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您所在位置：&>>>&&&&叠氮化钠
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美国、德国、瑞典、国产
【简单介绍】
公司优势经营叠氮化钠，免费包邮，产品质量高于国家标准，让您实验更高效。
【详细说明】
生化试剂的一些概要：生化试剂又叫生化药品，简称试剂。它是工农业生产、文教卫生、科学研究以及国防建设等多方面进行化验分析的重要药剂。生化试剂是指具有一定纯度标准的各种单质和化合物（也可以是混合物。要进行任何实验都离不了试剂，试剂不仅有各种状态，而且不同的试剂其性能差异很大。有的常温非常安定、有的通常就很活泼，有的受高温也不变质、有的却易燃易爆：有的香气浓烈，有的则剧毒&&。只有对生化试剂的有关知识深入了解，才能安全、顺利进行各项实验。既可保证达到预期实验目的，又可消除对环境的污染。因此，首先要知道试剂的分类情况。然后掌握各类试剂的存放和使用。下面是公司生化试剂产品： &葡聚糖凝胶G-75，交联葡聚糖凝胶G-75，交联右旋糖酐凝胶G-75，Sephadex G-75 分离:肽及球形蛋白质：；葡聚糖（线性分子）： 10克
RT100克 25克 100克 葡聚糖凝胶G-100，交联葡聚糖凝胶G-100，交联右旋糖酐凝胶G-100，Sephadex G-100 分离：肽及球形蛋白质：；葡聚糖（线性分子）： 10克
RT100克 25克 100克 葡聚糖凝胶G-150，交联葡聚糖凝胶G-150，交联右旋糖酐凝胶G-150，Sephadex G-150 分离：肽及球形蛋白质：；葡聚糖（线性分子）： 25克 RT100克 100克 25克 100克 葡聚糖凝胶G-200，交联葡聚糖凝胶G-200，交联右旋糖酐凝胶G-200，Sephadex G-200 分离：肽及球形蛋白质：；葡聚糖（线性分子）： 10克 RT25克 25克 100克 葡聚糖凝胶LH-20，交联葡聚糖凝胶LH-20，交联右旋糖酐凝胶LH-20，Sephadex LH-20 分离中等大小生物分子，球蛋白分离范围100～克 RT500克 25克 100克 葡聚糖凝胶LH-60，交联葡聚糖凝胶LH-60，交联右旋糖酐凝胶LH-60，Sephadex LH-60 分离400～20000 25克 RT100克 500克 羧甲基葡聚糖凝胶C-25，CM葡聚糖凝胶C-25，羧甲基交联葡聚糖凝胶C-25，羧甲基交联右旋糖酐凝胶C-25，葡聚糖凝胶CM-C25，CM Sephadex C-25 应用：MW＞20000；载量4-5mmol，g 25克
RT100克 25克 100克 羧甲基葡聚凝胶C-50，CM葡聚糖凝胶C-50，羧甲基交联葡聚糖凝胶C-50，羧甲基交联右旋糖酐凝胶C-50，葡聚糖凝胶CM-C50，CM Sephadex C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量4-5mmol，g 100克 CAS: RT25克 100克 SP葡聚糖凝胶C-25，SP交联右旋糖酐凝胶C-25，葡聚糖凝胶SP-C25，SP Sephadex C-25 应用：MW&200 KD；载量：2.0-2.6mmol，g 25克
RT100克 25克 100克 SP葡聚糖凝胶C-50，SP交联右旋糖酐凝胶C-50，葡聚糖凝胶SP-C50，SP Sephade C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量：2.0-2.6mmol，g 100克
RT25克 100克 葡聚糖凝胶QAE-A25，QAE葡聚糖凝胶A-25，QAE交联右旋糖酐凝胶A-25，QAE Sephadex A-25 应用：MW&200 KD；载量2.6-3.4mmol，g 100克
RT25克 100克 葡聚糖凝胶QAE-A50，QAE葡聚糖凝胶A-50，QAE交联右旋糖酐凝胶A-50，QAE Sephadex A-50 应用：中等大小生物分子（30-200KD）；载量2.6-3.4mmol，g 100克
RT25克 100克 DEAE葡聚糖凝胶A-25，二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶A-25，葡聚糖凝胶DEAE-A25，DEAE Sephadex A-25 应用：MW&200 KD；载量3-4mmol，g 25克
RT100克 25克 100克 DEAE葡聚糖凝胶A-50，二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶A-50，葡聚糖凝胶DEAE-A50，DEAE Sephadex A-50 应用：中等大小生物分子（30-200KD）；载量3-4mmol，g 100克 RT25克 100克 硫酸葡聚糖，硫酸葡聚糖钠，葡聚糖硫酸酯钠，葡聚糖硫酸氢钠，糖酐酯，右旋糖酐硫酸酯钠，右旋糖苷钠盐，Dextran sulfate sodium salt 超纯，分子量50万，98% 10克
RT50克 250克 AR，分子量5万，98% 25克 100克 AR，分子量4万，98% 25克 100克 AR，分子量2万，98% 25克 100克 AR，分子量1万，98% 25克 100克 AR，分子量克 100克 AR，分子量克 100克&&常用生化试剂作用： &1、蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50&100&g/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。3、IPTG：异丙基-&-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是，IPTG不被 &-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-&-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。6、DMSO：二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40。8、NP-40：很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂，也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。 11、TEMED：四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下，加入TEMED可加速凝胶聚合。12、巯基乙醇：一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保持溶解状态，有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。13、甲叉双丙烯酰胺：N，N'-甲叉双丙烯酰胺，别名MBA，又叫亚甲基双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N，N'-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。14、过硫酸铵：过硫酸铵（APS）的作用主要是提供自由基，然后在促凝剂TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。15、B27：一种添加剂，用于神经肝细胞培养，被认为具有抑制胶质细胞生长的作用。16、DTT：二硫苏糖醇，常用还原剂，既有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。又是一种蛋白质变性剂，破坏二硫键，浓度不同，起到的作用也不同。17、弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。18、吐温 20：Tween-20 ，常用的非离子去垢剂。19、吐温 80：weenum 80 ，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶药物的增溶剂。20.、十二烷基肌氨酸钠&：脱细胞试剂，制备脱细胞组织工程支架材料。21.PVPP：PVPP对片剂具有崩解作用，能和各种不溶于水的药物共容，能稳定化各种悬浮剂，又具有形成络合物的能力以及吸附作用等，因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。22、PIPES：哌嗪-N，N'-二（2-乙磺酸）,实验室做缓冲剂用。全名是哌嗪-N,N-二（2-乙磺酸），pKa是6.80。不参与也不干扰生物化学反应，价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中，PIPES有时还被用来制备大肠杆菌感受态。23、CTAB：十六烷基三乙基溴化铵，一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。CTAB法是现在实验室最常用的一种提取核酸的手段。24、HEPES：羟乙基哌秦乙硫磺酸，一种弱酸缓冲剂，主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下，培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。25、MOPS：一种缓冲液，有抑制RNA酶的作用，一般和甲醛（用于变形RNA）用于RNA变性电泳。26、盐酸胍：盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂，这增加了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度，减少了疏水相互作用。27、PMSF：Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20&mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH&8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 28、溴酚蓝：pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。29、台盼兰：台盼蓝（Trypan Blue）或称台盼兰，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。30、二甲苯青FF：用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料， 易溶于水和醇，可与溴芬蓝按照一定比例配置loading buffer。31、吖啶橙：是一种荧光色素，与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂，能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。32、EDTA和EGTA：EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络合物。此外EDTA也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起到解毒作用。也是水的处理剂。EGTA--乙二醇双（2-氨基乙基）四乙酸在Mg2+存在下测定Ca2+时，可用EGTA直接滴定,滴定误差小于0.3% ，比用EDTA滴定提高了选择性。此外它与金属离子形成的配合物的稳定性普遍比相应的EDTA配合物差。33、TRICINE：N-[三（羟甲基）甲基]甘氨酸， 常见的电泳系统是Tris－甘氨酸系统；Tris－Tricine电泳则用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的电泳，能够获得较好的分离效果。可以用前者代替。34、PVP40：PVP40 中的CO - N = 有很强的结合酚类化合物的能力，与其形成稳定的复合物，常用于提取RNA时除去酚类。35、脱氧胆酸钠：离子型去垢剂，作用有：1、裂解细胞；2、溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；3、很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。36、6-BA：细胞培养中用到，细胞分裂素。37、碘代乙酰胺：也叫作碘乙酰胺，2-碘乙酰胺。用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。38、萘乙酸：NAA，为广谱性植物生长调节剂。可促进细胞分裂，诱导形成不定根，改变雌雄花比例，增加坐果率等39。番红O与藏红T：氧化还原指示剂、生物染色、酸碱指示剂，滴定分析亚硝酸盐。40。TTC：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（红四氮唑），多用于药物分析和琼脂糖添加剂，在计数琼脂中加入适量的TTC（0.5% TTC 1ML加到100ML琼脂中），细菌菌落长成红颜色，对去除食品本底颗粒物干扰非常有意义。
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百合病毒病发病因素与病毒检测方法的研究
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官方公共微信ELISA 操作中NaN3 有何用(包被液,叠氮化钠,缓冲液) - 免疫实验 - 生物秀
标题: ELISA 操作中NaN3 有何用(包被液,叠氮化钠,缓冲液)
摘要: [ELISA 操作中NaN3 有何用(包被液,叠氮化钠,缓冲液)] 从园子里精华收藏里下载的ELISA PROTOCOL 中，包被液和PBS 的配方中都含有一种叠氮化钠的物质，以前配缓冲液都没看到过需要这种物质，请问它的作用是什么，缺了它有关系吗 关键词:[包被液 叠氮化钠 缓冲液]……
从里精华收藏里下载的ELISA PROTOCOL 中，包被液和PBS 的配方中都含有一种叠氮化钠的物质，以前配缓冲液都没看到过需要这种物质，请问它的作用是什么，缺了它有关系吗
回复防腐剂回复另外，接触含NaN3的溶液时，一定注意防护，因为它的毒性很大。回复既然只是防腐作用，毒性又这么大，我决定还是不加这个物质了回复加防腐剂也有加防腐剂的好处。比如，通常我们用的封闭液里有胎牛血清、BSA、奶粉等，检测抗体中含有酶或生物素标记的抗体。这些物质都是很好的培养基，很容易长菌。加了叠氮钠就可以不长菌，长期使用了。抗体里如果有细菌生长，效价会很快降低。回复只要在一周内使用不用加，我总是在10内作完，我怕污染环境，以至没加，结果也很好，回复做ELISA最好别用NaN3,是HRP的抑制剂。一般用其它的防腐剂，如proclin 300回复是小部分抑制吧，影响大吗proclin 简单查了一下，价格不便宜啊要考虑生产成本的回复是小部分抑制吧，影响大吗proclin 简单查了一下，价格不便宜啊要考虑生产成本的回复proclin300不错啊,用量很少万分之几的浓度就可以了,NaN3毒性大,而且效果不见比proclin300好多少,主要是毒,生产还要双锁管理建立使用台帐等等~~~~回复楼上的同行这个东西都是进口的吧，哪里有卖我想先买个几ml试用回复做ELISA最好别用NaN3,是HRP的抑制剂 同意这个观点我们做国外盒,说明书中就强调注意不要受NaN3的污染,因为其能抑制HRP的酶活,使检测信号低回复一般我们选择硫柳汞回复柳硫汞和NaN3那个好，或者有什么区别么？前者有毒么回复柳硫汞和NaN3毒性都大，含汞好像对结果会有影响，很多盒中的试剂都标明有不含柳硫汞，用NaN3的还是多一些，只是加酶那一步注意不加NaN3就好了回复请问一下把柳硫汞换成proclin的话对结果有影响吗？回复做ELISA最好别用NaN3,是HRP的抑制剂 同意这个观点我们做国外试剂盒,说明书中就强调注意不要受NaN3的污染,因为其能抑制HRP的酶活,使检测信号低关键是在酶标中不要含有叠氮钠，其他个步骤中可以使用的，以为洗板可以洗去叠氮钠的，对结果没有影响回复如果有HRP的话最好选用柳硫汞，其它的酶可否则可选用NaN3回复嗯，用HRP的话我们一直用卡松，也还不错，但是当用量比较大，需要保存的时间很短的话，就根本不加防腐剂的，一般也没什么问题回复请楼主下载这篇文章看一下也许对你有帮助,我不在学校因此没有权限下载!希望能帮到你!叠氮钠对ELISA的影响 《南京医科大学学报》Acta Universitatis Medicinalis Nanjing 起止页码：40-44国际标准刊号：ISSN 国内统一刊号：CN 32-1442潘芝芳 徐桦摘　要:在抗原、和酶标记抗体中加入不同量的叠氮钠（ＮａＮ３），用不加ＮａＮ３的组作对照，观察ＮａＮ３在酶标记免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）中的影响，用斜率比值法计算相对抑制率，经两标本直线回归方程比较，用ｔ检验，结果证明ＮａＮ３对酶标记抗体的抑制作用最强，含０．０２％ＮａＮ３的酶标记抗体即丧失４７．９％的活性（Ｐ＜０．０１）；其次是对抗原的抑制作用，含０．１％ＮａＮ３时抗原活性被抑制１８．３％（０．０５关键词:叠氮钠 酶标记抗体 抗原 抗体分类号:　R446.61 R392.1回复叠氮钠是做防腐剂用的，这个一般国家不让进口因为有剧毒，所以只能买国产的。我做elisa一直有加这个。没感觉有什么影响。回复叠氮钠是实验室中常用的防腐剂，因此做ELISA是否使用，目前意见不一。由于叠氮钠抑制过氧化物酶的活性，所以在HRP标记抗体中不能加叠氮钠作为防腐剂，甚至有人认为对ELISA中的试剂一概禁用叠氮钠，也有文献报道即用NaN3(0.1~0.2%)作为抗原的防腐剂，又用NaN3(1%)作为最后终止反应。
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电话：021-[ELISA试验中所用物品及试剂详解]&在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文（2.2）已述，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶&[包被&抗原&抗体&结合物&载体&蛋白质&吸附&试剂]
在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文（2.2）已述，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的包含以下各组分：（1）已包被抗原或的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制（定量测定中）；（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。
3.1　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
3.1.1　固相载体　　固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。　　ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小。以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。　　良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。　　与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。　　为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。　　在ELISA中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。ELISA板孔的吸附面积约为200mm2，小珠均为1000mm2，将近ELISA板孔的5倍。吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为灵敏。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。　　小作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式ELISA的标本量一般为00-200ul，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加有助于试验敏感性的提高。小试管还可以当作，最后直接放入中比色。　　也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为ELISA固相载体的。其优点是表面积极大，反应在悬液中进行，其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体，反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。
3.1.2 　包被的方式　　将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法（见2.2.4），试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12小时），以增加其吸附性能。固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。也可用亲和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。　　脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般采用这种包被方式。
3.1.3 　包被用抗原 　　用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌(Escherichia coli)或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌(Escherichia coli)为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌(Escherichia coli)成份，用于ELISA，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌(Escherichia coli)感染而在血清中存在抗大肠杆菌(Escherichia coli)抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程(Genetic Engineering)制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV ELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
3.1.4 　包被用抗体　　包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。
3.1.5 　包被的条件　　包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐及pH7~8的-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。
3.1.6 封闭　　封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其最大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。　　封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的（见2.2.2）。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月。
3.2 酶联物（结合物）　　结合物即酶标记的抗体（或抗原），是ELISA中最关键的试剂。良好的结合物应该是既保有酶的催化活性，也保持了抗体（或抗原）的免疫活性。结合物中酶与抗体（或抗原）之间有恰当的分子比例，在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的（未结合的）酶或游离的抗体（或抗原）。此外，结合物尚要有良好的稳定性。
3.2.1酶　　用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存在相同的酶。另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等。　　在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性(alkaline phosohatase, AP)。在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物。HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质。主酶无色糖蛋白在275nm波长处有最高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0。　　HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点。值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力。高纯度的酶如保存不当，活力也会降低。酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验。　　国外很多ELISA试剂采用碱性（AP）作为标记酶。常用的AP有两个来源，分别从大肠杆菌(Escherichia coli)和小牛肠膜中提取。不同来源的酶生化特性特性略不相同，从大肠杆菌(Escherichia coli)中提取的AP分子量为80000，酶作用的最适合pH为8.0；用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000，最适pH为9.6。在ELISA中，AP系统的敏感度一般高于HRP系统，空白值也较低，但AP价格昂贵，制备结合物所得率也较HRP低。
3.2.2 抗原和抗体　　制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰。最好用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡。如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰。在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原必须是高纯度的。
3.2.3 结合物的制备　　酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法。　　（1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结。碱性磷酸一般用此法进行标记。交联方法一步法、两步法两种。在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反应后即得酶标记抗体。　　ELISA中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简便、有效（结合率达60%-70%）和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的比例不严格，结合物的大小也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响效果。诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再与抗体作用而形成酶标抗体。也可先将抗体与戊二醛作用，再与酶联结。两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低。　　（2）过碘酸盐氧化法：本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用此法。反应时，过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼，可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结，其最佳比例为：酶/抗体=1-2/1。此法简便有效，一般认为是HRP最可取的标记方法，但也有人认为所有试剂较为强烈，各批实验结果不易重演。 　　按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上，结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中最后的酶活性测定，因经过彻底洗涤，游离酶可被除去，并不影响最终的显色。但游离的抗体则不同，它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原，从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量。因此制备的酶结合物应予纯化，去除游离的酶和抗体后用于检测，效果更好。纯化的方法很多，分离大分子化合物的方法均可应用。硫酸铵盐析法最为简便，但效果并不理想，因为此法只能去除留在上清中的游离酶，但相当数量的游离抗体仍与酶结合物一起沉淀而不能分开。用离子交换层析或分子筛分离更为可取，高效液相层析法可将制备的结合物清晰地分成三个部分：游离酶、游离抗体和纯结合物而取得最佳的分离效果，但费用较贵。　　结合物制得后，在用作ELISA试剂前尚需确定其适当的工作浓度。使用过浓的结合物，既不经济，又可使本底增高；结合物的浓度过低，则又影响检测的敏感性。所以必须对结合物的浓度予以选择。最适的工作浓度就是指结合物稀释至这一浓度时，能维护一个低的本底，并获得测定的最佳灵敏度，达到最合适的测定条件和测定费用的节省。就酶标抗体本身而言，它的有效工作浓度是指与其相应抗原包被的载体作试验时，能得到阳性反应的最高稀释度。例如某一HRP：抗人IgG制剂标明的工作浓度为1:5000，表示该制剂经1:5000稀释后，在与人IgG包被的固相作ELISA试验时，将发生阳性反应。但在用于具体的ELISA检测中，酶标抗体的最适工作浓度受到固相载体的性质、包被抗原或抗体的纯度以及整个检测系统如标本、反应温度和时间等的影响，因此必须在实际测定条件下进行"滴配"选择能达到高敏感度的最大稀释度作为试剂盒中的工作浓度。
3.2.4　结合物的保存　　酶标抗体中的酶和抗体均为生物活性物质，保存不当，极易失活。高浓度的结合物较为稳定，冰冻干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但冻干过程中引起活力的减低，而且使用时需经复溶，颇为不便。结合物溶液中加入等体积的甘油可在或普通冰箱的冰格中较长时间保存。早期的中的结合物一般均按以上两种形式供应，配以稀释液（见3.2.5）临用时按标明的稀释度稀释成工作液。现在较先进的ELISA试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液，使用时不需再行稀释，在4-8℃保存期可达6个月。由于蛋白质浓度较低，结合物易失活，需加入蛋白保护剂。另外再加入(antibiotic)（例如庆大霉素）和防腐剂（HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠），以防止细菌生长。
3.2.5 　结合物的稀释液　　用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为避免结合物在反应中直接吸附在固相载体上，在稀释缓冲液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%牛血清白蛋白），通过竞争以抑制结合物的吸附。一般还加入具有抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂，如吐温20，0.05%的浓度较为适宜。在间接测定抗体时，血清标本需稀释后进行测定，也可应用这种稀释液。
3.3 　酶的底物
3.3.1 　HRP的底物　　HRP催化过氧化物的氧化反应，最具代表性的过氧化物为H2O2，其反应式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O　　上式中，DH2为供氧体，H2O2为受氢体。在ELISA中，DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。　　OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，在492nm处有最高吸收峰，灵敏度高，比色方便，是HRP结合物最常用的底物。OPD本身难溶于水，OPD·2HCL为水溶性。曾有报道OPD有致异变性，操作时应予注意。OPD见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，OPD和H2O2一般分成二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶剂，使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用水稀释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02% H2O2的应用液,只需加入OPD后即可作为底物应用液。　　TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在中定量，最适吸收波长为405nm。　　ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。　　另一种HRP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，经HRP作用后，产物显荧光，可用荧光光度计测量。用于ELISA的优点为可加宽定量测定的线性范围。　　HRP对氢受体的专一性很高，仅作用于H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。H2O2应用最多，但尿素过氧化物为固体，作为试剂较H2O2方便、稳定。试剂盒供应尿素过氧化物片剂，用水溶解后，在底物缓冲液中密闭、低温（2～8℃）可稳定1年。
3.3.2　AP的底物　　AP为磷酸，一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作为底物，可制成片剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一时间。AP也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。
3.4 　洗涤液　　在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。
3.5 　酶反应终止液　　常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。
3.6　阳性对照品和阴性对照品　　阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同时也作为判断结果的对照，因此对照品，特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致。以人血清为标本的测定，对照品最好也为人血清，因为正常人血清在各种ELISA模式中可产生不同程度的本底。由于大量正常人血甭较难得到，国外试剂盒中的对照品多以复钙人血浆(recalcified human plasma)为原料，即在血浆中加入钙离子，使其中的纤维蛋白质凝固，除去凝块后所得的液体，其组成与血清相似。阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。例如HBsAg检测的阴性对照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是阴性。阳性对照品多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，其中加入一定量的待检物质，此量最好在试剂说明书中标明。加入的量应与试剂的敏感度相称，在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可对标本中受检物质的量有一个粗略的估计。国外检测HBsAg的ELISA试剂盒检测敏感度约为0.5ng/ml，阳性对照品中含量约为10ng/ml。在对照品中一般加入(antibiotic)和防腐剂，以利保存。
3.7　参考标准品　　定量测定的ELISA试剂盒（例如甲胎蛋白质癌胚抗原测定等）应含有制作标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的4-5个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中。
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