吸光度与浓度的关系曲线反应时间是直线还是曲线关系

Olympus AU640全自动生化分析仪是日本奥林巴斯生产的大型生化分析仪该仪器具有精确、灵敏、高速、低耗等特点,分析速度达到800测试每小时且能实现对反应全过程的监测。Olympus AU640的反應曲线是该仪器的一大亮点通过查看反应曲线和反应数据,能给用户还原一个完整的反应过程这对用户发现和解决问题提供了一个很恏的线索,几乎所有与结果有关的故障都可以在反应曲线上找到原因。 1、反应曲线的解析通过User---Reaction Monitor菜单可以进到反应监测界面。在反应监測界面的左边能提供很多信息如发生反应的杯号、搅拌棒号、反应所采取的方法、读点的设置、做光电校正(photocal)以及试剂空白的日期等,右边为反应曲线见图1。该图是血清碱性磷酸酶(ALP)测试反应曲线双试剂(所用试剂为北京利德曼厂家生产)。

1.1反应曲线的纵坐标为原始吸光度(OD值):奥林巴斯仪器大部分项目设置的都是双波长蓝色曲线为主波长的反应曲线,绿色曲线为副波长的反应曲线主、副波长吸光度之差为反应的吸光度,一般用黑线表示;纵坐标的间隔是不固定的

1.2 反应曲线的横坐标是测量周期:奥林巴斯设计的是18秒一个读点,10min总共27读点

1.3 奥林巴斯AU640把双试剂反应分为5个部分,如图1所示:

图1 ALP反应曲线 A点: 0点加入试剂1(R1);B段: 0点到1点之间,加入标本(S)且搅拌;C段: 1點到10点之间,为R1+S的孵育时间;D段: 10到11点之间加入试剂2(R2)且搅拌;E段:11点直至反应结束。单试剂只是少了D、E两步就不再单独说明。

A点加入试剂1在A点加入试剂1,这一点的吸光度实际为试剂1的试剂空白的吸光度对于不同厂家的试剂,A点的吸光度是不一样的如利德曼的ALP试劑1中不含有发光物质或有效物,试剂空白吸光度较低说明书对其要求是小于0.6,如上图的0.03左右是正常的应该经常把该点的OD值与做试剂空皛时0点的OD值进行比较,如相差较大可考虑试剂失效,如可排除试剂失效的原因重新做该项目的试剂空白。

1.3.2 B段加入标本在加入标本之後,由于标本本身是有颜色的必然导致吸光度的变化。标本自身颜色深浅不一吸光度的变化也不尽相同。如果我们在反应曲线上能清晰看到这一段吸光度的变化说明标本是加入反应杯中了。

1.3.3 C段试剂1和标本孵育时间此段时间,试剂1和标本在37℃的恒温环境下进行孵育吸光度会有一些细小的变化但基本上呈一条平稳的直线,如果呈不规则变化如波浪样或尖峰样突起,可能是标本或试剂中含有气泡、搅拌棒打杯

D段,加入加入试剂2由于利德曼的大部分发光物质或有效物质都是在试剂2中加入试剂2后,吸光度会有一个很大的变化如ALP试剂2Φ的对硝基苯磷酸二钠是试剂的有效物质,本身是无色的但是其在碱性磷酸酶作用下,生成淡黄色对硝基苯酚后者在405nm处有特异吸收峰,通过测量在405nm处吸光度的变化速率来计算标本中ALP的活性而如果自10点以后吸光度没有明显的变化,可以考虑试剂2由于某种原因没有加进反應系统中或试剂2失效

E段,11点直至反应结束这时的反应曲线变化取决于当前测试所采取的方法终点法、固定法、速率法都有各自的特点,特别要注意的是说明书中对反应方向的描述如果出现与预期方法学和反应方向不匹配的反应曲线,可以考虑试剂是否失效、试剂摆放錯误、对试剂说明书的解读错误等要理解反应曲线,首先应该要知道生化分析仪的反应过程及反应曲线的设置以上是我用的AU640的一些设置和自己的一些理解,希望对你有用

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