进展进行论述,旨在为进一步深入研究蛹虫草的人工栽培及产业化开发提供参考。1蛹虫草的人工栽培1.1固体培养固体培养是目前蛹虫草人工培植的主要方式之一,因其具有投资较小、简...&
(本文共3页)
权威出处：
1蛹虫草及其栽培研究现状蛹虫草,又名北冬虫夏草,简称北虫草,隶属于子囊菌亚门,核菌纲,麦角菌目,麦角菌科,虫草属,与冬虫夏草归为同一个属[1]。目前,冬虫夏草在国际市场上供不应求,销售量迅猛增加。但因生态环境限制及过度采挖,天然冬虫夏草资源逐渐枯竭,远不能满足市场需求。蛹虫草与冬虫夏草药性相似,可作为冬虫夏草的替代品应用于保健食品、保健膳食和其它滋补类食品以及制药、饮料、制酒等多种行业,市场前景非常广阔。蛹虫草是利用天然虫草分离出虫草菌,接种在蚕蛹、小麦、大米等培养基上,模拟天然冬虫夏草的生长环境进行人工培育。1723年,Vaillant在其所著的《Botanieon Parisiense》一书中提到了蛹草和大团囊虫草,通过基源鉴定认为它与冬虫夏草是同一个属。20世纪30~60年代,日本等国的研究人员开展了一些生态调查和驯化、人工栽培的研究。从20世纪80年代中期开始,我国研究人员进行了蛹虫草的人工栽培、化学成分、药理分析等方面...&
(本文共3页)
权威出处：
蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Link.,又名北虫草、蛹草等,隶属真菌门(Fungi)虫草科(Cordy-cipitaceae)虫草属(Cordyceps),与野生冬虫夏草同属肉座菌目(Hypocreales)[1]。蛹虫草在我国吉林省长白山以北地区以及辽宁、陕西、广西、福建等地均有发现;国外主要分布在法国、德国、英国美国以及加拿大等地[2]。蛹虫草对生长环境的要求较低,比较适合人工栽培[3]。蛹虫草含有虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶、腺苷等多种活性物质,能够抑制肿瘤细胞[4-5]、抗氧化[6]、抗衰老[7]、抑菌[8-9]、抗疲劳[10]、提高人体免疫[11-12]等。因此,通常把蛹虫草作为冬虫夏草的理想替代产品。本文通过对实验室保藏的8株蛹虫草菌株进行培养,筛选出适合栽培的高产菌株,为生产提供一定依据。1材料与方法1.1试验材料1.1.1供试菌株图1蛹虫草菌丝生长形态Fig.1 Mycelium gr...&
(本文共4页)
权威出处：
蛹虫草[Cordyceps Militaris(L.ex Fr.)Link.]又称北冬虫夏草、北虫草、蛹草、东北虫草,与冬虫夏草是同属不同种,也是一种久负盛名的食药用真菌。其可全草入药,具特殊的药用价值和滋补功效,含有虫草素、虫草酸、虫草多糖等多种生物活性物质,可促进机体新陈代谢,提高机体的免疫功能[1,2]。蛹虫草人工培养易形成子实体[3],我国是世界上第一个用昆虫蛹人工大批量培养蛹虫草子实体的国家。在批量生产中,菌种退化是影响蛹虫草子实体产量和质量的关键因素[4],优良菌种是提高产量和质量的前提条件。近年来,蛹虫草优良菌株的选育是研究热点,有关研究报道层出不穷。蛹虫草主要的育种技术包括:人工选择育种、杂交育种、原生质体融合育种、诱变育种、基因工程育种,以及分子标记辅助育种等。利用这些育种技术研究开发具有应用价值的优良品种,可为蛹虫草的产业化、工业化提供优质资源。1人工选择育种人工选择育种是通过对菌丝或孢子进行分离,并加以驯化...&
(本文共4页)
权威出处：
扩展阅读：
CNKI手机学问
有学问，才够权威！
出版：《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
京ICP证040431号&
服务咨询：400-810--9993
订购咨询：400-819-9993
传真：010-}