目前临床上癌症治疗的方法,一般是手术切除肿瘤,为防止体内残留癌细胞,在手术后进行化疗,某生物兴趣小组的同学从资料上获知:二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测:二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖,能作为一种癌症的化疗药物,并就此问题设计实验进行了探究。实验材料:肝长有肿瘤的小鼠,二氯二乙胺溶液,蒸馏水,生理盐水,含有全部营养物质的细胞培养液,显微镜,血球计数板,试管,吸管等。(1)其中某位同学实验操作如下:(请将实验内容补充完整)①取洁净的培养皿一个,加入适量的培养液,从小鼠肝部切取肿瘤组织,剪碎,并用____处理,使其分散开来,置于培养皿中培养。②取洁净的试管5支,加入等量的培养液,编号1、2、3、4、5,并在1～4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液,5号试管中加入____。③从培养皿中吸取等量的培养液置于1～5号试管中,振荡后,在冰箱中培养一段时间。④从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板内,在显微镜下计数,记录数据。(2)请你纠正上面这位同学操作上的错误①____;②____。(3)另一位同学按照正确的方法进行实验,得到的结果如下表:实验组别12345二氯二乙胺溶液浓度(mg/mL)0.10.20.30.40细胞数目(个/mL)60在该实验中,遵循了实验设计的____原则和____原则。(4)根据上表中实验结果,你能得出的结论是____。
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目前临床上癌症治疗的方法,一般是手术切除肿瘤,为防止体内残留癌细胞,在手术后进行化疗,某生物兴趣小组的同学从资料上获知:二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测:二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖,能作为一种癌症的化疗药物,并就此问题设计实验进行了探究。实验材料:肝长有肿瘤的小鼠,二氯二乙胺溶液,蒸馏水,生理盐水,含有全部营养物质的细胞培养液,显微镜,血球计数板,试管,吸管等。(1)其中某位同学实验操作如下:(请将实验内容补充完整)①取洁净的培养皿一个,加入适量的培养液,从小鼠肝部切取肿瘤组织,剪碎,并用&&&&处理,使其分散开来,置于培养皿中培养。②取洁净的试管5支,加入等量的培养液,编号1、2、3、4、5,并在1～4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液,5号试管中加入&&&&。③从培养皿中吸取等量的培养液置于1～5号试管中,振荡后,在冰箱中培养一段时间。④从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板内,在显微镜下计数,记录数据。(2)请你纠正上面这位同学操作上的错误①&&&&;②&&&&。(3)另一位同学按照正确的方法进行实验,得到的结果如下表:实验组别12345二氯二乙胺溶液浓度(mg/mL)0.10.20.30.40细胞数目(个/mL)32027518696560在该实验中,遵循了实验设计的&&&&原则和&&&&原则。(4)根据上表中实验结果,你能得出的结论是&&&&。①胰蛋白酶 ②等量生理盐水&
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2014-高三生物一轮总复习备课资源包：专题7细胞的生命历程
分析与解答
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习题“目前临床上癌症治疗的方法,一般是手术切除肿瘤,为防止体内残留癌细胞,在手术后进行化疗,某生物兴趣小组的同学从资料上获知:二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测:二氯二乙胺能抑制癌细胞的增...”的分析与解答如下所示：
(1)要探究二氯二乙胺可以作为癌症的化疗药物,可以设计对照实验探究,这里的二氯二乙胺溶液浓度是自变量,实验组要加入不同浓度的二氯二乙胺溶液,对照组要加入等量的生理盐水,因变量是肿瘤组织细胞数目多少。实验材料可以利用题中①步骤已给的分散的肿瘤组织细胞,肿瘤组织细胞数目多少可以参照血细胞计数的方法,利用血球计数板计数。(2)实验中要注意实验条件要适合细胞的生长,这里不可以使用冰箱,冰箱温度太低,不是细胞生活的温度,应使用适宜温度的恒温箱。另外,从试管中吸取细胞培养液时,要注意先振荡,使细胞分布均匀后,再吸取,这样能保证数据的准确。(3)对照实验的最基本原则是对照原则和单一变量原则。
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细胞的分化、癌变、衰老和凋亡
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（8分）下图表示干细胞的三个发育途径。据图回答下列问题：(1)由A细胞形成的B细胞仍然保持着其特有的&&&&能力，A细胞到C细胞的过程是由&&&&控制的。(2)若D细胞是胰腺细胞，则结构⑦所起的作用是&&&&。(3)A细胞分化成D细胞的根本原因是&&&&&&&&&&&&&&&&&& &&&&。(4)若D细胞是正在衰老的细胞，该细胞中结构⑧发生的变化是&&&&&&&&& &&&&&&&&&&& &&&&。(5)由A细胞到形成多个卵细胞的过程，则必须经过细胞的&&&&分裂。&&&&
下列关于细胞凋亡的叙述中，不正确的是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&细胞凋亡也常常被称为细胞编程性死亡细胞凋亡受到细胞内遗传物质的控制细胞凋亡是种种不利因素引起的细胞死亡蝌蚪尾的消失是通过细胞凋亡实现的
癌细胞是不受机体控制、连续进行分裂的恶性增殖细胞。下列有关癌细胞的描述，正确的是&&&&具有丰富的核糖体细胞中自由水的含量降低细胞的呼吸速度加快是遗传物质发生变化的凋亡的机体细胞
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重点知识归纳及讲解
（一）实验原理
鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内 DNA与蛋白质
结合成染色质。利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶
解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA
与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的
滤出物DNA。再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物
质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴
定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）
鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。每组大约需要5―10mL鸡血细胞悬液。如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器
1、2mol/L的NaCl溶液
称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂
A液――1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。B液――体积分数为0.2%的乙醛溶液。实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。 3、0.015mol/L的NaCl溶液
称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管
DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损
（四）实验方法与步骤
1、提取细胞核物质
取5―10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒
沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，
然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA
在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，
核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
3、析出DNA黏稠物
沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅
拌。由于溶液浓度的下降，使得 DNA溶解度下降，蛋白质溶解度上升，DNA析出成白色丝状黏稠物，当黏稠物不再增加时，停止加入蒸馏水。
4、滤取DNA黏稠物
用多层纱布过滤，取纱布上 DNA的黏稠物。
5、DNA黏稠物再溶解
取含DNA的黏稠物放入桡杯内，加入2mol/L的NaCl溶液40mL，用
玻璃棒沿一个方向不停搅拌3min，使黏稠物尽可能多地溶解。
6、过滤含DNA的氯化钠溶液
用两层纱布过滤含 DNA的氯化钠溶液，取其滤液。
7、提取含杂质较少的DNA
在滤液中加入冷却的无水乙醇，并用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌，
由于 DNA不溶于酒精，会出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸去表面的水分。
8、DNA的鉴定
两支试管中各加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放
入其中一支试管中，搅拌使其充分溶解后，向两支试管中分别加入
4mL 二苯胺试剂，混匀后沸水溶中加热5min，待试管冷却后，比
较两试管的颜色变化，将发现加入DNA的试管中的溶液呈蓝色，从
而鉴定DNA的存在。
（五）注意事项
（1）制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，
使血液分层，取下层血细胞沉淀。
（2）获取较多DNA的关键是向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水，以便使细胞膜和核膜破裂，核内物质释放出来。
（3）实验中共有3次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。第1、3次要取其滤液，使用的纱布为1―2层，第2次是要取其滤出的黏稠物，使用的纱布为多层。
（4）实验中有6次搅拌，除最后一次搅拌外，前5次搅拌要朝向一个方向，并且在析出DNA，DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。
（5）实验中有两次使用蒸馏水。一次在第1步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，不应少于5min，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第3步，加水是为了稀释氯化钠溶液。
（6）实验中有三次加氯化钠溶液。在步骤2中，当加入氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离，并溶解在氯化钠溶液中。在步骤5中，加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。在步骤8中，加的NaCl溶液的浓度比前2次低的多，但还是为溶解DNA。
（7）在步骤7中，必须使用冷酒精（至少在5℃以下存放24h），并且将1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果悬浮在溶液中的DNA丝状物较少，可将混合液放入冰箱中再冷冻几分钟。
（8）本实验成功的关键，是保证提取到足量且较纯净的DNA。因为DNA在细胞中含量少，所以在下列步骤中应特别注意：在步骤1中使用的鸡血的量要在180mL左右。提取细胞核物质时要充分搅拌5min以上。在步骤2中要充分晃动烧杯，在步骤3
中加蒸馏水要控制好量，同时应
用玻璃棒缓缓搅动使DNA聚集其上。在第4步中要使用多层纱布过滤，在第5步中要充分搅伴，在第7步中使用冷酒精。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。
（9）盛放鸡血细胞液的容器和实验中的烧杯和试管最好也是塑料制的，因为玻璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA含量。
（六）实验现象与讨论
最后一次搅拌时，玻璃棒上会有乳白色丝状物出现，这就是DNA。用二苯胺试剂鉴定时会发现试管中溶液呈蓝色。
本实验较为复杂，对材料的量以及实验过程有较高要求。
讨论1、为什么在第4步“滤取DNA粘稠物”中纱布上的DNA粘稠物有的为血红色？
其原因可能是在第一步搅拌时，搅拌不充分。
讨论2、有的同学在最后一步“DNA的鉴定”中，发现两支试管的颜色变化不很明显，其原因是什么？
试管内的颜色变化要在煮沸5min后，冷却观察就会很明显。
一、以菜花为实验材料进行DNA的粗提取
课前准备：将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放人冰箱冷冻室24h。
提取DNA的具体步骤
1、取材：称取30g菜花，去梗取花，切碎。
2、研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。
研磨液的配制方法如下。将10.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)加入到50mL蒸馏水中，使其溶解，然后，用2mol/L的HCl溶液调节pH至8.0，再加入8.76g NaCl、37.2g EDTA(乙二胺四乙酸二钠)、20g SDS。待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL。
一般地，实验室提取高纯度的DNA都采用一种阳离子去污剂――十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿一异丙醇混合液(体积比为24:1)抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNA。
3、过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000r/min的转速，离心2～5min，取上清液放入烧杯中)。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
4、沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的预冷酒精溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。
二、二苯胺鉴定DNA的化学原理
DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω羟基一γ基戊醛，它再和二苯胺作用而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么? - 实验交流 - 生物秀
标题: 考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么?
摘要: [考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么?] 配好的考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么?测蛋白时有时不能一次测完,要间隔一段时间再测,若是考马斯亮蓝溶液不能长时间存放,每一次测蛋白都要重新作标曲了测么? 关键词:[考马斯亮蓝 蛋白 冰箱 稀释 染色]……
配好的考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么?测蛋白时有时不能一次测完,要间隔一段时间再测,若是考马斯亮蓝溶液不能长时间存放,每一次测蛋白都要重新作标曲了测么?回复不可以的 会变质的回复
不可以的 会变质的 那就是隔段时间测样品蛋白含量的时候,必须重新作标曲了再测了?回复没问题啊，我放半年多了照样使用啊。回复你是说考马斯亮蓝，还是加了蛋白之后的考马斯亮蓝回复放在4度冰箱就可以可以了，理论上说，每次做都要做做标曲的，但我们实验室每瓶测一次就可以了回复
你是说考马斯亮蓝，还是加了蛋白之后的考马斯亮蓝 没有加蛋白的,就是溶解在乙醇和磷酸的混合液之后,稀释到1000ml的.那个能存放很久么?回复
没问题啊，我放半年多了照样使用啊。 就是室温储存的么?不用放进冰箱中?回复
放在4度冰箱就可以可以了，理论上说，每次做都要做做标曲的，但我们实验室每瓶测一次就可以了 哦,那就是稀释好的考马斯亮蓝溶液是可以长时间存放的啦!一定要放在4度冰箱中保存的么?回复
放在4度冰箱就可以可以了，理论上说，每次做都要做做标曲的，但我们实验室每瓶测一次就可以了 那也就是稀释好的考马斯亮蓝溶液是可以长时间存放的.一定要放冰箱中保存么?回复
没有加蛋白的,就是溶解在乙醇和磷酸的混合液之后,稀释到1000ml的.那个能存放很久么? 4度，BSA -20回复
4度，BSA -20 我不是说BSA的存放条件呢,我是说的考马斯亮蓝溶液啊回复如果你说的是染色的，室温放置就行，没有时间限制！！回复
如果你说的是染色的，室温放置就行，没有时间限制！！ 嗯,我说的就是配制好的考马斯亮蓝溶液,没有和蛋白染色的啊.考马斯亮蓝固体试剂是可以长期放置的,我就是想确定下,它配成溶液之后是不是也能长期放置的.?回复固体我一般放在4度，因为不常配，配好的溶液室温放置。回复常温下我放半年也照用啊
从来没出现过问题
放心吧，没事儿的，标线测一次就可以了，不用每次都测得回复测含量的貌似要现配吧
染色用的 没事回复学习了。。:tiger05:
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