Tm值_百度百科
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Tm值就是DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构热变性过程中紫外吸收值达到最大值的1/2时的温度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。
Tm值影响Tm值的因素
①DNA碱基组成：C-G含量越多，Tm值越高；A-T含量越多，Tm值越低。
②溶液的离子强度：在低离子强度中，Tm较低，解链的温度范围较宽；在高离子强度中，Tm值较高，解链的温度范围较窄。
③PH值：当溶液的PH值在5~9范围内，Tm值变化不明显；当PH&11或PH&4时，Tm值变化明显。
④变性剂：各种变性剂主要是干扰碱基堆积力和氢键的形成而降低Tm值。
⑤DNA双链自身的长度。
Tm值计算方法
核酸Tm值（）计算
评价标准是核酸所吸收的光线量达到其所增加吸收260nm光线的量的两倍达到的温度，
当核酸达到Tm值时，其260nm吸收量可增加百分之四十（紫外吸收量随解体程度而增加，直至完全解体。
长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中，Size = 引物长度。
多种因素影响杂交的核酸的两条链之间结合的效率,包括杂交分子的种类（DNA或RNA），长度，杂交环境（盐浓度和变性剂），探针浓度，以及它们的序列。
对于与膜结合的DNA以及中等长度的DNA探针，豪利等人将熔解温度（Tm）定义为，当探针的50%与它的互补链退火连接的温度。计算公式为：
Tm =81.5+16.6logM+41（%G +%C） - 500/ L - 0.62F
M =一价阳离子的体积摩尔浓度
%XG或C = G和C核苷酸在探针中所占比例
L =退火产物的长度
F =甲酰胺体积摩尔浓度
例如，序列为AGGTCATTG，且在不含甲酰胺的溶液中浓度为75 mM的短寡核苷酸探针的预测Tm=81.5+16.6log(0.075)+41*(0.33+0.11) - 500/9 - 0.62(0)= 24.1°C。
这个方程不适用于长度小于约50个核苷酸的探针。这个等式的修饰包括
RNA的Tm =79.8+18.5logM+58.4（%G +%C）+11.8（%G +%C）2-820/ L-0.35F
一个RNA-DNA杂交的Tm=79.8+18.5logM+58.4（%G +%C）+11.8（%G +%C）2-820/ L-0.50F
更大的数字反映了RNA杂交体的稳定性增加。
对于寡聚核苷酸，华莱士等人定义Td= 2（A + T）+4（C+ G），其中Td（℃）为寡聚核苷酸的50%跟与膜结合的互补序列退火连接的温度。在探头的每个特定核苷酸的数目被插入方程代替字母。该方程是在0.9 M氯化钠短（14-20聚体）是有用的。
例如：对于序列AGGTCATTG，TD =2（2+3）+4（1+3）=26°C
当目标和探头都是免费的溶液中，加入7-8℃，到TD。
熔融温度在溶液中通过绘制OD相对于温度来确定。 S形曲线的中间点是熔融温度。
熔点的其他估计基于近邻分析（由Genosys5审查）已被确定为DNA3或RNA4。布雷斯劳尔，等[3]发现，熔化DNA双链的行为是其一级序列可预测的。
TM =1000（DH）/[A + DS）+喉返神经（CT /4）] - 273.15+16.6log（钠离子）。
DH =的近邻焓变的和移动的一个基站在同一时间，通过序列
A =校正配对的起始（=-10.8）
DS =最近邻熵的变化的总和
R =1.987卡度-1摩尔-1）
克拉是链的摩尔浓度。
自我互补链，术语“CT /4”被替换为衣原体。
DH和DS的值示于表中。
Nearest Neighbor DH DNA （千卡/摩尔） DH RNA（千卡/摩尔）DS DNA （千卡/摩尔）; DNA DS RNA （千卡/摩尔）
AA or TT - 9.1 - 6.6 -24.0 -18.4
AT - 8.6 - 5.7 -23.9 -15.5
TA - 6.0 - 8.1 -16.9 -22.6
CA or TG - 5.8 -10.5 -12.9 -27.8
GT or AC - 6.5 -10.2 -17.3 -26.2
CT or AG - 7.8 - 7.6 -20.8 -19.2
GA or TC - 5.6 -13.3 -13.5 -35.5
CG -11.9 - 8.0 -27.8 -19.4
GC -11.1 -14.2 -26.7 -34.9
GG -11.0 -12.2 -26.6 -29.7
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