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如标题概述。
我用western blot检测血浆中的一种蛋白质，但是由于含量很低所以常常检测不出条带。我的一抗是自己制备的，二抗买的商业化的酶标抗体。
我考虑解决方案有两个大方向，希望高人指教。
第一是可以加大上样量，采用浓缩的方法，所以跪求比较好的浓缩方法，不会是蛋白质降解、损失。
第二是如何提高转膜效率，是否可以提高甲醇浓度？或者减小电流延长电转时间？我现在是70v恒压电转，电转5h。
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我用过超滤管浓缩，然后半干转的效率会很好，转过胶染色基本没有条带了
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100V& &1h&&试试
该用户从未签到
加大上样量
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你自己制备的抗体是用什么方案做的，重组蛋白还是多肽？ 你先检测一下灵敏度。
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用超滤管浓缩。
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做WB用的抗体是识别线性表位的。不知道你制备的抗体是否可以用来做WB。
我做转膜还没试过超过3h的。不过我用的是100V。不知道你的蛋白有多大，需要转那么长时间。
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Oo泡o菜oO 发表于
做WB用的抗体是识别线性表位的。不知道你制备的抗体是否可以用来做WB。
我做转膜还没试过超过3h的。不过我 ...
我用的抗体是自己制备的多克隆抗血清，有鼠抗也有兔抗，按之前师兄的经验来看是可以检测的，我自己也做出来结果，我现在是想进一步优化，使这个条带更加清晰一点儿。蛋白非变性条件下是460kd左右，变性条件下测得的是120kd左右的。
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bioandy 发表于
用超滤管浓缩。
多谢啦！能否告知较清楚的操作步骤或者参考文献或资料呢，不胜感激啊！
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gongyufeng8787 发表于
多谢啦！能否告知较清楚的操作步骤或者参考文献或资料呢，不胜感激啊！
买millipore的超滤管。
实时荧光定量PCR出现很多乱峰，求大神们帮电泳单引物跑出来为什么是这个样子电泳单引美开发细菌制造生物燃料技术晒动图——活体细胞4D成像新手段，细胞筛选你还在搬砖吗
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wx_非凡人_lDsv9大叔级摄影爱好者，喜欢分享murongxiaoxiao积极有责任心，热心公益事业绝对零度红米达人，爱拍照的北京女孩
逛了这许久，何不进去瞧瞧？& “光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代...”习题详情
0位同学学习过此题，做题成功率0%
光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A、B的对应部位截取同等面积的叶片分别烘干称重，然后再计算出该植物光合作用的强度（单位：mg/dm2•h）。实验步骤：（1）在田间选定有代表性的植物叶片若干片并编号。（2）叶子基部处理：为了确保选定叶片的&无法外运，也不能运入，但又不影响　&的供应。必须采用环割等方法处理叶柄的疏导组织。（3）剪取样品：按编号分别剪下对称叶片的A部分（不剪下主叶脉），置于湿润黑暗处。5h后再依次剪下B部分，同样按编号置于湿润光照环境中。（两次剪叶的速度应尽量保持一致。在实验过程中，还应尽可能使光下和暗处的温度保持一致。）（4）称重比较：将各同号叶片A、B两部分按对应部位叠在一起，切下两个等大的方形叶块（如图中虚线部分），分别烘干至恒重，称重（分别记为WA、WB）记录。请设计一个表格用于记录实验数据和分析结果：（假设实验选定的叶片为4片）（5）△ W＝WB－WA，则△ W表示的生物学意义：　&。&
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2010-河北省高三上学期第四次月考生物试卷
分析与解答
习题“光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A、B的对应...”的分析与解答如下所示：
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光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A...
错误类型：
习题内容残缺不全
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习题对应知识点不正确
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经过分析，习题“光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A、B的对应...”主要考察你对“绿色植物通过光合作用制造有机物”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
绿色植物通过光合作用制造有机物
“光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代...”的最新评论
欢迎来到乐乐题库，查看习题“光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A、B的对应部位截取同等面积的叶片分别烘干称重，然后再计算出该植物光合作用的强度（单位：mg/dm2•h）。实验步骤：（1）在田间选定有代表性的植物叶片若干片并编号。（2）叶子基部处理：为了确保选定叶片的____无法外运，也不能运入，但又不影响____的供应。必须采用环割等方法处理叶柄的疏导组织。（3）剪取样品：按编号分别剪下对称叶片的A部分（不剪下主叶脉），置于湿润黑暗处。5h后再依次剪下B部分，同样按编号置于湿润光照环境中。（两次剪叶的速度应尽量保持一致。在实验过程中，还应尽可能使光下和暗处的温度保持一致。）（4）称重比较：将各同号叶片A、B两部分按对应部位叠在一起，切下两个等大的方形叶块（如图中虚线部分），分别烘干至恒重，称重（分别记为WA、WB）记录。请设计一个表格用于记录实验数据和分析结果：（假设实验选定的叶片为4片）（5）△ W＝WB－WA，则△ W表示的生物学意义：____。”的答案、考点梳理，并查找与习题“光合作用是生物界最基本的物质代谢和能量代谢。常采用“半叶法”测定植物光合作用强度，其基本过程是：如右图将植物对称叶片的一部分（A）剪下置于暗处，另一部分（B）则留在植株上进行光合作用。一定时间后，在A、B的对应部位截取同等面积的叶片分别烘干称重，然后再计算出该植物光合作用的强度（单位：mg/dm2•h）。实验步骤：（1）在田间选定有代表性的植物叶片若干片并编号。（2）叶子基部处理：为了确保选定叶片的____无法外运，也不能运入，但又不影响____的供应。必须采用环割等方法处理叶柄的疏导组织。（3）剪取样品：按编号分别剪下对称叶片的A部分（不剪下主叶脉），置于湿润黑暗处。5h后再依次剪下B部分，同样按编号置于湿润光照环境中。（两次剪叶的速度应尽量保持一致。在实验过程中，还应尽可能使光下和暗处的温度保持一致。）（4）称重比较：将各同号叶片A、B两部分按对应部位叠在一起，切下两个等大的方形叶块（如图中虚线部分），分别烘干至恒重，称重（分别记为WA、WB）记录。请设计一个表格用于记录实验数据和分析结果：（假设实验选定的叶片为4片）（5）△ W＝WB－WA，则△ W表示的生物学意义：____。”相似的习题。关注今日：0 | 主题：536972
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为什么做WB时，上样量和体积都要一样?
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准备第一次做WB，细胞提取蛋白，看到有些公众号说最好上样量跟体积(裂解液跟loading buffer )都一样，为什么?还有就是如果蛋白浓度太低，是不是裂解液太多?还是有其他原因?希望各位前辈给点解析，谢谢!
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体积一样默认的就是质量一样，这样跑的带会在一条线上。裂解液的作用是把蛋白从细胞里面暴露出来，如果浓度低要么你受得蛋白上，要么裂解的不充分吧
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chixinzero 体积一样默认的就是质量一样，这样跑的带会在一条线上。裂解液的作用是把蛋白从细胞里面暴露出来，如果浓度低要么你受得蛋白上，要么裂解的不充分吧谢谢回答，不过浓度不一样，体积一样怎么默认质量一样？我看大部分做细胞实验都是无论什么浓度，先订量比如30ug，然后再定体积比如15ul，然后容积不够的就用1成loading buffer加到体积相等，还有就是相同质量跟体积有没有可能是为了控制其他变量！
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浓度不一样，有时候会用RIPA调整为同样的浓度，再进行等体积等质量上样，为了保证控制上样质量，尽量使蛋白跑的时候比较整齐，不受两侧电压差的影响。如果蛋白浓度低，有可能是RIPA加的太多，或者是裂解不充分导致。
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求WB高手解惑：我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊?
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10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
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