黑河54号大豆品种综合农艺措施产量函数模型分析--《大豆科学》1985年04期
黑河54号大豆品种综合农艺措施产量函数模型分析
【摘要】：本试验应用二次回归正交旋转设计试验方法研究了黑河54号大豆主要栽培因子(密度、氮肥、磷肥和钾肥)与大豆产量的关系,建立了数学模型。通过微机对横型的解析,得出各因子对产量效应的主次关系;两因子搭配的产量效应以及等产量线图。通过边际产量分析了经济效益,并且藉助微机模拟试验(频数分析),求出指定产量水平下的最佳农艺措施,为总结大豆栽培经验与指导生产提供了新的思路。
【作者单位】：
【关键词】：
【正文快照】：
农作物产量的形成是多种因素综合作用的结果。过去,在研究栽培因子对农作物产量的影响时,多采用单因子试验方法。既使进行了一些复因子试验,也因种种条件的限制,实际上也很难描述所研究的因子与产量的关系。为了寻求黑河54号大豆在我市第四积温带最佳综合农艺措施方案,我们于1
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京公网安备75号混合菌固态发酵蚕蛹及渔用生物饲料的初步研究--《西北农林科技大学》2014年硕士论文
混合菌固态发酵蚕蛹及渔用生物饲料的初步研究
【摘要】：近年来，随着人们对肉蛋奶、水产品的需求量增加，畜禽、水产养殖业得到快速发展，作为养殖业主要饲料蛋白的鱼粉的需求量也随之增加。但随着近年来养殖业的规模化扩大和集约化程度提高，以及海洋渔业资源遭到严重破坏造成鱼粉产量逐年下降，鱼粉供不应求。为满足养殖业发展的需要，人们开始寻找可替代鱼粉的价格低廉的动植物蛋白源。而一些动植物蛋白则因为其本身具有抗营养因子等，导致动植物饲料蛋白源不能完全替代鱼粉。发酵是对饲料进行处理，提高动植物饲料利用率的一种有效方法。发酵饲料不仅可提高蛋白质等营养物质含量，也可降解饲料大分子物质成易吸收的小分子物质。肽是蛋白质降解为氨基酸的中间产物，可以在肠道内被动物直接吸收利用。我国蚕桑业发达，蚕蛹资源丰富，蚕蛹蛋白质含量高，氨基酸种类丰富、平衡性好，是一种潜在可替代鱼粉的昆虫蛋白源，在饲料中有很大的应用前景。豆粕、菜粕等植物蛋白作为饲料蛋白源已被广泛应用于饲料中，但其中的抗营养因子等限制了其应用量。本论文采用枯草芽孢杆菌或微生态制剂固态发酵的方法，以酸溶蛋白为主要考察指标，研究了枯草芽孢杆菌发酵蚕蛹的最佳碳源及其适宜添加量、微生态制剂发酵全价饲料的营养成分及品质变化、微生态制剂发酵蚕蛹、菜粕和麸皮的工艺参数和饲料品质。以期为蚕蛹的发酵处理和蚕蛹等饲料原料的应用提供理论依据和参考资料。
（1）试验从麸皮、次粉、魔芋粉和米糠中筛选枯草芽孢杆菌发酵蚕蛹的最佳碳源，并按5%、10%、15%和20%的添加量中研究碳源适宜添加量。结果显示，蚕蛹中添加魔芋粉发酵后的粗蛋白和酸溶蛋白含量分别为58.33%和13.96%，均显著高于其他碳源，次粉组和米糠组粗蛋白含量没有显著差异。麸皮组的粗蛋白含量最少，为47.75%，酸溶蛋白含量为12.96%显著低于魔芋粉组和米糠组，与次粉组没有显著差异。从不同魔芋粉添加量对蚕蛹的发酵效果来看，随着魔芋粉添加量的上升，发酵蚕蛹粗蛋白含量显著减低，5%魔芋粉组最高，20%魔芋粉组最低。5%和15%魔芋粉组酸溶蛋白含量显著低于15%魔芋粉添加量组，而15%和20%魔芋粉添加量组之间的酸溶蛋白含量没有显著差异。
（2）试验以微生态制剂发酵蚕蛹菜粕复合蛋白原料，研究微生态制剂接种量、料水比、发酵温度和发酵时间等发酵工艺参数和各个处理对饲料品质的影响，并进行SDS-PAGE凝胶电泳检测发酵饲料大分子蛋白质的降解情况。结果显示，使用微生态制剂、添加麸皮为碳源发酵蚕蛹和菜粕混合蛋白原料时，不同的发酵工艺对饲料品质的影响不同。在微生态制剂接种量15%、料水比为1:0.5、发酵温度30℃和发酵3天的条件下，发酵饲料粗蛋白可达47.01%、酸溶性蛋白含量为10.27%、蛋白质溶解度达46.91%、乳酸含量为6.84%、游离氨基酸含量为4.6%，且pH达到3.95，含有较高活菌数的饲料原料。饲料呈金黄色，质地干散，蚕蛹异味得到有效去除，且带有酸香味。
（3）试验在15%接种量、料水比1:0.6、室温发酵3天的条件下，研究微生态制剂发酵全价饲料对饲料营养成分及品质变化的影响。结果显示，发酵全价饲料的粗蛋白含量达到44.58%，显著高于未发酵全价饲料，较未发酵全价饲料粗蛋白提高了7.76%。发酵全价饲料酸溶性蛋白含量由未发酵的3.88提高到6.01，提高了54.9%，显著提高饲料中的酸溶性蛋白含量。另外，发酵饲料还增加了饲料中益生菌数量。同时，饲料pH由6.32降低到4.01，且带有酸香味，可以提高了饲料适口性，促进动物采食。
结论：枯草芽孢杆菌发酵蚕蛹的最佳碳源为魔芋粉，魔芋粉添加量为15%-20%时均可以达到最佳发酵效果；使用微生态制剂、添加麸皮为碳源发酵蚕蛹和菜粕混合蛋白原料时，在微生态制剂接种量15%、料水比为1:0.5、发酵温度30℃和发酵3天的条件下，可得到最佳的发酵效果，发酵饲料感官呈金黄色，质地干散，蚕蛹异味得到有效去除，且带有酸香味；微生态制剂发酵全价饲料可以显著提高饲料的营养物质含量，改善饲料品质。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：S963【目录】：
摘要4-6ABSTRACT6-11第一章 文献综述11-21 1.1 前言11-14
1.1.1 发酵技术的应用研究进展11-12
1.1.1.1 液态发酵11
1.1.1.2 固态发酵11-12
1.1.2 固态发酵饲料的研究进展12-14
1.1.2.1 发酵饼粕饲料12-13
1.1.2.2 发酵农副产品饲料13
1.1.2.3 发酵全价饲料13-14 1.2 蚕蛹14-16
1.2.1 蚕蛹的营养成分14-15
1.2.1.1 蚕蛹蛋白14-15
1.2.1.2 蚕蛹油15
1.2.1.3 其他物质15
1.2.2 蚕蛹饲料化的应用研究进展15-16
1.2.3 蚕蛹饲料化存在的问题16
1.2.4 发酵蚕蛹的应用研究16 1.3 发酵饲料16-19
1.3.1 发酵饲料概述16-17
1.3.2 发酵微生物17-18
1.3.2.1 枯草芽孢杆菌17
1.3.2.2 乳酸菌17
1.3.2.3 酵母菌17-18
1.3.2.4 混菌发酵18
1.3.3 微生态制剂的应用研究进展18-19
1.3.4 发酵饲料的应用研究进展19 1.4 选题的目的意义19-21第二章 枯草芽孢杆菌固态发酵蚕蛹碳源及添加量的研究21-25 2.1 前言21 2.2 材料与方法21-22
2.2.1 试验材料21
2.2.1.1 发酵菌种和底物21
2.2.1.2 主要仪器21
2.2.1.3 主要试剂21
2.2.2 试验方法21-22
2.2.2.1 枯草芽孢杆菌培养基配制21
2.2.2.2 二级菌种培养方法21
2.2.2.3 发酵工艺21-22
2.2.3 试验设计22
2.2.3.1 碳源选择22
2.2.3.2 碳源添加量选择22
2.2.4 指标测定方法22
2.2.5 数据统计22 2.3 结果22-23
2.3.1 不同碳源对蚕蛹发酵效果的影响22
2.3.2 不同碳源添加量对蚕蛹发酵效果的影响22-23 2.4 讨论23-24
2.4.1 不同碳源对蚕蛹发酵效果的影响23
2.4.2 魔芋粉添加量对蚕蛹发酵效果的影响23-24 2.5 小结24-25第三章 微生态制剂发酵蚕蛹复合原料的工艺参数及品质研究25-37 3.1 前言25 3.2 材料与方法25-28
3.2.1 试验材料25-26
3.2.1.1 发酵原料25
3.2.1.2 主要仪器25
3.2.1.3 主要试剂25
3.2.1.4 培养基25
3.2.1.5 SDS-PAGE 凝胶配方25-26
3.2.2 发酵方法26
3.2.2.1 微生态制剂发酵方法26
3.2.2.2 饲料发酵工艺26
3.2.3 试验方法26
3.2.3.1 不同微生态制剂接种量的研究26
3.2.3.2 不同料水比的研究26
3.2.3.3 不同发酵温度的研究26
3.2.3.4 不同发酵时间的研究26
3.2.4 检测指标与方法26-28
3.2.4.1 发酵饲料感官质量评定26-27
3.2.4.2 乳酸菌数测定27
3.2.4.3 pH 测定27
3.2.4.4 乳酸含量测定27
3.2.4.5 游离氨基酸测定27
3.2.4.6 粗蛋白和酸溶性蛋白质含量测定27
3.2.4.7 饲料蛋白溶解度测定27
3.2.4.8 SDS-PAGE 电泳方法27-28
3.2.5 数据统计方法28 3.3 结果28-33
3.3.1 不同微生态制剂接种量对蚕蛹复合原料发酵效果的影响28
3.3.2 不同料水比对蚕蛹复合原料发酵效果的影响28-29
3.3.3 不同发酵温度对蚕蛹复合原料发酵效果和品质的影响29
3.3.4 不同发酵时间对蚕蛹复合原料发酵效果和品质的影响29-30
3.3.5 不同处理发酵蚕蛹复合原料蛋白分子降解情况30-32
3.3.5.1 不同微生态制剂对发酵蚕蛹复合原料蛋白分子的降解情况30
3.3.5.2 不同料水比对发酵蚕蛹复合原料蛋白分子的降解情况30-31
3.3.5.3 不同发酵温度对发酵蚕蛹复合原料蛋白分子的降解情况31
3.3.5.4 不同发酵时间对发酵蚕蛹复合原料蛋白分子的降解情况31-32
3.3.6 不同处理对发酵蚕蛹复合原料品质的影响32-33 3.4 讨论33-36
3.4.1 微生态制剂接种量对蚕蛹复合原料发酵效果的影响33-34
3.4.2 发酵底物含水量对发酵蚕蛹复合品质的影响34
3.4.3 发酵温度对蚕蛹复合原料发酵效果的影响34-35
3.4.4 发酵时间对蚕蛹复合原料发酵效果的影响35
3.4.5 不同处理对发酵蚕蛹复合原料蛋白质分子的降解情况35-36
3.4.6 不同发酵工艺对发酵蚕蛹复合原料品质的影响36 3.5 小结36-37第四章 微生态制剂固态发酵全价饲料的品质研究37-39 4.1 前言37 4.2 材料与方法37
4.2.1 试验原料37
4.2.2 所需仪器37
4.2.3 所需试剂37
4.2.4 发酵方法37
4.2.4.1 微生态制剂发酵方法37
4.2.4.2 饲料发酵方法37
4.2.5 指标检测37 4.3 结果37-38 4.4 讨论38 4.5 小结38-39第五章 综合讨论和结论39-41 5.1 综合讨论39-40 5.2 结论40-41参考文献41-48致谢48-49作者简介49
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微生物制备γ-聚谷氨酸的研究
【摘要】：聚-γ-谷氨酸是一种由D-谷氨酸和L-谷氨酸为单体以γ-羧基与α-氨基以肽键的形式缩合而成的一种聚阴离子类多肽分子,在医药、食品和农业等领域具有广泛的应用前景。
本论文采用枯草芽孢杆菌发酵制备聚γ-谷氨酸。从出发菌株筛选鉴定高产菌株,通过对摇瓶培养条件和发酵罐培养条件优化提高了聚γ-谷氨酸的产量,建立了发酵动力学模型,并开发了产物分离纯化的整套工艺。在此基础上,研究了枯草芽孢杆菌与谷氨酸棒杆菌混合培养的新工艺和采用味精生产的中间产物作为谷氨酸前体等方法降低聚γ-谷氨酸生产成本。同时,通过PCR的方法,将克隆得到的pgsBCA基因在大肠杆菌JM109中进行表达,最终得到了具有聚γ-谷氨酸生产能力的重组菌E.coli JM109/pTrc99a- pgsBCA。
从自然界筛选得到了一株聚γ-谷氨酸高产菌株,通过16s rDNA测序后BLAST以及生理生化性质,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis ZJU-7,保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心,保藏编号为:CGMCC No.1250。
进行了Bacillus subtilis ZJU-7的培养条件优化及放大工作。通过对摇瓶的培养条件优化,得到了如下优化的培养基成分为:蔗糖59.80g/L,蛋白胨53.54g/L,,L-谷氨酸81.05g/L,NaCl 10g/L,MgSO_4·7H_2O 1.0g/L,CaCl_2 1.0g/L;优化的培养条件为:培养温度,37℃,摇床转速,200rpm。在上述条件下,经过24～32小时发酵,最终聚γ-谷氨酸的产量为58.3g/L。在此基础上,将培养体系由摇瓶放大到5升发酵罐,聚γ-谷氨酸产量达到了51.7g/L。
开展了将谷氨酸棒杆菌发酵生产谷氨酸和枯草芽孢杆菌聚合生产聚γ-谷氨酸耦联发酵的研究。对影响混合培养的因素如种龄、混合比例、温度、溶氧等进行了优化,在优化的培养条件下,不需添加L-谷氨酸,聚γ-谷氨酸的产量达到了32.8g/L。
采用三种味精生产的中间产物作为谷氨酸替代前体,研究了蔗糖、胰蛋白胨和谷氨酸含量对聚γ-谷氨酸产量的影响。在优化后培养基中进行发酵生产,最终聚γ-谷氨酸酸产量为52g/L。
从Bacillus subtilis ZJU-7中克隆得到了pgsBCA基因,构建了表达载体pTrc99a-pgsBCA,并在大肠杆菌JM109进行表达,最终得到了具有聚γ-谷氨酸生产能力的重组菌E.coli JM109/pTrc99a-pgsBCA。
【关键词】：
【学位授予单位】：浙江大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2006【分类号】：TQ922.1【目录】：
Abstract13-15
第一章 绪论15-41
1.1 均聚氨基酸简介15-16
1.2 γ-PGA的理化性质和应用研究16-21
1.2.1 γ-PGA的理化性质16-17
1.2.2 γ-PGA的应用17-21
1.2.2.1 γ-PGA在医药领域的应用17-19
1.2.2.2 γ-PGA在工业领域的应用19-21
1.3 γ-PGA合成方法21-25
1.3.1 化学合成法21-22
1.3.2 提取法制备γ-PGA22
1.3.3 酶转化法22-23
1.3.4 微生物发酵法23-25
1.4 微生物中γ-PGA的生物合成途径及其代谢调控25-29
1.4.1 γ-PGA的生物合成途径25-26
1.4.2 γ-PGA合成酶的基因研究26-29
1.5 微生物发酵法生产γ-PGA的影响因素的研究29-32
1.5.1 外源性L-谷氨酸对γ-PGA生产的影响29-30
1.5.2 碳源对γ-PGA发酵产率的影响30
1.5.3 氮源对γ-PGA生产的影响30-31
1.5.4 金属离子对γ-PGA发酵生产的影响31
1.5.5 pH和供氧对γ-PGA发酵生产的影响31-32
1.5.6 γ-PGA分子量的控制32
1.6 发酵液中γ-PGA的分离纯化32-33
1.7 本论文的主要研究内容33-41
第二章 实验材料与方法41-53
2.1 菌种与质粒41
2.2 仪器与试剂41-42
2.2.1 主要仪器41
2.2.2 主要试剂及标准品41-42
2.2.3 工具酶及试剂盒42
2.3 培养基和培养条件42-43
2.3.1 主要培养基42
2.3.2 培养方法42-43
2.4 分析测定方法43-53
2.4.1 pH测定43
2.4.2 含菌量测定43
2.4.3 γ-PGA的提取43
2.4.4 γ-PGA的盐酸水解43
2.4.5 γ-PGA的加热水解43-44
2.4.6 γ-PGA的分子量测定方法44
2.4.7 γ-PGA测定方法44-48
2.4.7.1 酸水解法44-45
2.4.7.2 直接测定法45-46
2.4.7.3 HPCE测定法46-48
2.4.8 谷氨酸含量测定方法48-49
2.4.9 还原糖浓度测定49
2.4.10 蔗糖含量测定方法49-50
2.4.11 分子克隆相关实验50
2.4.12 Bacillus subtilis ZJU-7基因组的提取50
2.4.13 大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取50-51
2.4.14 SDS-PAGE电泳51-53
第三章 γ-PGA生产菌株的筛选和鉴定53-63
3.1 前言53
3.2 材料与方法53-56
3.2.1 分离菌种材料53
3.2.2 培养基53-54
3.2.3 培养条件54
3.2.3.1 γ-PGA生产菌株筛选54
3.2.3.1 菌种活化54
3.2.3.2 芽孢制备54
3.2.3.4 种子培养54
3.2.3.5 摇瓶培养54
3.2.4 产物鉴定54-55
3.2.4.1 产物分离纯化54-55
3.2.4.2 γ-PGA酸水解鉴定55
3.2.4.2 γ-PGA分子量的测定55
3.2.5 γ-PGA生产菌株的鉴定55
3.2.5.1 16s rDNA序列测定55
3.2.5.1.1 细菌总DNA提取55
3.2.5.1.2 16s rDNA的PCR扩增55
3.2.5.1.3 16s rDNA经PCR扩增产物的连接与转化55
3.2.5.1.4 质粒转化子的提取和鉴定55
3.2.5.2 其他生理生化性质测定55
3.2.6 γ-PGA生产菌株的初步培养55-56
3.3 实验结果与讨论56-61
3.3.1 γ-PGA生产菌株的筛选56
3.3.2 产物鉴定56-58
3.3.2.1 产物酸水解鉴定56-57
3.3.2.2 样品分子量测定57-58
3.3.2.3 样品其他性质测定58
3.3.3 γ-PGA生产菌株的分类学鉴定58-61
3.3.3.1 γ-PGA生产菌株16s rDNA测定58-60
3.3.3.2 Bacillus subtillis ZJU-7其他生理生化特征60-61
3.4 小结61-63
第四章 Bacillus subtilis ZJU-7培养条件优化63-85
4.1 前言63
4.2 材料与方法63-65
4.2.1 菌种63
4.2.2 培养基和培养条件63-64
4.2.2.1 培养基63
4.2.2.2 培养方法63-64
4.2.3 Bacillus subtillis ZJU-7生长曲线测定64
4.2.4 培养条件优化64-65
4.2.4.1 单因素培养条件优化64
4.2.4.2 响应面培养条件优化(RSM)64-65
4.2.4.2.1 部分析因设计(Fractional factorial design，FFD)64-65
4.2.4.2.2 中心组合实验65
4.2.5 分析测定方法65
4.2.5.1 pH测定65
4.2.5.2 菌体OD_(600)及生物量测定65
4.2.5.3 γ-PGA的测定65
4.3 实验结果与讨论65-81
4.3.1 Bacillus subtillis ZJU-7生长曲线65-66
4.3.2 单因素培养条件优化66-73
4.3.2.1 碳源种类对γ-PGA产量的影响66-67
4.3.2.2 碳源浓度对γ-PGA产量的影响67-68
4.3.2.3 氮源种类对γ-PGA产量的影响68
4.3.2.4 氮源浓度对γ-PGA产量的影响68-69
4.3.2.5 谷氨酸前体对γ-PGA产量的影响69-70
4.3.2.6 NaCl对γ-PGA产量的影响70-71
4.3.2.7 温度对γ-PGA产量的影响71-72
4.3.2.8 摇床转速对γ-PGA产量的影响72
4.3.2.9 摇瓶装液量对γ-PGA产量的影响72-73
4.3.3 响应面法(RSM)优化γ-PGA培养条件73-81
4.3.3.1 部分析因实验设计75-77
4.3.3.2 最陡爬坡实验77
4.3.3.3 中心组合实验(CCD)77-80
4.3.3.4 γ-PGA发酵培养过程80-81
4.4 小结81-85
第五章 Bacillus subtilis ZJU-7分批发酵研究85-101
5.1 前言85
5.2 材料与方法85-86
5.2.1 菌株85
5.2.2 培养基85-86
5.2.3 培养方法86
5.2.4 测定方法86
5.3 结果与讨论86-98
5.3.1 pH对发酵过程的影响86-89
5.3.1.1 未控制pH的发酵过程86-87
5.3.1.2 控制pH对发酵过程的影响87-89
5.3.2 温度对发酵过程的影响89-90
5.3.3 搅拌转速对发酵过程的影响90-91
5.3.4 通气量对发酵过程的影响91-92
5.3.4 Bacillus subtilis ZJU-7分批发酵过程92-93
5.3.5 Bacillus subtilis ZJU-7发酵生产γ-PGA动力学模型93-98
5.3.5.1 菌体生长积累与γ-PGA的生长特性93
5.3.5.2 动力学模型的建立93-96
5.3.5.2.1 菌体生长动力学模型94
5.3.5.2.2 产物生成动力学模型94-95
5.3.5.2.3 底物消耗动力学模型95-96
5.3.5.3 动力学参数求解96
5.3.5.3 模型拟合分析96-98
5.4 小结98-101
第六章 利用不同来源谷氨酸生产γ-聚谷氨酸101-119
6.1 前言101
6.2 实验材料与方法101-104
6.2.1 菌株101
6.2.2 仪器与试剂101-102
6.2.3 培养基102
6.2.4 Corynebacterium glutamicum S9114培养过程102
6.2.5 Bacillus subtilis ZJU-7发酵过程102-103
6.2.6 混合培养过程103
6.2.7 分析与测定103-104
6.2.7.1 发酵液中谷氨酸浓度的测定103
6.2.7.2 γ-PGA浓度的测定103
6.2.7.3 菌体生物量的测定103-104
6.2.7.4 谷氨酸棒杆菌发酵液中葡萄糖测定104
6.2.7.5 Bacillus subtilis ZJU-7发酵液中蔗糖含量测定104
6.3 结果与讨论104-116
6.3.1 Corynebacterium glutamicum S9114发酵过程104-105
6.3.2 Bacillus subtilis ZJU-7发酵过程105
6.3.3 混合培养条件优化105-112
6.3.3.1 种龄对混合培养体系的影响105-108
6.3.3.1.1 Corynebacterium glutamicum S9114种龄的影响106-107
6.3.3.1.2 Bacillus subtilis ZJU-7种龄的影响107-108
6.3.3.2 Bacillus subtilis ZJU-7加入量对混合培养体系的影响108
6.3.3.3 培养基对混合培养体系的影响108-109
6.3.3.4 温度对混合培养体系的影响109-110
6.3.3.5 溶氧对混合培养体系的影响110-111
6.3.3.6 混合培养过程111-112
6.3.4 利用谷氨酸发酵生产中间产物生产γ-PGA112-116
6.3.4.1 谷氨酸棒杆菌发酵液中残糖的测定112-113
6.3.4.2 胰蛋白胨对不同谷氨酸替代前体生产γ-PGA的影响113-114
6.3.4.3 蔗糖对不同谷氨酸替代物生产γ-PGA的影响114-115
6.3.4.4 谷氨酸含量对于味精替代品生产γ-PGA的影响115-116
6.3.4.5 以谷氨酸发酵液为谷氨酸替代前体发酵过程116
6.4 小结116-119
第七章 pgsBCA基因在大肠杆菌中的表达119-134
7.1 前言119-120
7.2 材料与方法120-123
7.2.1 菌株、质粒及引物120
7.2.2 培养基120
7.2.3 工具酶和试剂盒120
7.2.4 实验方法120-123
7.3 结果与讨论123-130
7.3.1 PCR扩增及测序结果123-127
7.3.1.1 PCR扩增结果123-126
7.3.1.2 pgsB、pgsC、pgsA连接测序结果126-127
7.3.2 pgsB、pgsC、pgsA连接与转化127-128
7.3.3 重组质粒在大肠杆菌JM109中的表达128-130
7.3.3.1 pTrc99a-pgsBCA的转化129
7.3.3.2 pgsBCA在E.coli JM109／pTrc99a-pgsBCA中的表达129-130
7.3.3.3 表达产物鉴定130
7.4 小结130-134
结论与展望134-138
主要结论134-136
展望136-138
致谢138-140
攻读博士学位期间科研成果140-141
欢迎：、、)
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