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5_磷酸吡哆醛影响血清丙氨酸氨基转移酶测定的研究
MedicalLaboratoryScienceandClinics,2007,Vol18,No.3　医学检验与临床　2007年第18卷第3期5’-磷酸吡哆醛影响血清丙氨酸氨基转移酶测定的研究张宗彬　鲍　杰　陈龙泉　李传胜　马洪波(山东省淄博市淄川区医院,山东淄博255100)【摘要】　目的　研究丙氨酸氨基转移酶(AlanineAminotraasferase,ALT)检测试剂中5’-磷酸吡哆醛(Pyrldoxal-5’-phos2phate,PLP)的添加对血清ALT活力测定的影响。方法　按IFCC推荐方法,自配ALT检测试剂(含PLP)和相应不添加PLP的检测试剂,分别用这两种试剂测定相同的新鲜临床标本,并对检测结果进行统计学比较。结果　使用含PLP的IFCC配方试剂较不含PLP试剂的检测结果明显增高。结论　健康人群和不同疾病人群由于个体差异,体内PLP含量不一,各组数据表明不含PLP配方试剂较IFCC配方检测结果明显偏低,因此两种配方的检测结果不能通过简单系数实现转换。【关键词】　丙氨酸氨基转移酶;5’-磷酸吡哆醛;IFCC推荐方法EffectionofPyridoxal-5’-phosphateonDetermination　ZhangZong2bin,BaoJie,ChenLongquan,LiChuansheng,Hospital,ZiboCity,ShandongProvince,255100)【ofPyridoxal-5’-phosphate(PLP)ondetectionofAlanineAminotransferase(ALT)ac2tivites.torecommendatorymethods,reagentswithPLPandwithoutPLPwerebothprepared,ALTweredetevtedandcomparedaseries.ResultsThelevelofALTisobviouslyhigheringroupwithPLPreagentthantheothergroup(reagentwithoutPLP).Con2clusionForPLParedifferentindifferentpopwlation,theALTresultsoftwomethodscannotbeconvertedbyusingsimplecoefficient.【Keywords】AlanineAPyridoxal-5’-IFCCrecommendatorymethods维生素B6包括吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺三种衍生物,广泛存在于自然界中,它们在化学性质、代谢和功能上密切相关,且都具有VitB6的活性。其中植物中以吡哆醇为主,而吡哆醛和吡哆胺则主要存在于动物中,三者在人体内可以互相转化。维生素B6在体内经磷酸化作用转变为相应的磷酸酯,即维生素B6的辅酶形式,包括磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺,它们之间也可以相互转变,均为活性型。磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺在氨基酸代谢中非常重要,是氨基酸代谢中的转氨酶及脱羧酶的辅酶,通过两者互变起着传递氨基的作用。我们着重研究在测定血清中丙氨酸氨基转移酶时,检测试剂中5’-磷酸吡哆醛的添加与否对检测结果的影响。剂,然后再配置下述两不同配方试剂。配方一(后面标示为ALTI),取适量基础试剂,按IFCC推荐方法要求,在反应液中加入的5’磷酸吡哆醛溶液;配方二(后面标示为ALT2),取与配方一相等量的基础试剂,用亚沸水代替5’-磷酸吡哆醛溶液,即在反应液中加入等量的亚沸水;(3)检测样品:临床新鲜冰冻血清标本100例,其中健康人群50例,来自本单位门诊患者:肝病30例、肾病20例(含透析病人3例)均为本单位住院患者。1.2　方法1.2.1　常规开机,做好仪器日常维护工作;(2)参数设置:测定方法为速率法,反应温度为37℃,光径为10mm,反应时间为10min,孵育时间为5min,延迟时1　材料与方法1.1　材料1.1.1　检测仪器:HITACHIU-3310分光光度计;(2)检测试剂:按照国际临床化学和检验医学联合委间为1.5min,测定间隔为3min,检测波长为340nm,理论因素为-1905,读数(测定点)为≥6,反应液/样品/起始液容量为2ml/0.2ml/0.2(3)标本检测:测定前从冰箱中取出新鲜临床血清标本,充分解冻和混匀,严格按IFCC推荐方法文件描述过程进行检测,记录检验结果。员会(IFCC)推荐方法配置丙氨酸氨基转移酶基础试医学检验与临床　2007年第18卷第3期　MedicalLaboratoryScienceandClinics,2007,Vol18,No.3　　　　　　　　　　　1.3　统计分析　用Excel2000进行线性回归及相关系数计算(以IFCC推荐方法为X轴,不含PLP的的试剂检测结果较IFCC推荐方法系统偏低约22%。本组标本来源为门诊病人,可能由于浓度分布不合理等因素导致本组数据不宜进行两者参考值范围的分析比较。此外可能由于个体差异,每个人体内PLP含量不一,因此用两种配方试剂的检测结果的相对百分偏差规律不明显。肝病组30例,与健康人群结果有相似性,Y=0.6,r=0.9946。肾病组20例,回归方程为Y=0.,r肾病透析患者(附表2)其含PLP试剂结果较结果为Y轴):以IFCC推荐方法检测结果为参比方法,计算另一方法结果的相对百分比偏差。2　结　果2.1　两种配方试剂对不同人群组的ALT活性测定结果见附表1、2。表1　不同人群组ALT活性测定结果临床标本结果总体均值ALT1(X)ALT2(Y)1284115组别相对差值相对百分偏差%ALT2-ALT1-5-21-34(ALT2-ALT1)/ALT1-28.15-19.80-22.75不含PLP试剂的检测结果约高出1倍,分析可能为透析后其血液中PLP含量极低所致。综合观察各实验数据,不论是健康人群,还是不同疾病组患者,其检测结果都无绝对一致的系统偏差,上述数据显示相对偏差由0-47.24%?不等。LP关,IFCC推荐方法间不能。ALT活性测定方法主要有赖氏和速率法,赖氏法由于测定影响因素多、不适宜全自动生化仪上应用,目前该方法仅在一些较小的单位使用。而速率法为国内外普遍应用,又有含与不含PLP两种配方试剂,当前IFCC组织公布方法为含PLP,但国内应用的速率法多为不含PLP试剂盒,国内企业也甚少生产IFCC推荐方法试剂;国际知名大公司都提供有两种配方商品试剂,其含PLP试剂主要在其本国或国际市场上使用。为了尽量避免因个体差异等所致血中PLP含量不一对ALT活性的影响和能更确确地反应标本中ALT的活性,更有利于机体健康状况的评估和某些疾病的诊断,建议今后能采用IFCC推荐方法。参考文献健康人群组50肝病组30肾病组20注:个体标本测定值相对偏差从0%到46.67%不等。表2　肾病组3例经过透析治疗患者的ALT活性测定结果临床标本结果组别样本号ALT1(X)1ALT2(40相对差值相对百分偏差2-179-35(ALT2-LT1)/A-25-39.11-46.67肾病组2.2　2.2.1　健康人群组:Y=0.1,r=0.9728;(2)肝病组:Y=0.6,r=0.9946;(3)肾病组:Y=0.,r=0.8824。3　讨　论血清中ALT以全酶和脱辅基酶形式同时存在,磷酸吡哆醛为其辅酶,在反应中与酶蛋白结合便得到全酶,起到传递氨基作用。因此在ALT活性检测中,磷酸吡哆醛可明显提高ALT显示活性。本文实验数据显示用两种试剂测定健康人群和患病者的ALT活性结果存在明显差异,含有PLP的试剂检测结果明显增高。具体情况为:50例健康人群组回归方程为Y=0.1,r=0.9728,两者显示较好的相关性,从方程可分析出不含PLP[1]IFCCPrimaryReferenceProceduresfortheMeasurementofcatalyticAc2tivityConcentrationsofEnzymeson37℃.ClinChemLabMed,):718-724.百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网92to.com,您的在线图书馆
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