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有没有熟悉KASP技术的高手，求解惑收藏
最近对KASP技术感兴趣，因为能它经济高效的筛选SNP，对遗传图谱的建立非常有用，但是在看这个技术的原理时，有一点让我无法完全理解。根据LGC网站上的介绍，KASP的原理是这样的，在PCR第一轮，使用两条5’端带不同尾巴片段和3‘末段带的不同单个碱基（用以识别不同的SNP）的正向引物（引物A和B）和一条通用反向引物进行扩增，这两条正向引物中能和SNP配对的就能扩增产物，假如不能配对，就不能扩增产物。在PCR第二轮，反应系统中另一套带有不同荧光基团的正向引物继续进行扩增（引物C和D），这些新引物能分别识别PCR第一轮时所使用的正向引物的5‘端尾巴片段，据此完成SNP的分型。但根据我的经验，仅仅是正向引物3‘端一个碱基的错配似乎无法阻止扩增的进行，也就是引物A和B都能完成扩增，那么SNP分型也就无从谈起，我的观点对吗？不对的话，谁能帮忙解释一下？谢谢
单碱基差异，带来的结合效率差别可以是几十倍，所以错配的模板也会得到扩增，但是检测到的荧光值会低于阈值，你看一下，就如这张图，两个坐标分别是不同颜色的荧光强度，分别区分同一位点里不同的SNP基因型，左上端红色和右下端蓝色的都是单道荧光值比较高的，可以认为是不同SNP的纯合子，中间的绿色是两种基因型都存在的杂合子，下端的灰色区域就是不存在这两种基因型的样品，可能也有较弱的信号，但低于阈值。
Taq酶的特异性高，相对背景低一些，KASP的优点就是实验优化简单，优化的成本也低，比其他方法如Taqman，Sequenom简单的多，就像普通PCR一样，多加几个循环，或者调整温度，看着荧光散点就分开了，call rate还不错。
还没做过，正准备学习，借鉴了！
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