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求助拟南芥SALK突变体纯合体鉴定中的问题
我在鉴定SALK突变体纯合体过程中，发现以野生型的DNA为模板用LBb1+RP引物进行PCR的时候也能扩出同T-DNA插入突变体中相大小的条带，请教哪位高手给分析一下，为什么会这样，怎么解决此类问题？
& & 附件中的图为其中一次得结果，我分别用了三次提的Col DNA，结果都是一样的，请教高手解答，谢谢！
谢谢你的回复，我再做PCR的时候做一个对照吧，看看是不是引物污染了，再次感谢！
我这个确实是目的条带的大小，它的差入位置比较靠后，我查了它RP+LBb1扩出条带的大小，谢啦！
从marker的位置看是位于250到500bp的条带之间，我的marker是takara的250bp marker，最亮的一条带是1000，下面依次是750、500、250、100.可能由于我截图的原因，250bp的条带看的不是很清楚。
你可以上这个网站http://signal.salk.edu/tdnaprimers.2.html，在搜索框中输入你的T-DNA号，如salk_012345，搜索以后直接会给出LP 和RP的引物，这个引物网站设计好的，你检测T-DNA条带不管插入方向如何，只需要用RP+LBb1扩就可以了，一般网站设计的基因条带大小都为1000左右，T-DNA条带肯定小于基因条带。网站的LB不需要反向互补，可以直接可以用。
你可以上这个网站http://signal.salk.edu/tdnaprimers.2.html，在搜索框中输入你的T-DNA号，如salk_012345，搜索以后直接会给出LP 和RP的引物，这个引物网站设计好的，你检测T-DNA条带不管插入方向如何，只需要用RP+LBb1扩就可以了，一般网站设计的基因条带大小都为1000左右，T-DNA条带肯定小于基因条带。网站的LB不需要反向互补，可以直接可以用。
楼主，我这有个突变体，上网站查引物时查不到，要自己设计怎么办:cry:
GK-158H04-013215我的拟南芥Polymorphism name，自己设计的引物好像不对，片段扩不出来，连野生型都没条带。
请问LBb1的Tm值怎么查？
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拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带
拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带，能够排除是野生型，但LB+RP跑不出条带，不敢确定是突变体，求高手指教，谢谢
RP确定没问题，用野生型的跑过了，通用引物三种都试了，都没有结果，不知道是哪的问题？
退火温度降了两度试了也不行
插入的位置和想象的不一样，插入了多个，是什么意思，您能不能详细解释下，谢谢了
插入的位置和想象的不一样，插入了多 个，是什么意思，您能不能详细解释下， 谢谢了
你的突变体用的都是salk的么？另外RP BP都是你自行设计的还是直接从网站copy的，有没有tm的相关信息？
是cs号的，引物直接从网上copy的
你好，那个CS号的，你是从哪个网站上设计的引物呀？能否告诉我一下
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扫描下载送金币拟南芥t-dna插入突变体库的种子要鉴定吗_百度知道工具类服务
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拟南芥SYTA基因T-DNA插入纯合突变体的鉴定及表型分析
通过PCR和RT-PCR在DNA和RNA水平上筛选鉴定SYTA基因T-DAN插入失活纯合突变体，当对野生型与突变体种子进行45℃/4h与50℃/1h 热激后，野生型种子萌发率分别达到100%与86%，而突变体种子萌发率分别只有83%与27%。当对野生型与突变体植株幼苗进行热激处理后，其存活率与叶片萎黄率相差不大，说明SYTA基因能显著提高拟南芥种子的耐热性，但拟南芥幼苗的耐热性不受SYTA基因的影响。
Abstract：
One homozygous T-DNA mutant was identified at DNA and RNA levels by PCR and RT-PCR.After wild-type and mutant seeds were subjected to a heat shock treatment of 45℃/4h and 50℃/1h,wild-type seed germination rate reached 100% and 86%,mutant seed germination rates were only 83% and 27%.When wild-type and mutant seedlings were subjected to a heat shock treatment,their survival rate and leaf chlorosis rate were almost the same.The phenotype of the mutant and wild type after subj ected to heat shock shows that SYTA gene remarkably enhance the Arabidopsis seeds’ther-motolerance.But syta mutant seedlings don’t exhibit reduced basal thermotolerance and acquired ther-motolerance.
XIELin-Feng
作者单位：
四川大学生命科学学院与生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都,610064
年，卷(期)：
Keywords：
机标分类号：
在线出版日期：
基金项目：
国家自然科学基金，国家转基因重大专项
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