您好 G-75微柱凝胶卡柱灌完之后 冲出来都会有气泡 请问您知道怎么解决这个问题嘛?谢谢了

卡维妲私护凝胶有气泡_百度知道
卡维妲私护凝胶有气泡
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卡维妲是骗人的,不要相信
那个有中药成分,是药三分毒
还是大品牌的放心,比方说修正的
我自己用了,效果挺好
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离子交换和凝胶层析装柱时,出现气泡,结节怎么处理
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可以用适量的有机溶剂润洗一下层析柱柱子体积较小的话就用玻璃棒搅匀排除一下气泡等填料均匀沉降后再装柱
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手糊玻璃钢如何防止气泡
手糊玻璃钢件批量生产时如何有效防止表面气泡的产生,还有如何去除表面的蜡.去蜡我用的喷砂机,但是表面出现了很多气泡,想认识你QQ
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手糊玻璃钢常见缺陷及防止方法1. 1:制品表面发粘 2. 在玻璃钢制品生产过程中,往往由于制品暴露在潮湿空气中,或鼓风机,电风扇等排风设备,直吹制品的表面,造成苯乙烯挥发过多,最终层内无含蜡的树脂,引起制品表面发粘的现象。 3. 处理方法: 4. 避免制品低温或潮湿条件下制作。 5. 在树脂中加入0.02%石蜡,防止空气中氧气的阻聚作用。 6. 控制通风方向,避免过堂风,减少交联剂的挥发。 7. 根据室内环境温度,控制引发剂,促进剂等用量。 8. 或直接用加好石蜡树脂使用操作。 9. 2:起皱 10. 玻璃钢制品的起皱,经常发生在胶衣层中,未待第一涂刷的胶衣完全凝胶,就上第二层胶衣,致使第二层胶衣中的苯乙烯,部分溶解了第一层胶衣,引起容涨,产生皱纹。 11. 处理方法: 12. 适当提高工作环境的温度,在上第一层胶衣时,应使用红外线灯泡烘干后,再上第二层胶衣, 13. 待胶衣层凝胶后,再涂刷铺层树脂。适当增加引发剂和促进剂的用量,控制工作室的环境温度,通常在18~20℃之间为宜。 14. 3:针眼 15. 制品表面的针眼,主要原因是在凝胶前,小气泡进入胶衣层;或模具表面有灰尘;或是在添加阻燃树脂时,因粘度过高,加入到容剂挥发,留下了针眼。 16. 处理方法 17. 成型制作时间要用浸渍辊滚,赶走气泡 : 18. 在树脂中适合加入消泡剂,如硅油等: 19. 控制工作环境条件,周围不宜湿度过高,高温也不宜过低 20. 催化剂用量不宜过多,避免过早地凝胶而产生气泡。 21. 增加材料不宜受潮,若受潮后需要经过干燥处理 22. 保持模具表面的清洁。 23. 4,光泽度不佳 24. 玻璃钢制品的表面光泽度不佳现象,常见的有:局部出现无光斑片,或者全部表面失去光泽。 25. 其主要原因是:制品过早地脱模:或脱模剂选择不好 ;或模具的表面不干燥。 25.1. 处理方法: 25.2. 模具使用前,要充分抛光处理,上腊或抛光后,模具表面要用干净的纱布,擦去多余的敷层; 25.3. 制品充分固化后,才开始脱模 25.4. 模具表面要保持干燥 25.5. 5,胶衣层剥落 25.6. 由于制品固化太快,胶衣层发脆;或脱模时装制品背面用力过猛,造成胶衣层的剥落;或铺层的胶衣层没有压实:或模具表面有杂物污染等,均将造成表面胶衣饰剥落现象。 25.7. 处理方法;适当降低固化剂,促进剂的用量,掌握好胶衣层的固化程度; 25.8. 要认真清除模具表面的污染物; 25.9. 进行铺层时,要用浸渍辊滚压密实。 25.10. 6,制品内部出现干斑 25.11. 玻璃钢制品内部出现干斑的主要原因是;树脂未浸透。 25.12. 处理方法; 25.13. 降低树脂的粘度,适当增加苯乙烯的用量; 25.14. 减少促进剂的用量,调整树脂的凝胶时间,使铺层能充分压实。 25.15. 7,分层现象 25.16. 制品产生分层的主要原因,或树脂用量不足,铺层未压密实;或由于空气潮湿玻璃钢纤维毡有水分;或使用了非增强型浸润剂处理的玻纤布; 25.17. 或石蜡处理的原丝未经蜡处理:或在成型操作中第一层完全固化后,才能进行第二层的糊制等,都会产生制品的分层现象。 25.18. 处理方法: 25.19. 玻纤维织物,应尽量选用增强型浸润剂处理过多原丝,如含蜡的需经脱蜡处理,玻璃钢纤维织物中如含有水分,必须经过烘干处理: 25.20. 糊制时要控制足够的胶液用量,并用力涂刷,使铺层密实,赶尽气泡 25.21. 如采用分层固化方法,不宜等到第一层铺层固化完全后,再糊制第二层。 25.22. 8,颜色不均 26. 造成制品颜色不均的主要原因,或是颜料分散不均,搅拌不够;或是颜料过期,分层配料不够;或胶衣树脂涂刷不均,厚度不均;或涂刷垂直面时发生流胶现象;或喷枪压力过大,喷枪离模具表面太近等。 27. 处理 方法: 28. 颜料如炭黑等,需要经研磨机充分研磨,与树脂混合时也应充分搅拌,使颜料分散得非常均匀; 29. 在树脂中需加入触变剂,避免发生垂直面的流胶现象; 30. 涂刷胶衣时必须要均匀涂刷,避免在同一平面上,出现涂刷胶衣厚度不均匀的现象。 31. 9,斑点,鱼眼及凹陷 32. 胶衣表面出现斑点,可能由于颜料,填料或触变剂分散不均匀,或由于模具表面有灰尘等原因而引起。 33. 处理方法: 34. 对模具表面 抛光,并保证模具的表面清洁;注意检查物料混合的效果;应使用辊筒研磨机胶体磨,使颜料分散均匀。 35. 鱼眼及凹陷常出现在胶衣层中间,其产生的原因,可能是由于胶衣树脂,没有充分浸渍模具表面所引起。如果改用聚乙烯醇脱模剂,鱼眼就很少出现。但是使用有机硅改性的脱模剂时,常合发生鱼眼缺陷。 36. 10,纤维显露; 37. 纤维显露的主要原因有:胶衣层太薄;或是胶衣层未充分固化前就开始铺层;或是经长期老化后,表面树脂受机械力,风力的影响而脱落,均将造成表面的纤维显露现象。 38. 处理方法; 39. 增加脱衣层的厚度,或表面层采用涂刷一层树脂层:或采用表面毡,可增加表面层的树脂含量; 40. 在胶衣层或树脂中,加入紫外线吸收剂。 41. 11,表面起泡 42. 玻璃钢制品的表面起泡,有明泡和暗泡两种。常发生在脱模后的短时间内,后固化时间内,或脱模后的几个月内。这种表面起泡现象,主要是由于空气或溶剂,夹杂着胶衣层内铺层料之间;或邻苯型胶衣树脂糊制度制品,在水中浸泡后;或玻璃钢纤维潮湿等,都将可能会引起制品的起泡现象。 43. 处理方法; 44. 制作时应充分压实,使纤维和树脂之间充分浸润; 45. 对于在水中使用的船艇制品,最好选用新戊二醇一间苯型胶衣; 46. 纤维必须干燥,固化剂和促进剂必须分散均匀。 47. 12,开分裂或龟裂 48. 玻璃钢制品的开裂或龟裂,常发生在制品固化后的几个月内,表面为表面树脂出现细裂纹,光泽变暗等。其主要原因是;胶衣树脂层太薄;树脂选择或催化剂用量不当;苯乙烯过量; 49. 树脂固化不完全;或加入过量的填料;产品设计不合理等。另外,当层板受强烈冲击后,制品也会出现星状龟裂现象。 49.1. 处理方法; 49.2. 胶衣层的厚度,应控制在0.3~0.5mm以内; 49.3. 脱模时采用木制锤敲击,或橡胶锤敲击。 49.4. 选用弹性胶衣树脂,且苯乙烯在胶衣中的用量不宜过大; 49.5. 制品要固化完全,以保证产品有足够的刚度。 49.6. 13,凹痕 49.7. 凹痕常发生在加强筋或嵌件处,其主要原因是由于该处树脂收缩而引起。 49.8. 处理方法: 49.9. 解决办法是在加入强筋或嵌件之前,对制品采用先进行局部的固化方法来克服。 49.10. 14,白化和黄化 49.11. 在使用过程中制品表面产生严重起霜或变黄现象。产生原因及防止办法如下: 50. 白化的主要原因及解决办法; 50.1. 胶衣树脂固化不完全,适当改变固化剂系统的配比及用量 50.2. 颜料或填料选用不当用量过多,必须严格控制其用量; 50.3. 树脂配方选错,不适用于使用条件,必须正确选好树脂的配方; 50.4. 树脂或纤维中混入水分,操作环境湿度太大,必须克服水分或湿气动影响。 51. 变黄原因及解决办法: 51.1. 工作室内的速度太大,或增强材料干燥,应要保证原材料的干燥和低湿度大工作环境;51.2. 树脂选错或固化不完全,应选用光稳定性树脂,使制品固化完全后再使用; 51.3. 用过氧化二苯甲酰和胺类促进剂易变黄,过用过氧化甲乙酮和无色促进剂后效果较好。51.4. 15,鼓起变形 51.5. 鼓起 51.5.1. 鼓起现象常发生在铺层之前,胶衣层就脱开模具鼓起,特别容易出现在棱角之处。产生的原因往往是由于模具的底部,沉积了苯乙烯的蒸汽。或涂制胶衣放置时间太长,涂刷胶衣过厚等。 51.5.2. 处理办法; 51.5.3. 将模具放置在适当的位置,使苯乙烯蒸汽易散发掉,或采用排气机系统排气; 51.5.4. 临界的胶衣层,不要太厚; 51.5.5. 减少催化剂的用量。 51.5.6. 变形 51.5.7. 变形常发生在脱模之后,其主要原因是制品未充分固化就脱模,或产品增强筋的强度不足; 51.5.8. 或表面未采用表面毡增强,产生的收缩应力太大;或放置方法不当:或模具产生变形。 51.5.9. 处理方法 52. 制品脱模前,应控制树脂达到充分的固化; 53. 改进产品设计,抵消制弯曲应力; 54. 树脂层应增加表面毡,以起到必要的增强作用; 55. 经常检查模具的变形情况,产品脱模后,用挡架支掌产品: 56. 产品的面积太大,需要埋入加强筋,并且要求产品应固化完全后才开始脱模。 56.1. 16,局部收缩 56.2. 制品局部收缩的主要原因,是局部的树脂用量太多,或制品局部的厚度太大。 56.3. 处理方法; 56.4. 不让拐角,凹槽处的树脂积滞过多; 56.5. 等产品充分固化后再加筋。 56.6. 17,产品烧焦 56.7. 制品烧焦的主要原因,是固化剂和促进剂的用量过多,散热环境较差,或制品糊得太厚。 56.8. 处理方法; 56.9. 严格控制固化剂和促进剂的用量; 56.10. 采取分层固化的方法施工。 56.11. 18,制品硬度和刚度不足 57. 制品硬度和刚度不足的主要原因,是选材不当,或固化不完全。 58. 处理方法; 58.1.1. 控制固化剂与促进剂的用量,适当提高其用量的比例 58.1.2. 室内环境温度应在18℃条件下后固化处理3h的时间 58.1.3. 检查增强材料的用量,是否
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关键是手糊工操作的问题,你按我的要做就没有你说的情况发生了,第一次胶衣或树脂浆浓度不要高了,偏稀些,但要保证不要流得利害,第二次可以稍浓,等到七成固化后就可以做一层02#纤维布,等到固化后检查遗留的你说的气泡并处理好,处理的方法就是用刀削开用树脂干灰补好,之后就可以做04#布了,04#也不能初心,这样才能保证你的问题不会出现!好了,我想要对你说的就是这些了!
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别信上面的,呵呵我从事玻璃钢生产也有几年了,个人认为防止气泡的办法除了技术的原因,最有效的解决办法还是提高糊制工人的熟练程度和认真程度!表面的蜡,好像从来没听说过用喷砂机,都是用毛巾尽量擦干净就行了,不知道你做的是什么产品,可发消息。。。
可以加些消泡剂
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硅胶柱层析   硅胶柱层析原理  硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。   硅胶柱层析流动相  极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸  硅胶柱层析惯用方法  1.称量。200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。  2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇。如果样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱。  3.装柱。将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。  4.压实。沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。  5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。  6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,0.5ml收一馏分;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收一馏分。  7.检测。要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。8.送谱。收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰硅胶柱清洗方法正相的我们一般都只使用一次,反相的才反复使用。在做实验时我们用硅胶装的玻璃柱在使用时一般都是一次性的,但如应用至规模化生产时这样的操作不免很浪费,可以想像,一根装有接近200kg硅胶填料的柱子在使用一次后就扔掉的壮观景象。当然,重复使用的情况一般在物料纯度较高,色素很少的情况下才能实现。我们曾经尝试过装好的柱子(180kg填料)可以重复使用近12次,而且在使用的过程中,第一次的效果并不是最好的,从第二次开始到后来层析的效果比较稳定,效果也不错,然后是有一个缓慢下降的趋势,到最后不能使用却是突然性的。 如果物料纯度确实太差,那也没办法,只能将用过的硅胶拿去再生后重复使用了。 硅胶在使用过程中因吸附了介质中的水蒸汽或其他有机物质,吸附能力下降,可通过再生后重复使用。一、硅胶吸附水蒸汽后的再生 &硅胶吸附水份后,可通过热脱附方式将水份除去,加热的方式有多种,如电热炉、烟道余热加热及热风干燥等。 &脱附加热的温度控制在120--180℃为宜,对于蓝胶指示剂、变色硅胶、DL型蓝色硅胶则控制在100--120℃为宜。各种工业硅胶再生时的最高温度不应超过以下限度: & &粗孔硅胶不得高于600℃; & &细孔硅胶不得高于200℃; & &蓝胶指标剂(或变色硅胶)不得高于120℃; & &硅铝胶不得高于350℃。 &再生后的硅胶,其水份一般控制在2%以下即可重新投入使用。二、硅胶吸附有机杂质后的再生 &⒈ 焙烧法 &对于粗孔硅胶,可放在焙烧炉内逐渐升温至500--600℃,约经6—8小时至胶粒呈白色或黄褐色即可。对细孔硅胶,焙烧温度不能超过200℃。 &⒉ 漂洗法 & 将硅胶在饱和水蒸汽中吸附达到饱和后放热水中浸泡漂洗,并可结合使用洗涤剂以除去废油或其它有机杂质,再经净水洗涤后烘干脱水。 &⒊ 溶剂冲洗法 & 根据硅胶吸附有机物种类,选用适当的溶剂将吸附在硅胶内的有机物溶出,然后将硅胶加热以脱除溶剂。三、硅胶再生应注意的问题 &⒈ 烘干再生时应注意掌握逐渐提高温度,以免剧烈干燥引起胶粒炸裂,降低回收率。 &⒉ 对硅胶焙烧再生时,温度过高会引起硅胶孔结构的变化而明显降低其吸附效果,影响使用价值。对于蓝胶指示剂或变色硅胶,脱附再生的温度应不超过120℃,否则会因显色剂逐步氧化而失去显色作用。 &⒊ 经再生后的硅胶一般应过筛除去微细颗粒,以使颗粒均匀。
正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。向柱内导入碱性溶剂(pH&7.0)或酸性溶剂(pH&2.0)会导致柱子损坏。在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。未正确地使用不能享受保修待遇。 & & & & & & & & & & & 1. 简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。反相(C8,C18,ODS,RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。极性胶联型(APS,diol,CN和NH2)依照应用目的,可以用于正相和反相条件。建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下,这是因为柱子在特定的条件下,固定相的性质会发生变化,所以在其他的条件下,会影响柱效。也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下,这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。2. &色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。A.在反相条件下老化要老化这类柱子,首先要使用乙腈或者甲醇淋洗,然后你选用的洗脱液进行平衡。在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂),建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应当首先以低流速进行,最后再使用正常流速。B.在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。C.对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件,在进行老化以前,一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。如果这些溶剂不能混溶,必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。3.洗脱液注意第节和第2节。一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液,这是由于它们会改变固定相的性质。极性键合柱最好使用在3到5 之间。在使用以前,洗脱液要进行脱气,以及使用0.5微米的滤膜过滤,以免发生检测和泵送问题。一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。4. 流量和压力注意:最高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。5.样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。特别地,要禁止导入颗粒杂质。这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。6.保护柱一定要使用保护柱,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。对于ChromSep 柱我们建议使用正确型号的ChromSep 保护柱。这个柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。对于常用不锈钢柱,我们建议使用相同型号的Chromguard High Efficiency(高效)柱(10X3.0mm) 或High Capacity(高容量)柱(50X3.0mm)。7.进样量和浓度柱子的最大载样量取决于:柱子的型号,使用的条件和样品的类型。很难给出一个一般的指示。注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。8.温度HPLC柱最好在柱温箱中使用。重复性取决于温度控制。最佳的温度与特定的应用有关。温度影响洗脱液流动的线速度。在使用ChromSep玻璃柱的时候,一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。9.贮存一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。 贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂,以防止有细菌的生长。10. 柱效损失的可能原因1. 额外的峰展宽。当使用小直径或者长度较短的柱子时,峰展宽的情况可能比较明显。要保证管路的长度和内径都保持最小。检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。2. 洗脱的平衡时间不够。3. 不正确柱温。4. 不正确的修正浓度。5. 床压缩。使用了过大的洗脱流速。将柱子反向,使用低流速。11.柱效丧失和/或高背压1.颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上(它们都会使背压增高)。如果柱压增高了,将柱子与进样器断开,运行泵,以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染(样品、洗脱液和系统)。倒转柱子,以反向的流动来冲洗柱子。如果这样不能解决问题,更换进口过滤器或者筛板。2.微生物在洗脱液中生长。倒转柱子,尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。更换进口过滤器或者筛板。3.有蛋白质脂肪,油脂污染或者极性化合物等污染。再生柱子(见第12节)。12.再生1.再生反相色谱柱a.首先倒转柱子。b. 以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟,使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。c. 柱子转回正常方向,使用分析所用洗脱液平衡。注意:在使用另外的淋洗方法的时候,一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液,保证其后的洗脱液可以混溶。2.再生硅胶柱a.首先倒转柱子。b.以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟,使用的溶剂的顺序要按照异辛烷(或己烷)—乙酸乙酯—干燥的异辛烷(或己烷)进行。c.柱子转回正常方向,使用分析所用洗脱液平衡。3.再生极性键合柱取决于使用的条件,可以使用反相的条件,也可以使用硅胶柱的条件。注意:绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱,因为可能与固定相发生反应。四氢呋喃作为替代可以使用。作者: ruitao & 发布日期: 我用的普通硅胶的柱料,不是液相上的反相柱,感觉吸附的厉害,有颜色.请问怎么再生啊
过硅胶柱的经验<span style="display:inline-text-indent:0;min-width:0. 装柱装柱子(添硅胶)时,常用的有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。不论干法还是湿法,硅胶(称为固定相更为广义)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右(长度没有绝对之说,根据自身情况而定,制备的大柱可以长达一米),太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。 湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压(土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气,当然不加压也可以)用淋洗剂&走柱子&,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。 (我一般都用湿法装柱)干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧(湿法也要敲的,效果好点),至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实(一般柱子不敢用油泵抽,怕把柱子抽裂了)。接着是用淋洗剂&走柱子&,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。干法装柱较方便,但最大的缺陷在于&走柱子&时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到)(梯度洗脱时,湿法装柱也会出现该情况,比较不好处理,可以缓慢改变溶剂,且置于通风处),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚(用乙醚最最明显),二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。解决的办法是:第一、硅胶一定要压结实;第二、 一定要用较多的溶剂&走柱子&,一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。 &也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸,撒上石英砂,再放些棉花),防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐。但我的感觉是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要。二、上样上样也有干法和湿法之分:干法(也称硅胶制沙)就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。(我一般喜欢用这种方法,除非不能用)湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较大的溶剂,但必须少量)将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后,再加入。湿法较方便,但不溶剂让其完全被硅胶均匀吸附,不容易跑的很平整柱层析关键在于柱子是否装好(这是最大影响因素)和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。这里要指出的一点是:TLC(作用还是很大的)的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。上样完毕后,接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同,即使两者使用的硅胶都相同,但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以要稀释一倍,但又不能稀释太多,否则成了靠扩散作用来分离,效果也不会好。(这一点很实用,不过有些特殊情况也不一定,如果要保险可以先做根小柱子跑一下,这样最安全,就是花点时间)三、收集主要依靠TLC(据说国外有石英柱,直接用荧光灯照能看出来,不过太贵了,在国内不一定适用),需要切记的是: 第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时,多尝试几种比例不同,成分不同的展开剂。展开剂的极性太小,点分不开,极性太大,也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。第二、点不能点得太浓(在最后时应该点的浓点,这样看看有无收尽产品),否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点了。 第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关,只有两者比较合适才能有一个交好的分离效果。 选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷&己烷&苯&乙醚 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献(这是首选)中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。不行可以尝试两两混合,三者混合,一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果,如果没有分开的迹象,最好是换溶剂。 在利用TLC跟踪反应时,在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A,每种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等,然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点 一个混合点X,这些点在板上的位置如图所示: A X B C D 这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置,把A这个点展开后的各个层份的 点与B,C,等原料比较,从而判断原料消失没有,点混合点X的目的在于,方便观察,因为有时候,板展开后,各点的位置有些变形,或者由于边缘效应等等,使得判断不易。(用小板,跑的快,很快见到结果,为了避免小板的边缘,用机器板较好)利用TLC判断物质的纯度时,如果不能完全确定,可以再结合其他检测手段,如NMR,因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是,由于H-NMR可鉴别 的纯度也就在95%左右,有时候H NMR现示较纯的东西,一点板就会发现有几个点。所以,两者要结合使用。如果有标准品或是以前做过的,对个对照最方便。 反相色谱柱的使用与维护凝胶色谱柱的使用方法看到很多虫友问葡聚糖凝胶的使用方法,所以将自己的一点经验写下来,以作参考。葡聚糖凝胶柱的使用方法大体有一下步骤:(1) 预处理称取葡聚糖凝胶(有不同型号)若干克,加入洗脱剂(通常为甲醇或者水,这里以甲醇为例)约20倍凝胶量,置室温下3h进行溶胀,溶胀必须彻底,否则会使上柱后流速变慢,凝胶断裂等。(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧,用洗净的玻璃丝(约200目尼龙布)垫底或购买类似规格的商品柱。然后将柱垂直安装好,接着将溶胀好的凝胶边搅匀边缓缓连续装入,色谱柱的出口流速m维持在5~10ml/min。凝胶颗粒沉积到柱底后关紧色谱柱,等沉降到1-2cm时再2打开色谱柱。直至降到满意高度为止,等凝胶柱内的液体留的与凝胶高度差不多时,用较小的滤纸盖住凝胶床表面,再用洗脱剂洗脱过夜。装柱后的凝胶必须均匀,不能有气泡或明显条纹。否则,必须到出重装。(3) 加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡,待洗脱剂流至与凝胶柱液面相平时(不能流干,否则会带入气泡),用滴管吸取样品溶液,在高于凝胶表面约1cm处,沿管壁四周缓缓滴加样品液,加完后打开下面的出口,使样品渗入凝胶内。再关闭出口,用少量洗脱液将管壁残留的样品洗下,再打开出口,至溶液渗入柱内,再关闭出口。可以考虑再加一层薄薄的脱脂棉以保护柱表面(我一般不加),然后即可进行洗脱。(4) 洗脱与收集洗脱时,用甲醇作洗脱剂,并且要连续不断地进行,使凝胶柱上端保持一定的液层,防止凝胶柱表面的液体流干。一般酸性洗脱剂中碱性物质容易洗脱,碱性洗脱剂中酸性物质容易洗脱。多糖类物质等极性大的物质考虑用水洗脱,常用的洗脱剂是水-甲醇,水-乙醇,水-丙酮等,一般根据自己样品的性质选择洗脱液,洗脱液可一直用单一梯度。凝胶色谱的共性是流速慢,每份一般体积较小。(内径1.3cm左右,长80cm左右的柱子我一般每份收集液为8ml)(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱多次使用后,若污染严重,则考虑用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl混合液浸泡后,再用水洗净即可。凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)凝胶过滤层析法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析(molecular-exclusion chromatography)。一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 一般是大分子先流出来,小分子后流出来。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,小分子物质能进入其内部,流下来速度慢,而大分子物质却被排除在外部,下来的速度快,当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。凝胶过滤层析技术原理讲解凝胶过滤层析(Gel Filtration Chromatography,GFC)又称尺寸排阻层析(Size Exclusion Chromatography,SEC)凝胶渗透层析(Gel Permeation Chromatography,GPC)分子筛层析(Molecular Sieve Chromatography,MSC)(2)应用范围A蛋白质分离,基于混合中不同蛋白质分子尺寸大小进行分离;B分子量测定,蛋白质分子量(球形)的对数与其在凝胶过滤层析时的保留时间呈线性关系;C样品脱盐或溶剂置换。(4)凝胶过滤常用填料种类Sepharose 2B700Sepharose 4B600Sepharose 6B10Sepharose CL-2B700Sepharose CL-4B600Sepharose CL-6B10Superpose琼脂糖经多次交联形成的凝胶。Superose 60Superose 12其它凝胶:聚丙稀酰胺葡聚糖凝胶,交联聚苯乙烯凝胶,聚乙烯醇凝胶等,还有更多新型号的凝胶。}

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