猪链球菌2型05Z33强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析doc下载_爱问共享资料
猪链球菌2型05Z33强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析.doc
猪链球菌2型05Z33强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析.doc
猪链球菌2型05Z33强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的…
简介：本文档为《猪链球菌2型05Z33强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析doc》，可适用于综合领域，主题内容包含猪链球菌型Z强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析猪链球菌型Z强毒株转录调控因子Rgg基因敲除突变体的构建及毒力分析生物技术通讯LE符等。
侵权或盗版
*若权利人发现爱问平台上用户上传内容侵犯了其作品的信息网络传播权等合法权益时，请按照平台要求书面通知爱问！
赌博犯罪类
在此可输入您对该资料的评论~
添加成功至
资料评价：请问在细菌培养过程中，要用抗生素平板来筛选，那抗生素浓度一般是多少？_百度拇指医生
&&&网友互助
?请问在细菌培养过程中，要用抗生素平板来筛选，那抗生素浓度一般是多少？
最好有文献支持！
拇指医生提醒您：问题下方回答为网友贡献，仅供参考。
问题不具体，你要筛选抗什么抗生素的细菌？氨苄、卡钠、四环素、多西环素、氯霉素？而且你的抗药性的细菌是什么种类的？不同种类抗药性做起来都不一样的，做抗药性的筛选现在很多是先把细菌培养起来用药敏片做敏感性实验（因为单纯的抗药性不好衡量的，举例：1/1000的氨苄抗性的平板做起来有细菌长出来，那些细菌可以说是有氨苄抗性的，如果是1/5000氨苄抗性长出来的菌是不是也可以说有氨苄抗性呢？所有的细菌对抗生素都具有不同的敏感性）。
什么青霉素--氨苄青霉素、羧苄青霉素还是什么，是做抗性培养还是别的。你说的好像笼统点
向医生提问
完善患者资料：*性别：
为您推荐：
* 百度拇指医生解答内容由公立医院医生提供，不代表百度立场。
* 由于网上问答无法全面了解具体情况，回答仅供参考，如有必要建议您及时当面咨询医生
向医生提问第六章质粒.ppt-学路网-学习路上 有我相伴
第六章质粒.ppt
来源：DOCIN &责任编辑：李志 &
转入质粒的大肠杆菌(+pGLO)在LB/amp平板和LB/amp/a...的表达,因此在紫外下可以观察到荧光;而在不包含ara的平板上则不会有GPF,也就没有荧光了。另外pGLO包含氨苄抗性,所以平板上都有amp用来筛选包含pGLO质粒的菌体下图是某质粒的示意图其中ori为复制必需的序列1是不能生长的,复制起始点插入基因后被破坏了,不能复制了下图是某质粒的示意图插入位点不对,插入这个位点,无法进行抗性筛选,我们做这类实验,用负筛的方法,把目的片段插入抗性基因里,然后让它没有抗性,通过2次涂板得到所想要的菌株。第六章质粒.ppt(图2)第六章质粒.ppt(图4)第六章质粒.ppt(图6)第六章质粒.ppt(图8)第六章质粒.ppt(图10)第六章质粒.ppt(图12)为什么KANA抗性的培养基提不出质粒,AMP的却可以啊因为此质粒系带有抗AMP的片段,不带有抗KANA的片段.防抓取，学路网提供内容。==========以下对应文字版==========为了提取质粒,37度180r/mim培养大肠杆菌,如果培养时间过长...菌体老化死亡会发生菌体自溶,第一会影响质粒产出率,第二菌体自溶后可能会有小片段的基因组DNA污染提取的质粒。防抓取，学路网提供内容。(plasmid)质粒：是指存在于细菌、真菌等微生物细胞中、独立于染 色体外、能进行自我复制的遗传因子。用质粒转染293T细胞,质粒纯度为260/280为1.9-1.95,请问可以...可以啊防抓取，学路网提供内容。a、可以整合到染色体上，又可以游离于染色体外（附加体） b、质粒通常是共价、闭合、环状双链DNA(covalent closed circular DNA，简称cccDNA)， c、分子大小范围从l kb左右到1000 kb。SV40质粒是否含有AMP抗性基因?有"pRL-SV40载体载体类型:启动子增强子报告载体细菌抗性:氨苄青霉素(Ampicillin)"这是从产品介绍粘过来的也可以去网上查下图谱防抓取，学路网提供内容。自20世纪80年代中期以来，在链霉菌、酵母、丝状真菌等 微生物中都发现了线状DNA质粒，甚至还有RNA质粒。pKD46质粒干什么用主要用于原核生物的基因敲除,该质粒上携带3个与基因敲除相关酶最大的特点,是携带该质粒的菌株可以直接使用PCR产物转化来进行基因敲除,而且效率很高防抓取，学路网提供内容。质粒对宿主细胞是非必需的，但在某些条件下，质粒能赋予 宿主细胞以特殊的机能，从而使宿主得到生长的优势。如果10微升质粒DNA溶液,加入1/5体积的上样缓冲液,那上样...恩防抓取，学路网提供内容。如抗药性质粒和降解性质粒就能使宿主细胞在有相应药物或 化学毒物的环境中生存。防抓取，学路网提供内容。质粒也像染色体一样携带编码多种遗传性状的基因，并授予 宿主细胞一定的遗传特性，许多与医学、农业、工业和环境 密切相关的重要细菌的特殊特征便是由质粒编码的，如植物 结瘤、固氮、对有机物的代谢等。各个楼层，各有利弊，如何选择要看你个人需求，所以，没有说哪个楼层选不得。我所在的小区三幢楼，每楼19层。1-3层采光差一些，有蚊虫问题，阴雨天会有潮湿的问题。不过老年人上下楼比较方便，接地气。卖的也不防抓取，学路网提供内容。在基因工程和分子生物学的发展过程中，质粒也起着非常重 要的作用。欧米茄、卡地亚这样的牌子一万预算肯定是不用想了。一万预算买石英表可以买个雷达、浪琴这样比较知名的牌子了（比较知名，跟大牌名表肯定不能比，但是已经是日常佩戴中比较不错的表了），而且很同意题主买石英表的决防抓取，学路网提供内容。以质粒为载体进行的基因克隆技术，在原核生物 和真核生物中表达外源蛋白的方法和技术已在工、农、医各 个领域中得到广泛应用。从市场价值来看，第一套人民币价值最高，全品价值在400多万；第二套人民币市场价值次之，单套也要40-50万元；第三套人民币全套价值大约20万左右；第四套人民币单套价值在1万元以内。更多钱币收藏资讯，敬防抓取，学路网提供内容。因此，对质粒的研究无论在理论上或应用上均具有十分重要 的意义，是现代生物学研究中的重要课题之一。壁挂炉费费用一般还是可以接受的,它有自己的优越性，一般认为它在于节能环保,因为它不像集中供暖那样,会把很多热量都浪费在管线上。相对而言,壁挂炉采暖使供暖效率提高了。下面就以燃气壁挂炉采暖为例，为您简单防抓取，学路网提供内容。第一节 质粒的发现和命名 大肠杆菌的F因子是第一个被发现(1946年)的细菌质粒， 它的发现对细菌遗传学的发展产生了深远的影响。1.西安西安的球迷文化底蕴非常厚重，球市火爆程度及文明程度均可以排在中国前列。曾几何时，陕西朱雀体育场，是陕西足球和中国国家队的温床和福地。从陕西国力陕西哄保俚浇裉斓闹幸仪蚨映ぐ簿杭迹挛髯闱蚶雷ト。吠峁┠谌荨日本学者(1957年)报道了志贺菌(Shigella)中质粒介导 抗生素抗性的转移现象。相声演员王自健被称为“相声界韩寒”、“未来郭德纲”，深受网友的喜爱。据悉，王自健的许多相声段子都是来自自己的老婆，因此，网友对王自健的老婆非常好奇。对于王自健被外界称为“周立波代替者”，王自健表示很介防抓取，学路网提供内容。在以后的20多年中，陆续发现各 种细菌携带质粒，且它们的表型特征已远远超过了致育性 和药物抗性的范围。首先说一下最好别试。因为很容易就打齿轮了。手动挡车型来说变速箱齿轮啮合状态完全由挡杆决定，也就是说只要你往倒档挂了，变速箱内部就按照你的操作进行动作。有人说变速箱有保护装置，可以防止前进时挂入倒档。但防抓取，学路网提供内容。70年代末，随着遗传工程的崛起，质粒作为载体己被广 泛应用在遗传工程和分子生物学的研究中。真的，今天极挑全员抵达哈尔滨机场！也有昨天到的！机场都有路透！男人帮们还是很聪明的穿的很厚，哈尔滨很冷哦！别以为才八月就不冷，我们这边温度已经快到个位数了！极挑录制流程！对比极挑，女神们就没那么好运，防抓取，学路网提供内容。对很多不同微 生物中的质粒进行了基因克隆和生物学功能分析，使质粒 的生物学跨入了空前繁荣的研究时期。1、不系安全带这种情况其实在新手中出现的比较多，有的甚至还会解开安全带下车取卡，按理来说是不会被罚款的，但是如果你是在进站前或者出站后还是没系好安全带，被拍到是会被罚的。当然，这种情况被抓到的概率也不防抓取，学路网提供内容。一、质粒的发现 二、质粒的命名原则 质粒可以依据其表型效应、大小、复制特性、转移性或亲和 性差异划分为不同的类型。梁欢「超越原唱」这个词组现在都被滥用成形容词了，动不动就超越原唱，真当全天下所有的原唱都是阿某韩某罗某了？今年出来的无数版「XXX深情演绎洋葱！超感动的声音！超越原唱！」，没见过哪一个真能超越杨宗纬―防抓取，学路网提供内容。最初发现的质粒均由研究者根据表型、大小等特征自行命名， 如F因子(fertility factor，致育因子)、R质粒(resistance factor，抗性质粒)和Col质粒(colicin，大肠杆菌毒素质粒) 随着研究工作的深入和发展，愈来愈多的含有质粒的微生物新类群和新质粒被发现，由于缺乏统一的命名规则而导致文 献中质粒名称的混乱。身边有纹身的人大致分为三中。一种是对所谓的江湖有憧憬但还没来得及进去的人，一种是有过一小段的江湖历程，这里面包括自认为天老大，我老二，到处惹是生非，最后甚至进过监狱的，和一些早恋，为了对方宁愿留下一生都无法抹去痕迹的小孩子。最后一类就是那些入行所需的，毕竟进去社会都是会被染色的。防抓取，学路网提供内容。直至1976年Novick等才提出一个可 为质粒研究者普遍接受和遵循的命名原则。华为作为国产手机领导品牌，世界第三大手机生产商，同时也是全球几大通讯公司之一，它近几年的发展我们有目共睹的，为了反应中国品牌在国际的影响力，近期国家把5.10作为国家品牌日，在网友的投票下，华为在众多防抓取，学路网提供内容。其规则是： 质粒的名称一般由三个英文字母及编号组成，第一个字 母一律用小写p表示，后两个字母应大写，可以采用发现 者人名、实验室名称、表型性状或其他特征的英文缩写。洪金宝是否有黑社会背景不得而知，毕竟大牌明星不会亲口承认。不过回顾洪金宝一生，也确实配的上大哥的称号。香港影坛有很多大哥：在陈可辛眼中，曾志伟是大哥;在很多人看来，成龙是大哥;但对曾志伟和成龙来说，洪防抓取，学路网提供内容。编号为阿拉伯数字，用于区分属于同一类型的不同质粒， 如pUC18和pUC19等。喜欢我的回答，请关注我，谢谢哦。西装给人印象似乎就是时尚绝缘体，但是你知道西装穿好了照样时髦吗，西装怎么搭配好看？首先去除正式感，选择不同款式和不同穿法很轻松便能把穿西装的你变成潮人，赶紧和我一起来学防抓取，学路网提供内容。第二节 质粒的遗传特征 质粒的大小和拷贝数质粒的大小：以分子质量MD或碱基对数kb表示，1MD的双 链DNA=1.65kb。圆脸的女生都很困扰自己脸大的问题，其实化妆就能很显脸小哦！简单的一个妆容就能将圆脸变成小脸啦~小编搜集了一些圆脸女生化妆的技巧，快跟小编一起来看看吧！怎样才算圆脸首先我们先要了解一下圆脸的基本特征，圆防抓取，学路网提供内容。质粒的大小一般在1-200kb，最大的可达 1400kb(如苜蓿根瘤菌质粒pRm141a)。亿图图示亿图图示，是一款跨平台的全类型图形图表设计软件。使用它可以非常容易地创建有专业水准的流程图、组织结构图、网络图、商业展示、建筑平面图、思维导图、科学插画、时尚设计、UML图、工作流程图、程序结防抓取，学路网提供内容。质粒的拷贝数是指同一质粒在每个细胞中的数量，不同的 质粒在同一细胞中的拷贝数有差异。犬主：1、外出时，请用犬带系着您的爱犬。犬带分为好多种，大型犬最好用“脖套”，小型犬最好用“背背佳”。这既可以防止爱犬吓到人，也可以防止它被车撞到。万一狗失控咬人，也好控制。2、按时给爱犬打防疫针，打防抓取，学路网提供内容。质粒拷贝数是确定某种质粒特性的一个重要参数，从中也 可获得其复制本质的基本信息。什么是飞行模式？在飞行模式的情况下，手机关闭电话通信功能，即不能接打电话发短信，与基站没有信号联系，也不试图联系基站。因为手机信号会干扰飞机上的电子设备，所以飞机上不允许打开手机，而这种模式下关闭了手防抓取，学路网提供内容。一般而言，质粒的拷贝数 与其分子质量成反比关系，分子质量大的拷贝数低，分子 质量小的拷贝数高。从农村来到大学的孩子很多，很多家庭并不富裕，其学杂费都是父母辛辛苦苦挣来的，就像提问者一样，很多孩子在生活中非常节俭，为了减轻父母的压力节衣缩食。说实话，在目前这个有些奢华和浮夸的社会环境里，孩子们能防抓取，学路网提供内容。质粒可根据其拷贝数分为严谨型质粒（Stringent plasmid） 和松弛型质粒（Relaxed plasmid）。首先感谢邀请，25万以内带有差速锁的suv还是有不少的，既然邀请那就推荐几款吧！1、JEEP指南者:这车的四驱系统提供了自动、雪地、沙地、泥地、岩石5中模式，同时还有4WDLOCK功能。而且指南者还提防抓取，学路网提供内容。质粒在细胞内复制时受到控制而与染色体复制同步进行，被称为严谨型质粒。在篮球、排球等体育项目中，高个子球员一般都有着无法比拟的身高优势。NBA历史上最有知名度的我国球员姚明即是如此，2米26的他动身扣篮好像粗茶淡饭。但要说一个1米6的小个子在NBA效能14年，也许我们会防抓取，学路网提供内容。其拷贝数也低，通常只有1-3个拷贝。不得不承认网约车在很大程度上给我们的出行带来了方便，尤其是滴滴出行，在前期的时候优惠特别多，招揽了不少的滴滴车主和乘客。但是时间一长滴滴把平台做大后就一改常态，优惠变少不说，各种针对司机的霸王条款就让防抓取，学路网提供内容。如F质粒，每个细胞中只有1-2个拷贝，它们的复制受到严 格控制，属于严谨型质粒或低拷贝质粒。糖醋排骨都爱吃吧，主要是很美味的肉，而且它的做法简单，容易学会，特别是肉食动物爱排骨没商量，酸甜适中，不油不腻，口感丰富细腻，不会觉得任何一种调料的突兀。颜色呈糖稀色，不浓不淡,男女老少皆宜。因为口味防抓取，学路网提供内容。另一类质粒的复制与染色体复制不同步，称为松驰型质粒。专业法医来回答这个问题。无论是人还是猪，死后发臭的原因都是相同的，那就是发生了腐败作用。腐败作用是物质在腐败细菌的作用下逐渐分解和消失的过程，在这个过程中，蛋白质受细菌分解作用释放出硫化氢和胺为主的腐防抓取，学路网提供内容。通常每个细胞含有10-100个拷贝，属于高拷贝质粒。今天给大家分享，如何知道别人有没割双眼皮?【3种方法辨别】双眼皮手术可以说是最普遍的整形手术了，相对最为成熟，而给人外在改变也最大。然而，即使是很成熟的手术，也往往会有手术痕迹：1.眼角于眼皮宽度是否防抓取，学路网提供内容。分子量小的CoLEl质粒，每个细胞中有10-100个拷贝， 它们的复制不受到严格控制，称为松弛型质粒或高拷贝质粒。你睡觉时头脚怎么朝向？以前一直住在平房，也住管了平房。起码我的邻居是谁，我是知道的。最近一直考虑买房，所以就对房子格外的关注。其中一点就是睡觉的朝向问题。只要是住楼房大部分都和平房的不一样了。平房基本防抓取，学路网提供内容。含有松弛型质粒的菌株在含有氯霉素的培养液中细胞分裂 受到抑制，染色体DNA也停止了复制，但所含的ColEl质粒 可持续复制10~15小时，直到每一个细胞中含有1 000~3 000个质粒。OPPO、vivo、华为、小米这四家手机品牌是目前国内最火热的手机品牌了，以题主出的题目来看的话，OPPO和vivo现在已经在销量上超越了小米，距离华为还有一定的差距，要想超越华为的话，那么OPPO和防抓取，学路网提供内容。基因工程研究中所用的载体质粒大多数是这一 类型的质粒。鱼如何烹饪才好吃教你一招做鱼不再发愁鲟鱼作为活化石之一，肉质鲜嫩美味，无刺只有软骨，而且营养丰富，甚至能预防老年痴呆等病症。这种鱼就只要清蒸就能很好吃。清蒸鲟鱼首先要处理配菜，将洗净的鲟鱼用刷子将鱼皮防抓取，学路网提供内容。控制拷贝数的基因存在质粒上，同时也是宿主和质粒相互作用的结果。一，每个人都有心中的天使??，社会的发展，欲望的丛生这个天使越来越丰满，完美，越来越渴求而不可见，那种让我主动去追的，感觉到会同频的太少了。（网上随便搜的图）二、生活越来越丰富多彩，有太多的东西会分散防抓取，学路网提供内容。类型 代表质粒 大小（kb） 拷贝数 宿主 表型特征 致育因子 F因子 95-100 1-3 大肠杆菌, 沙门氏菌, 柠檬酸杆菌 性纤毛、接合转移 R质粒 RP4 54 1-3 假单胞菌和其它G阴性菌 性纤毛、接合转移，抗Ap、 Km、Nm、Tc R1 80 1-3 G阴性菌 抗Ap、Km、Su、Cm、Sm R6 98 1-3 大肠杆菌, 奇异变形杆菌 抗Km、Nm、Su、Cm、Sm R100 90 1-3 大肠杆菌, 志贺杆菌, 沙门氏菌 Cm, Sm, Su, Tc, Hg pSH6 21 金黄色葡萄球菌 Gm, Tm, Km pAD2 25 粪肠球菌 Em, Sm, Km Col质粒 ColE1 10-30大肠杆菌 产大肠杆菌素E1 ColE2 10-15 志贺杆菌 产大肠杆菌素E2 ColDF13 阴沟杆菌 产大肠杆菌素DF13 毒性质粒 Ent（P307） 83 大肠杆菌 产肠毒素 K88质粒 大肠杆菌 粘附抗原 ColV-K30 大肠杆菌摄铁载体, 免疫机制抗性 pZA10 56 金黄色葡萄球菌 肠毒素B Ti 200 根癌农杆菌 诱导肿瘤 代谢质粒 CAM 230 假单胞菌 樟脑降解 SAL 56 假单胞菌 水杨酰降解 TOL 75 恶臭假单胞菌 甲苯降解 pJP4 假单胞菌 2,4-二氯苯乙酰降解 pSym 根瘤菌 共生固氮 质粒大小和类型 质粒的复制复制子(replicon)是一个复制单位，细菌染色体是一个复 制子，每一个质粒也是一个复制子。复制起点是复制子起始复制的部位，作为一个复制子， 至少需要有一个复制起点，即ori位点。大肠杆菌染色体的 复制起点称为oriC，质粒的复制起点叫做oriV。pBR322及其衍生质粒pMB1 15-20 pUC系列质粒 pMB1 500-700 pACYC及其衍生质粒 p15A 10-12 pSC101及其衍生质粒 pSC101 ColE1ColE1 15-20 几种常见质粒载体所携带的复制子 质粒的复制主要是通过θ型复 制和滚环复制两种方式之一进 行的，其中以θ型复制为主。在θ型复制中，有单向复制和 双向复制两种类型。革兰氏阴性细菌中多数质粒是 以θ型方式复制，R1、R100等 是单向复制，F、R6k等是双 向复制类型。质粒复制的方式质粒滚环复制示意图 质粒只编码一种或 少数几种与复制有 关的蛋白质，而复 制所需要的其他蛋 白，如DNA聚合酶、 引物酶、连接酶、 RNA-H酶、旋转酶 (gyrase)和拓扑异 构酶I、DnaB和 DnaC等都是利用寄 主的复制酶体系。在革兰氏阳性细菌中大多 数质粒是以滚环方式复制。复制起点是一段特定的DNA序列，长约几百碱基对，在其相关的调控元件中含有由质粒或宿主染色体编码的、参与 DNA合成起始调控因子的结合位点。在大多数质粒中，与复制有关的蛋白质基因位于它们的作用位点――ori序列附近，因此ori位点周围的小范围DNA是质 粒复制所必需的。如果质粒DNA的大部分区域被去掉，而只保留质粒的ori序列，而且质粒是环状的，则质粒仍然能进行复制。将ori区克隆到一个不能自主复制的环状双链DNA分子上并引入到原核细胞后，该重组DNA具有自主复制能力。分子克隆中常用的质粒载体就是以这种方法构建的，同时用 这种方法可以确定哪部分DNA是ori区并研究ori区的功能。ori区域常决定了质粒的许多特性，如质粒的寄主范围和 质粒的拷贝数。质粒的寄主是指质粒能在其中自我复制的生物种类。质粒 的寄主范围通常是由ori区决定的。有些质粒如ColEl类型的 质粒，包括pBR322、pET和pUC具有较窄的寄主范围，这 些质粒只在E.coli及一些亲缘关系较近的如沙门菌和克氏杆 菌(Klebsiella)中复制。相反，RP4、RK2和RSFl010及从G 细菌中分离的滚环复制的质粒都属于广寄主范围(broad host range)质粒。广寄主范 围的质粒一般能编码与复制起始有关的所有蛋白，这样就不 依赖于寄主的功能。三、质粒复制的调控 质粒的复制机理与细菌染色体的基本相同， 但二者之间的复制调控则有区别。至今所研究的 质粒，其复制调控一般采用直接或间接的负调控 机制，负调控因子可以是蛋白质、RNA或DNA重 复序列。目前关于质粒的调控大致可以分为两种类型： 抑制物-靶位调控（inhibitor-target regulation） 重复子-竞争结合调控（iteron-binding regulation） 抑制物-靶位调控特点是依赖一小段反向转录的RNA作为抑制物，通 过与目标RNA的互补结合阻止质粒复制的起始。目标RNA是质粒DNA复制的引物或用于编码复制所 需的Rep蛋白的mRNA。属于这一类复制调控的质粒有ColE1、pT181、 p15A、pMB1、RSF1010、CloDF13、R1等。1）ColE1质粒的复制调控 ColE1为6.6kb的小质粒，拷贝数10~20。其复制 不需任何质粒编码的蛋白质，而是完全依赖于宿主提 供的寿命较长的酶和蛋白质，包括分子伴侣、DNA聚 DNA依赖的RNA聚合酶、核糖核酸酶H(RNase DNA促旋酶和拓扑异构酶I。ColE1质粒DNA的复制，从oriV开始，单向进行。控 制此种质粒DNA复制启动的两种关键因素RNAI和 RNA，以及另一种负调控因子Rop蛋白，都是由 ColE1 DNA转录产生的。RNA也叫做复制引物。RNA分子在转录起点附近同互补 的模板DNA形成一种杂交分子，被RNaseH酶所切割，从而释 放出3′-OH末端，作为供DNA聚合酶合成DNA的引物。RNA前体的合成起始于其复制起点上游555bp处的启动 子区，继而穿过复制起点，终止于下游大约150个核苷酸附近 的一个位点。此约750个核苷酸的起始转录物的5’端折叠成复 杂的二级结构，从而使RNA产生一个富G环，后者与位于模板 链复制起点上游20个核苷酸处的质粒DNA富C区正好匹配。随 后，该RNA转录产物由RNaseH加工为成熟引物，其切割位点 位于复制起点内5个A序列中。所得的555个核苷酸的成熟RNA II被DNA聚合酶I用作引物启动前导链的合成。质粒DNA的复制过程RNA是复制的负调节物 RNA可以通过同RNA结合， 以阻止其与模板DNA发生杂交作用。colE1复制子不能影响质粒复制所必需的宿主酶的活性， 因此，一旦DNA合成启动后，便不能改变其速度或进程。故而拷贝数的控制必须在DNA复制启动时或启动前进行。质粒DNA的合成依赖于复制起点处稳定的DNA-RNA II 杂交体的形成。正常情况下，复制的起始是由正确折叠与 不当折叠的RNA II间相互转化的平衡来控制的，前者可形 成稳定的杂交体，后者则不能。这一平衡的改变主要由RNA来控制，RNA是由 RNA基因的反义链编码的108个碱基小分子转录物。它 折叠成可与新生RNA II前体结合的三叶草结构，从而阻止 后者折叠成形成稳定杂交体所必需的二级结构。ColE1质粒复制起点结构 与RNA 的配对有可能引起 引物RNA 二级结构 的改变， 从而阻止 RNaseH 不能 切割）。ROM/ROP蛋白对RNA负调节活性的调控 由质粒编码的一种被称为ROM(RNA modulator)或 ROP(repressor primer)的蛋白质可提高RNA与RNA结合的效率。ROM蛋白通过促进RNA和RNA杂 交体的形成，增强RNA的负调节作用。ROM是含有63个氨基酸的多肽的同型二聚体，它由位于 colE1复制起点下游400个核苷酸处的一个基因所编码。该 二聚体每个亚单位含有由一个转角连接的两个α螺旋，因而 此二聚体是由4个α螺旋组成的呈双重对称的紧密束状结构。ROM蛋白与RNA和RNA具有相似的亲和力。它促使 这两种RNA分子的互补结合物由不稳定的中间体变为更稳定 的结构。rom/rop基因缺失至少可使colE1质粒拷贝数提高两个数量级。例 rom/rop基因的缺失可使较早期组建的载体pBR322在每个细菌细胞中的 质粒拷贝数从15~20个增至500个以上，在rom/rop基因中插入一段外源 DNA片段，则可导致致死性的大量质粒DNA复制。2）R1质粒的复制调控R1质粒是IncF类型的代表质粒，其复制调控也是在 RNA和蛋白质的作用下进行的，但RNA是间接调控的。质粒复制起始所必需的RepA蛋白能在两个启动子的作用 下转录。质粒刚进入细胞尚无CopB时，RepA在自身启动 子下迅速转录；当达到适当的拷贝数时，P repA 启动子被 CopB阻遏，RepA只能从P copB 转录。copA自身启动子带动下从repA基因的互补链进行转录， 因此其RNA与repA的翻译起始区重叠但转录方向相反，二 者之间形成双链结构，被染色体编码的切割双链RNA的 RNase降解。copARNase 重复子-竞争结合调控F、P1、R6k、RK2、RP4和pSC101等质粒是通 过RepA进行复制调控的，它们在复制起始位点（ori） 和复制基因（rep）附近存在多个17-22bp的DNA短 片段，这些短片段被叫做重复子（iteron），含有重 复子序列的质粒也叫重复子质粒（iteron plasmid）。重复子能与复制必需的RepA蛋白竞争性结合，从而 抑制了质粒的复制和拷贝数的增加。转录自体调控（transcriptional autoregulation）： RepA蛋白通过与自身启动子区结合而抑制自身的合成 质粒浓度较低时，RepA只与一个质粒结合；质粒浓 度较高时，RepA通过与重复子序列的结合使两个质 粒联结在一起，因此阻止了质粒的复制。重复子质粒的复制不仅受RepA蛋白浓度的控制，而 且受质粒浓度，更确切地说重复子序列浓度的控制。偶联模型（coupling handcuffingmodel）：重复 子序列间的相互作用使两个质粒偶联在一起，从而抑制 了质粒复制的起始。四、不相容性和质粒的类群 质粒不相容性：是指亲缘关系相近的两种质粒，在非选择性条 件下常不能稳定地存在于同一个细胞中，经过若干代的培养， 只含有同一种质粒的细胞越来越多，而含有两种质粒的细胞相 对减少。这种现象称为质粒的不相容性（incompatibility）。一般来说，同种质粒衍生物是不相容的，而不同质粒的衍生物 则可能是相容性的，也可能是不相容性的。质粒的不相容性也是与质粒复制起始的控制密切相关的。由于性状相近的质粒通常具有相同或相似的复制调控机制， 其阻遏物(抑制物或重复序列)亦相似，在调控时，它们也能 随机地与其中的任一质粒的复制区结合而阻遏了其复制过程， 并进而使之在子代细胞中丢失。由于阻遏物的结合是随机的，因此两个质粒在子代细胞中的 出现几率相等，即各占50％。对于高拷贝数质粒而言，质 粒在子代细胞中的丢失需要多次分裂才能实现。有些质粒能够稳定地存在于同一细胞中，是因为控制拷贝数的机制完全不同。例如，F质粒和ColE1质粒二者是相容的，也就是说，它们 分别属于不同的不相容群（different incompatibility group）。有些细菌在同一个细胞中可以含有几种不同类型的质粒，例 如，Borrelia burgdorferi （博氏疏螺旋体 ）含有17种不 同类型的环状和线状质粒。在细菌中已区分出大量的不相容群（Inc），同一种不相容群的质粒享有调节它们复制子的共同机制。因此，也可以根据复制子是否相同来划分质粒的不相容群， 携带有相同复制子的不同质粒属于同一不相容群，它们不 能共存于同一细菌中。带有不同复制子的质粒属于不同的不相容群，它们可以共 存于同一细菌中。例如p15A、R6K、F能与colE1质粒相 细菌种类质粒不相容群 代表性质粒 革兰氏阴性细菌 IncF R386,R455, ColV IncF R1, R100 IncF Col1B-K98 IncF R124 IncA RA1 IncC R40a, R55 IncH R27, R726 IncI ColIb-P9, R144, R483, R64, R621a IncM R69, R466b IncN R46, R15, N3, pKM101 IncO R16, R723 IncP RP1, RP4, R68, R751, R690, RK2 IncQ RSF1010, pKT212, pKT230, pGSS IncW R7K, R388, pSA747 IncX R6K 革兰氏阳性细菌 pT181 pT181, pC221, pS194, pC223, pUB112, pE194 pUB110 pBC110, pBC16 pSN2 pSN2, pE12, pIM13 五、质粒的稳定性 (细胞分裂中的质粒分配) 质粒的不稳定性（plasmid instability）包括两个方面： 分离的不稳定性（segregation instability）： 指在细胞分裂过程中，有一个细胞没有获得质粒 DNA，并最终增殖成为无质粒的优势群体 结构的不稳定性（structural instability）：指 由于转座作用或重组作用引起的质粒DNA的重排 或缺失。1、每个世代每个质粒平均都必须至少发生一次复制； 2、当细胞分裂时，复制产生的质粒拷贝必须平均分配 到两个子细胞中去。要使质粒能够保持稳定的遗传，至少需要满足下 面两个方面的条件： 在细胞分裂过程中，质粒分配到子细胞的途径可分为： 随机分配(random distribution) 主动分配(active distribution) 这些质粒的稳定性是通过两种机制来实现的： （1）质粒编码的基因产物，如质粒编码的致死蛋白来抑 制不含质粒的子细胞。（2）质粒上的分配体系（par）。1.主动分配的机理 对低拷贝质粒而言，需要某种特定机制，将细胞分裂 与质粒复制协调起来，以保证每个细胞至少获得一个拷 贝。目前已对F、R1分配机制进行了深入研究。par区叫做分配区(partition region)或分配座位(partition locus)：是指在细胞分裂过程中使质粒拷贝数均等的分配到 子细胞中的质粒DNA序列。在F质粒中par区是同复制起点紧密相邻的，而在R1质粒 中则是远离其复制起点。质粒的复制与分配是分开独立进 行的，而且par区还会使无亲缘关系的其他质粒保持稳定。主动分配体系的par区 GGTCTGATTATTAGTCTGGGACCACGGTCCCACTCGTATCGTC CCAGACTAATAATCAGACCCTGGTGCCAGGGTGAGCATAGCAG -35 -10 SD sopA sopB sopC SopA SopB 在F质粒中，par区由sopA和sopB两个基因及sopC区组成 sopA和sopB反 式作用基因 sopC:顺式作用位点， 也叫类着丝粒位点 12个43bp的正向重复序列 SopB与sopC区结合，形成蛋 白-核酸复合物，该复合物参 与质粒的分配。sopA和sopB构成 一个转录单位， 其产物SopA和 SopB两种蛋白协 同抑制sopAB操 纵子的转录，属 于自体阻遏蛋白。有一对7bp的反向重复序列 SopA蛋白与sopAB转录单位的启动子区的操纵基因结合， 对其转录进行调控； SopB蛋白虽不能与sopAB操纵子的启动子结合，但它能 促进SopA蛋白的结合能力。因此，SopB蛋白必须维持在适当的浓度，才能保证F质 粒在细胞内的稳定性。复制 质粒分配 细胞分裂 质粒 分配复合体 复制体 一种尚未知的结构很快地将 两个质粒移向细胞的两极。细菌质粒DNA的分配模型图 质粒DNA在位于细胞中央 的复制体(replisome)的 作用下进行复制。质粒复 制后，分配蛋白与sopC位 点结合形成分配复合物。复制后的质粒均等地分配到两 个子细胞中，分配后的质粒可 能在分配蛋白的作用下，定位 于细胞的特定区域。F质粒基因组中控制寄主致死功能的基因ccdA和ccdB， 属于同一个自我调节的操纵子，分别编码8.3kD和11.7kD 的两种蛋白。在含质粒的细胞中，CcdA蛋白作为解毒剂专门与毒剂 CcdB蛋白结合，并使之失效。在没有CcdA蛋白的情况下，CcdB蛋白通过抑制DNA解 旋酶的活性，或引发解旋酶诱导寄主染色体DNA发生双链 断裂，从而使染色体在细胞分裂过程中无法进行正确的分 寄主致死体系（host-killingmechanism） 在新产生的无质粒的子细胞中，开始的时候是含有CcdA 和CcdB这两种蛋白质的。但由于无ccd操纵子可发生进一步的转录，因此随后这两 种蛋白质的浓度便逐渐下降。毒剂CcdB和解毒剂CcdA具 有不同的稳定性，是导致分裂后细胞致死的关键因素。CcdA蛋白质不稳定，易被蛋白水解酶(protease)降解，于 是较稳定的CcdB蛋白质便可行使其对寄主细胞的致死作用。随机分配：是指在细胞分裂过程中质粒拷贝数在两个子细 胞之间是随机分配的。在一般情况下，通过随机分配质粒 也能够得到稳定的遗传，但在分裂中也会出现无质粒的子 细胞。2.随机分配机制(random distribution) ColEl等多数高拷贝质粒一般没有par基因，它们依赖于高 拷贝质粒的随机分配来实现分裂过程中的稳定性。但在某些情况下，尤其是在recA 的宿主细胞中，ColE1常能彼此重组而形成多聚体(multimer)，从而使单个细胞内 质粒的拷贝数减少，并增加产生无质粒细胞的可能性。另外，ColEl质粒含有不依赖于recA的cer基因，负责多聚体 的解聚作用，使之重新转变为单体质粒以保证质粒在细胞分 裂时的稳定性。人工构建的质粒载体如pBR322等，在构建过程中并不携带 par区，因此它们在细胞分裂过程中是被随机分配的。尽管在大肠杆菌培养物中出现无pBR322质粒细胞的可能性 较低，但在一定的条件下，如培养基耗尽或是寄主细胞快 速生长分裂的过程中，仍有可能产生出无质粒的细胞。因此，人工构建的质粒载体，都必须具有选择性遗传标记 如：抗药性、营养缺陷型等，以保持选择压力。质粒转移性：是指质粒能自动地从一个细胞转移到另一个 细胞，甚至还能带动供体细胞的染色体DNA向受体细胞转 移，这类质粒常常被叫做自主转移质粒(self-transmissible plasmid)。质粒在细菌间的转移，需要供体和受体细胞间的直接接触 才能进行，即接合作用(conjugation)，这类质粒又被称接合 质粒(conjugative plasmid)。六、质粒的转移性---分为转移性和非转移性两大类型 有些质粒虽然不能自主转移，但能被其他一些自主转移质粒 所转移，这类质粒又被叫做可移动质粒(mobilizable plasmid)。质粒 拷贝数 转移性 质粒 拷贝数 转移性 ColE1 10-18 不能 R6k 1-2 ColE210-18 不能 RP4 4-7 ColE310-18 不能 pBR322 约20 不能 因子1-2 pBR325约20 不能 R100 1-2 几种不同质粒的转移性能已知大肠杆菌的F质粒、R1、R100、ColV、Collb-P9、 R6k、RP4等均属于自主转移质粒，它们是低拷贝的大质粒， 其中较小的R6k质粒也有38kb。细菌如链霉菌中的自主转移质粒，除SCPl是巨大质粒外，很多都是10kb左右的小质粒，而与转移有关的区域只 有2kb左右。自主转移质粒的大小差异可能是因为它们的转移机制不 细菌中质粒的转移不需要性菌毛，因此质粒的容量就较小。1.自主转移质粒的特点 许多G 细菌中的自主转移质粒需要大于30kb的DNA来编码与接合转移有关的蛋白质，如F质粒的转移操纵子(tra)就 包含23个基因，大小为33 kb。tra基因和oriT在质粒自主转移过程中起着重要作用，所以 大多数自主转移质粒都有tra基因和oriT位点。自主转移质粒能诱导含有与自己相同或相似的oriT位点 的非自主转移质粒进行转移，如将自主转移质粒整合到染 色体上后，带动染色体转移也是从质粒的oriT位点开始的。tra基因：大多数tra基因的产物与性菌毛的形成(F、RP4和pKMl01都编码一根性菌毛)、杂交对的形成有关；有些 tra基因编码作用于oriT位点的内切酶，使质粒中的一条 DNA链产生切口，从而开始转移；有些tra基因则与质粒转 移调控等有关。oriT位点：oriT位点不仅是质粒转移的起始位点，也是质粒转移后DNA末端再环化的位点，因此质粒必须具有 oriT位点才能进行自主转移。2.可移动质粒的特点 细菌中可移动质粒缺少与性菌毛合成有关的基因(约10个左右) 。因此，在进行转移时，必须利用位于同一细胞内 的自主转移质粒编码合成的性菌毛才能进行。如ColEl具有独特的bom位点和负责DNA转移的mob基因。ColEl的bom位点类似于F质粒的oriT。mob基因的功能类似 于tra基因，mob基因也能编码特异的核酸内切酶，在bom位 点进行切割，但没有编码性菌毛的tra基因，所以它不能自 主转移。但它们含有与F质粒的oriT类似的bom位点和可移动基因 mob(mobilization)，因而能够被带有tra基因的质粒诱动转移。mob产物 bom mobbom 不能转移性菌毛 转移 不能转移 不能转移 F质粒 F质粒诱动ColEl转移的模型图 七、IncP组质粒的特征和接合转移 F质粒能在大肠杆菌细胞间自主转移，而且能带动供体 细胞的染色体向受体细胞转移，也能带动ColE质粒的转移。但F质粒的转移只限于亲缘关系较近的肠杆菌，其寄主范围 较窄。IncP、IncN、IncQ、IncW组的质粒属于广寄主范围质 粒(broad host range plasmid)。广寄主范围质粒：指质粒能通过接合作用转移到很多 不同种甚至不同属的寄主内，并能稳定地存在于这些寄主 细胞内。下面以IncP为例对这一类质粒进行介绍 IncP组的质粒的寄主较广，IncP质粒自身或带动其他质 粒能从大肠杆菌转移到几乎所有的G 细菌中;有研究表明IncP质粒还能接合转移到G 细菌、酵母、植物细胞中; IncP质粒虽然能通过接合作用转移到酵母、植物等这些 寄主中，但质粒却不能在这些寄主中复制，属于转移寄主; 大肠杆菌IncP组包括很多种天然质粒，大小在60-90kb， 具有多种抗性基因，如：卡那霉素(Kan)、四环素(Tet)、 氨苄青霉素(Amp)、链霉素(Str)、磺胺(Sul)、汞离子 (met)、氯霉素(Cam)、庆大霉素(Gen)、甲氧苄二氨嘧 啶(Tp)、环丝氨酸(Ox)等。IncP质粒的特征在IncP组中，RK2、RPl、RP4的特征极为类似，也是 IncP组中研究最深入的质粒。这类质粒的大小为60kb，在大肠杆菌中的拷贝数为4-7 个，oriV是质粒的营养复制区，具有与接合转移有关的tra 基因和oriT位点，含有氨苄青霉素抗性、卡那霉素抗性及 四环素抗性。另外，质粒上还携带有转座子Tn1和插入序列IS21。RK2和RP4质粒的接合转移机制类似于F质粒，即接 合转移需要两个功能区：oriT区和tra区。tra基因编码性菌毛、DNA内切酶等与质粒转移有关 的蛋白。oriT是质粒DNA转移的起始位点，当质粒转移时tra 基因编码的内切酶在oriT位点造成缺口，质粒的一条 DNA开始从供体细胞向受体细胞转移。构建广寄主范围的质粒载体根据自主转移质粒能自主转移及其能带动可移动质粒的转 移这两个特征而设计的。从理论上讲，可移动质粒只要含有与自主转移质粒相同的 oriT位点就能被转移。对自然界中不能自主转移的质粒，可人工加上oriT位点， 然后诱动其转移。八、广寄主范围质粒载体 一般把RP4或RK2质粒中DNA转移位点，即oriT DNA序 列称为mob-site。常用的大肠杆菌质粒载体如pBR322 、pBR325 pACYCl84，既不能自主转移也不能被高效诱动。如果这些质粒上带有RP4质粒或其他质粒的mob-site， 则能被RP4质粒诱动转移到不含质粒的大肠杆菌或其他G 细菌中。pBR325-mob mob pSUP201 Cam Amp Tet pSUP203 mob Tet Cam Amp pSUP202 mob Tet Cam Amp 在pBR325质粒上插入RP4质粒的mob-site后，构建成的几种 pSUP可移动质粒载体，又称为广寄主范围质粒载体。广寄主范围质粒载体的接合转移1）分别含有tra和oriT的双质粒接合转移系统 利用广寄主范围质粒载体和自主转移质粒或其衍生 质粒进行转移，通过双亲杂交或三亲杂交的方法进行。双亲杂交：将两种质粒共同导入大肠杆菌细胞，再 以此带有双质粒的菌株与受体菌（如根瘤菌）进行 杂交，广寄主范围质粒就能以高频率转移到受体菌 三亲杂交：将两种质粒分别导入不同的大肠杆菌细胞，再将含有不同质粒的两个菌株与受体菌混合培养。2）tra整合到染色体上的接合转移系统 一般将整合有自主转移质粒的大肠杆菌供体菌叫 做诱动菌株。接合转移时，先将可移动质粒载体导入诱动菌株， 然后将该菌株与受体菌混合，从而诱动可移动质粒 向受体转移，而自主转移质粒本身并不转移。第三节 质粒的检测和遗传表型 目前用来检测质粒的方法主要根据质粒两方面的特性： 遗传学特性：指质粒具有与染色体DNA不同的特征，如 独特的表型效应、能独立地从一个细胞转移至另一个细胞、 消除后不影响宿主的生存等。根据这些遗传学特性，可采 用质粒消除、遗传转移、分子杂交等初步检测菌株中是否 含有质粒。分子结构特性：质粒DNA在细胞中处于共价、闭合、环 状的超螺旋状态，与染色体相比，它们对碱、高温等理化 因子处理有更强的抗性。根据这些特性可以容易地对宿主 中的质粒进行检测、分离和纯化。一、质粒消除 理化因子消除法常用的理化因子：吖啶橙、溴化乙锭、利福 平、亚硝基胍、高温、紫外线等。如何区别某一遗传性状的丧失是质粒消除还是染色体基因突变 的结果？ 回复突变：质粒消除不可逆，基因突变（缺失突变 除外）可以经回复突变而恢复原有性状。突变率：质粒消除的效率可从菌体数的百分之几到 百分之百，而基因突变的频率要低得多。影响质粒消除的因素：消除剂、宿主状态、消除条件等。消除质粒的作用机制： 对质粒本身的复制和分离产生抑制作用，从而在 细菌生长繁殖过程中逐步淘汰； 选择性抑制带有质粒的菌生长。吖啶橙染料等是质粒复制子的复制抑制剂，大炭 霉素、SDS等是选择性杀菌剂，它们对有性菌毛的菌 产生作用。原生质体诱导的质粒消除使待消除质粒的菌株在一定条件下形成原生质 体，在再生后生长的菌株中可以出现高频率（约 94%）质粒消除菌。二、遗传转移 自主转移、诱动转移、转化、电转化等方法 进行质粒转移。三、分子杂交 在初步确定某菌株可能含有质粒的情况下，利用 已知表型性状的基因片段作探针进行分子杂交， 来检测其菌株是否含有该质粒，这也是目前用于 质粒检测的重要手段。四、质粒的分离、检测与纯化 质粒存在的直接证明取决于从宿主细胞中直 接检测、分离和纯化质粒DNA。常用的质粒分离方法是碱变性法。质粒的纯化和检测可用： 琼脂糖凝胶电泳 一般同一分子量、不同构型的DNA 电泳速度是：cccDNA>ocDNA（缺刻环状DNA）>L DNA （线性DNA）。CsCL-EB密度梯度离心 CsCL溶液在超速离心力的作 用下能形成密度1.15-1.80g/mL的连续密度，因而常 用于分离纯化DNA和进行DNA的G+C含量的测定。电镜观察 五、质粒编码的遗传表型 大多数质粒均控制着宿主细胞的一种或几种特殊性状， 即具有一定的表型。据其表型可将质粒划分为八种。1．致育质粒：具有促进细胞结合的表型效应。F质粒、 SCP1、SCP2等。2．抗性质粒（R）：能使宿主对抗生素、化学药物、 重金属等杀菌剂表现出抗性的一大类质粒的统称。质粒赋予宿主的抗药性遗传是以下机制实现的： 1）改变抗菌素作用的靶位点； 2）修饰抗菌素使其失活； 3）阻止抗菌素进入细胞； 4）生成一种能代替宿主细胞中被抗菌素作用的靶酶。3．产生抗生素的质粒和产生细菌素的质粒 抗生素和细菌素都属于抗菌物质，很多放线菌能产生抗生 素，如SCP1质粒是能使宿主产生抗生素的典型代表，与次 甲霉素A合成有关的基因都位于这个巨型的线性质粒上。细菌素（bacteriocin）是细菌产生的一般只能抑制或杀死 种内不同亚种或菌株中敏感细菌的特殊多肽类代谢产物。细菌素能与敏感菌细胞壁上的专一性受体蛋白结合，进而 抑制或杀死敏感细菌；细菌素产生菌株因含有免疫基因 （imm）而不受其产物的危害。产生大肠杆菌素的Col质粒有非接合型的如ColE1、ColE2、 ColE3和接合型的ColB、ColV、ColIb等，后者具有编码性 菌毛的基因。5．降解质粒：这一类质粒编码的降解酶能降解一些特殊 的有机物，从而使宿主菌能利用许多不容易为一般细菌 分解的物质作为碳源和能源生长。目前只在假单胞菌中 发现。降解性质粒一般也有接合能力和大的分子量。4．产生毒素的质粒：有些使昆虫致病乃至死亡的细菌毒素 也是质粒编码的。目前研究较多且应用广泛的苏云金芽孢杆 菌的毒素蛋白基因大多定位在质粒上。6．致病性质粒：Ti（Tumor inducing）质粒是一种寄生 在根瘤农杆菌（Agradacterium tumefacxiens）中，并能 感染植物（主要是双子叶）的茎形成冠瘿瘤的一种质粒。8．共生固氮质粒：存在于不同根瘤菌中，并能与相应的 豆科植物进行共生固氮的一类质粒。7．隐蔽质粒：已从微生物细胞中检测和分离出来，但其表 型效应尚未确定的质粒。复习思考题 Stringentplasmid、Relaxed plasmid、 segregation instability、 broad host range plasmid 广寄主范围质粒的构建？10. ColE1质粒的复制调控机制？ 11. 检测质粒的方法主要根据什么？ 12. 质粒的遗传表型有哪些？质粒提取A260/A280比值太低对动物细胞转染的影响比值太...A260/A280比值2.2,一次1.6,这样去做转染,效率可能会低一些。用仪器测得的质粒浓度只是质粒的浓度,你指的是A260的换算吧,?如果有RNA及蛋白的影响,它们在260都...为什么KANA抗性的培养基提不出质粒,AMP的却可以啊因为此质粒系带有抗AMP的片段,不带有抗KANA的片段.为了提取质粒,37度180r/mim培养大肠杆菌,如果培养时间过长...菌体老化死亡会发生菌体自溶,第一会影响质粒产出率,第二菌体自溶后可能会有小片段的基因组DNA污染提取的质粒。
- Copyright & 2017 www.xue63.com All Rights Reserved}