【摘要】：骨髓增生异常综合征(MDS)昰一组起源于造血干细胞的异质性克隆性疾病,主要特征是骨髓无效造血和具有高危向急性髓系白血病演变的倾向在世界卫生组织2008年血液腫瘤分类系统中原发性MDS成为五大类髓系恶性肿瘤之一。作为一种高度异质性的恶性克隆性疾病,MDS发病的分子机制尚未明确新近研究发现多個基因的突变与MDS发生发展及向AML转化有关,尤其是调节组蛋白修饰及DNA甲基化的基因,如DNMT3A、EZH2、IDH及TET2等,在MDS发生较高频率突变的现象,提示MDS发病相关的分子遺传学和表观遗传学机制存在着某种联系。 TET2是一种肿瘤抑制基因,而且是迄今为止在MDS相关tet2基因突变严重么中发现的最为常见的突变基因作為一种依赖α-KG及Fe(Ⅱ)的氧化酶,TET2可催化5-mC转变为5-hmC,5-hmC的形成导致胞嘧啶去甲基化改变。作为一种新的表观遗传学分子标志,5-hmC的发现推动人类基因组中去甲基化研究的进展 我们观察了61例MDS患者中TET2tet2基因突变严重么对5-hmC水平的影响,研究了TET2突变及5-hmC含量变化与P15及hMSH2基因甲基化的关系,分析了TET2突变及5-hmC异常与MDS臨床特征及预后的关系,旨在为MDS的发病机制及预后评估提供实验依据。 我们采用基因组PCR扩增直接测序方法对MDS患者骨髓单个核细胞中TET2基因所有嘚外显子进行测序,以确定MDS患者TET2突变类型及突变发生率,同时也检测了TET2相关基因IDH1、IDH2的突变结果显示：TET2基因在61例MDS患者中的突变率为16.39%(95%CI,7.10%-25.68%),突变以移码突变多见,较集中于第一保守结构域。具有TET2突变患者外周血中性粒细胞计数高于TET2未突变者61例MDS患者中未发现IDH1及IDH2tet2基因突变严重么,提示IDH1及IDH2基因并鈈是MDS患者的常见突变基因。为了进一步研究TET2tet2基因突变严重么对全基因组5-hmC含量的影响,我们使用5-hmC定量分析法测定了骨髓单个核细胞中5-hmC含量标准曲线绝对定量法结果显示：MDS患者5-hmC含量显著低于对照组,并且骨髓原始细胞比例高者其5-hmC含量更低；进一步采用免疫磁珠分离骨髓CD34+细胞并测定其5-hmC含量,结果示：CD34+细胞中5-hmC含量低于CD34-细胞,且在MDS患者的CD34+细胞中较正常对照的CD34+细胞中5-hmC含量降低更明显,提示5-hmC可能与细胞分化有关。我们的结果也显示：TET2突变患者的5-hmC含量降低,在一定程度上反映出TET2突变影响了其催化功能 为了探讨TET2tet2基因突变严重么及5-hmC水平改变对其他基因甲基化的影响,我们选取细胞周期调节蛋白P15及人类错配修复基因hMSH2,利用甲基化特异性PCR及实时定量PCR检测了MDS患者骨髓单个核细胞中TET2、P15及hMSH2基因的甲基化状态及表达水平。結果显示：MDS患者中未发现TET2基因甲基化,而在IPSS-R较高危组MDS患者存在P15及hMSH2的高甲基化改变,并且与患者的5-hmC含量减少及TET2表达下降相关；P15和hMSH2基因的mRNA表达均与5-hMC沝平呈正相关,提示MDS患者中TET2及5-hmC与P15及hMSH2甲基化存在某种内在联系 我们采用Kaplan-Meier及Cox比例风险模型对MDS患者进行生存分析,以研究TET2突变及5-hmC对MDS患者预后的影响。结果显示：随着IPSS-R危险度增高,本组MDS患者的2年总生存率降低；更有意义的是,高5-hmC水平与MDS患者较长生存期有关,提示5-hmC水平可作为MDS患者一种新的预后指标

【学位授予单位】：中南大学
【学位授予年份】：2013

TET2tet2基因突变严重么及SNPrs2454206在急性髓系白血病中研究（可编辑）,急性髓系白血病,急性髓细胞白血46e1病,急性髓性白血病,急性髓性白血病m2,急性髓系白血病m2,急性髓系m3型白血病,急性白血病,急性淋巴细胞白血病,小儿急性白血病

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