荧光定量_百度百科
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荧光定量通过或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
荧光定量荧光定量简介
荧光定量通过或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
荧光定量注意事项
1.必须确定扩增的特异性 ；
2.只有相同目标的才能相减（扩增效率有可能不同）；
3.的某次方只是理论值，实际扩增效率低于；
4.避免试用用Syber Green。
荧光定量背景知识
是通过或标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，反应过程。随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行、绝对定量和。
荧光定量服务项目
包括RNA提取、和扩增，采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式，一般采用2法进行计算。每个样本重复三次，一般情况我公司提供内参基因引物。
2．绝对定量
需要制备并建立，然后检测目的样本中的基因，比对标准曲线得到基因准确。
荧光定量送样要求
细胞（≥10 ）、组织（≥300mg）、血液（≥1ml）、叶片（≥100mg）等样品材料，基因组DNA或总RNA（体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl）。
荧光定量提供结果
引物和探针及序列，胶图，原始数据（包括扩增曲线和曲线）、结果及实验报告。
企业信用信息SYBR Green I 检测模式和水解探针模式（Taqman）哪种方法更好些呢(探针,水解,荧光定量,基因) - PCR实验 - 生物秀
标题: SYBR Green I 检测模式和水解探针模式（Taqman）哪种方法更好些呢(探针,水解,荧光定量,基因)
摘要: [SYBR Green I 检测模式和水解探针模式（Taqman）哪种方法更好些呢(探针,水解,荧光定量,基因)] 本人因为课题问题刚刚接触到定量PCR的有关内容，想请教各位专家SYBR Green I 检测模式和水解探针模式（Taqman）哪种方法更好些呢，比较常用的是哪种方法呢？价格方面差别大吗？我要检测的是基因定量，仪器是实时荧光定量PCR仪（美国 Bio-Rad icycler Real Time PCR Detection system）。 非常感谢！ 关键词:[探针 水解 基因 荧光定量]……
本人因为课题问题刚刚接触到定量PCR的有关内容，想请教各位专家SYBR Green I 检测模式和水解探针模式（Taqman）哪种方法更好些呢，比较常用的是哪种方法呢？价格方面差别大吗？我要检测的是基因定量，是实时荧光定量（美国 Bio-Rad icycler Real Time PCR Detection system）。 非常感谢！
回复各有优缺点,主要取决于你的科研费用及目的.1.sybr green 是结合在所有双链的产物上的,，而TaqMan 探针是特异性的针对目的片段设计的带有荧光标记的互补单链序列。2.所以TaqMan 探针在特异性和准确性方面要比sybr green 好,而且sybr green不能同时测多种样品的，且sybr green的体系优化比较麻烦,也不能解决二聚体的问题.TaqMan可以同时检测几种,不存在二聚体影响结果的问题.3.由于sybr green 与所有的双链相结合，不必针对不同模板而特别设计，因此设计的程序通用性好，且价格相对较低。此外，由于一个PCR产物可以与多分子的染料结合，因此SYBR Green I的灵敏度很高。回复非常感谢您！！
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中国生物器材网 电话：021-荧光定量—标准曲线的相关问题我是用的SYBR green染料法做的绝对定量,标准品是按照十倍稀释的.从原浓度到10的负10倍浓度,但是测出来的值,所有的浓度值都是相近的,我是跑的目的基因做的质粒，同一个基因在不同浓度下得到的CT值基本就是不变的。愁死我了。
首先,看看空白对照是不是也有Ct值,这种情况可能是样品污染,或者是你用的各种试剂有污染.如果你们实验室做这个基因做的很多的话,污染的可能性是很大的.最好换个地方做,而且是要在超净工作台上.避免所有的可污染的状况.如果不是污染的话,那么样品的浓度也许可能还是高,造成最后负10倍稀释的样品DNA的浓度还是较高,所以看不出Ct值的变化.选择合适的稀释梯度也是比较重要的.
试剂应该没有污染 刚开封第一次用 会不会是96孔板污染？ 96孔板我只用紫外照了30分钟左右 这种板子是roche light cycler 480 2型专用的那种 好像蒸汽灭菌会变形化掉啊
如果是浓度问题 我在往下稀释几个浓度试试？好像每太有稀释到10的负15倍或者更低的啊
有没有污染，要看做的空白对照有没有扩增产物了。你设置的空白对照通常Ct值高过30,或者直接检测不到Ct值就算没有污染了。
浓度梯度可以跨度大一点先摸摸情况，比如每个梯度100倍稀释，或者每个梯度1000倍稀释。然后根据情况再确定跨度小的稀释梯度。
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你是怎么稀释的，是取上一级的1加9的水么，10+90这样取得 我看有些文献是一直从原浓度取 然后加9、99、999这样 可是我需要的浓度范围比较大 不合适啊我是这么加的：以10的1-7稀释，体积100ul为例；
1. 取7个管子，分别加水90ul，
2. 取原浓度10ul加到第一管中，混匀，标号10-1（上标，是不是这个倍数，有点晕）
3. 取10-1中10ul加到第二管中，混匀，标号10-...
我是这么加的：以10的1-7稀释，体积100ul为例；
1. 取7个管子，分别加水90ul，
2. 取原浓度10ul加到第一管中，混匀，标号10-1（上标，是不是这个倍数，有点晕）
3. 取10-1中10ul加到第二管中，混匀，标号10-2，
4. 依次加样，
5. 最后得到10-1到10-7,10倍梯度标准品，
我最后得到的标准品做起来感觉还是有梯度的，
我们的加法一样么，
扫描下载二维码荧光定量PCR完全攻略&(转)
PCRPCRPCRPCRPCR
nPCR100%PCRDNA2Y= X(1+E)n E E =
1105n30E n&30EY
PCRPCRPCRPCRPCR
Tn=Tn-11+En [0
EnTnnPCRTn-1n-1PCRT0PCR(K1010)CPcrossing point,K= T01+ECP
T0+CP*lg(1+E)
1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
PCREKCPlg T0y=kx+b,- 1/lg(1+E)lgk/lg(1+E)PCRRT-PCR
PCR(Slope)- 1/lg(1+E)E=10-1/Slope-1 ,Slope=-3.337,E=101/3337-1=0.99,(1+E)EE=10-1/SlopeE122PCR10PCRN2=N0En2, N3=(10*N0)En3,N2=N3En2-n3=10,ngE=1, E=101/nE=2n=3.32; E=1.8n=3.91.
SYBR Green I
SYBR Green
Green IPCRDNASYBR Green I 497nm520nmPCR94557240
SYBR Green
I SYBR Green
SYBR Green ISYBR Green IDNA
PCRPCR-ELISAPCR1PCRPCR2cDNAPCRmimic3PCRPCR96PCR96PCR
2PCRPCR301010/452396
APCRPCRPCRPCR
BPCRPCRCtPCR
2CtCtPCRTexas
PCRPCRPCRPCRPCR
1)genebankwww.ncbi.nlm.nih.gov
2)Primer5.0Oligo6.0beacon designs3.0www.
D2025bp,Tm5565GC40%60%100-250bp
B2030bpTm6570510GC40%70%
3blast(www.ncbi.nlm.nih/blast)
4FAMTexas redLC-Red640LC-Red705PCRTaqmanbeacon
6120bpPCRPCRTEDNA6.0102345107/ml106/ml105/ml104/ml103/ml
725pmol/ul2025pmol/ulul
(OD33)40000
1PCR buffer0.3-0.5pmol/ul0.10.3pmol/ul2.5-4.0mMMg2+1-2UTaq0.20.4mMdNTPs0.2-1UUNG0.3-0.6mMdUTP2-5ul2050ul
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CPCR10%75%10%70%
PCRdUTPUNG4
Q-PCRPCRPCRreal-time 190Taq DNA5PCR2real-time Q-PCR
PCRDNAPCRPCRPCRPCRreal-time Q-PCRPCRPCRPCRPCRreal-time Q-PCRthresholdPCR15baseline31510CtCtCtCtCt
DNASYBR green 1Real-time Q-PCRPCRSYBR green 1SYBR green 1DNAdsDNAdsDNAdsDNAmelting curve
PCRreal-time Q-PCRTaqManPCR53FRET5PCRTaq5-353DNAPCR
molecular beaconDNAPCRPCRsunrise primesscorpion primeshybridization probe3donor5acceptorPCRFRETmelting curve
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CTPCRCTCT=12
DNARNA260nmDNARNA
Q-PCRmRNADNASNPsreal-time Q-PCR
MRDReal-time Q-PCRAMLt(821) (q 22q22)AML-18MTG8AML-1real-time Q-PCRMRDCMLBCR-ABLALLTEL-AML1FLt(14;18)(q32;q21)bcl-2real-time Q-PCRReal-time Q-PCR
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ATPATP-binding cassette
superfamilyMDR-1P-P-gpMRPLRPBCRPTopoGSH-S-GSTCPKCdeoxycytidine kinasebcl-2p53c-mycMDRreal-timePCRRT-PCRmRNA
Q-PCRPCRreal-time Q-PCRmRNARNARTPCRReal-time Q-PCR12real-time Q-PCRmultiplex3real-time Q-PCR
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