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【求助】western blot 结果怎么用image J 的统计分析
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这个帖子发布于3年零216天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我现在做了三组平行的WB，结果需要统计分析一下，另外还需要做error bar 分析，我已经用image J把各个蛋白条带的灰度值标记出来，导入到了excel中，需要进行分析。首先，我想知道，是不是需要将目的蛋白与内参的灰度值相除？其次，怎么进行方差统计？谢谢，求高手指教！
不知道邀请谁？试试他们
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我也在发愁中
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楼主知道怎么解决了吗？
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fangfang2016 楼主知道怎么解决了吗？ 师兄解决没- -
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tangpan2012 师兄解决没- -把内参的第一个定为1，然后目的基因都除以各自的内参就行了
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【求助】western blot结果用统计吗？
【求助】western blot结果用统计吗？
来源：丁香园论坛
点击次数：1940
yunchenxia
我正在写硕士毕业论文，做了很多关于western检测蛋白质表达的实验，我想问一下这些试验结果是直接将图片贴到论文上还是要用软件对电泳条带进行光密度(OD)分析，然后进行统计，我看到国外的文献直接是贴图片的，国内有一些进行了统计，所以想问一下要不要统计？ 最好解释一下，谢谢。
请问你如果不做统计的话怎么知道组间是有差异的？而且这些差异是否具有统计学意义？而我看的外文文献基本都有做OD，作出柱状图的。
国外有的文献用灰度值（OD）做统计，也有的文献不用灰度值的
yunchenxia
我看到有用OD值做出柱状图的，他们是不是就是为了让大家清晰的看到各组间蛋白的变化趋势啊，因为跑蛋白是每组就一个样本，即使我重复三遍，也不能像其他实验一样统计出均数和标准差啊，所以不知道他们分析灰度的真正的意义？
有统计的是做的生物学重复，当然可以做统计，但如果是技术重复，当然不能有统计的标准差在上面
如果做统计的话，确保你的wb都是不同处理后的结果，不应是同一批蛋白，更不是同一个wb图
goldenflowerwei
请教，我只做出了一次满意的条带，没有重复实验。空白对照组，阴性对照组，实验组，每组测三个蛋白，要比较同一个蛋白在三个组表达有无差异，这能做统计吗？没有重复实验做t检验也不成吧！
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摘要 : 免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
主要实验步骤如下：
实验对象为组织样品，取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)，匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。
实验对象为，每份样品取1&106~1&107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。
2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)：将准备好的样品液和预染分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到PVDF膜，按蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4&C转移过夜。
5. western blot膜的封闭和抗体孵育
膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗 体可同时检测GAPDH含量。
6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显 影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/Actin的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
作者：青岚 点击：次
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