??):13~15/赵富华?；&13&；薄层色谱法检测环丙氨嗪中5种有关物质；赵富华；(中国兽医药品监察所,北京??100081)；[收稿日期]??[文献标识码]B??[文章编号](；03??[中图分类号]TQ460.72；[摘??要]??研究了5种环丙氨嗪有关物质和环丙；结果表明
??):13~15/赵富华????????????????????中国兽药杂志&13&薄层色谱法检测环丙氨嗪中5种有关物质赵富华(中国兽医药品监察所,北京??100081)[收稿日期]20040511??[文献标识码]B??[文章编号]1002001303??[中图分类号]TQ460.72[摘??要]??研究了5种环丙氨嗪有关物质和环丙氨嗪在有关物质检查薄层色谱中的响应相关性。结果表明,可以用自身对照替代对照品对照的方法对有关物质进行检测。[关键词]??薄层色谱法;环丙氨嗪;有关物质????环丙氨嗪是一种昆虫调节剂,有选择性地控制双翅的蜕皮,尤其对在粪便中繁殖的几种常见苍蝇幼虫(即蝇蛆),有很好的抑制作用。目前,国内外主要用于控制动物厩舍蝇幼虫的繁殖,对改善畜牧业生产环境和全国的卫生有重要意义。??进口兽药质量标准 采用薄层色谱法,以对照品法对环丙氨嗪中有可能存在的5种有关物质进行测定。由于涉及对照品种类多,获取不易,往往因缺少这些对照品而使该检查项无法进行。本试验旨在研究确定这5种环丙氨嗪的有关物质和环丙氨嗪在薄层色谱[1]腈-水(9?1,V/V)。按??中国兽药典 [2]附录中#薄层色谱法?试验,展开后,晾干,置含氯气的玻璃缸中0.5~1min,取出,把多余氯气吹尽,喷以淀粉-碘化钾试液显色。2.2??溶液配制2.2.1??供试品溶液??取本品50mg,置10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水溶液(1?1,V/V,以下同)稀释制成每1mL中含5mg的溶液,作为供试品溶液。2.2.2??1%自身对照溶液??取供试品溶液1mL,置100mL量瓶中,加四氢呋喃-水溶液至刻度,制成1%的供试品溶液作为自身对照溶液。2.2.3??有关物质A、B、C、D、E对照溶液??分别取A、B、C、D、E5种对照品5.0、15.0、4.5、2.5、2.5mg,分置5个10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水溶解并稀释至刻度,摇匀。分别吸取1mL分置5个10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水制成每1mL中分别含0.05、0.15、0.045、0.025、0.025mg对照品的溶液作为对照溶液A、B、C、D、E。2.2.4??有关物质混合对照溶液??取对照品A5mg、B15mg、C4.5mg置同一10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取1mL置10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水稀释至刻度,摇匀,即得每1mL中含A、B、C分别为0.05、0.15、0.045mg的溶液,作为混合对照品溶液%,取D2.5mg,E2.5mg置同一10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取1mL置10mL刻度试管中,加四氢呋喃-水溶解并稀释中的响应相关程度,期望能以自身作对照替代对照品对照的方法对有关物质进行检测,达到有效控制产品质量的目的。1??材料与试药四氢呋喃、乙腈、高锰酸钾、盐酸皆为分析纯;硅胶G,薄层层析用,硅胶板G,10cm!20cm,自制;环丙氨嗪批号为010913的样品由甲厂提供;批号为的样品由乙厂提供;批号为的样品由丙厂提供。有关物质对照品分别为2,4,6??三氨基三嗪(G28522,简称A)、2??氨基??4,6??双环丙氨基三嗪(CGA72095,简称B)、2??氯??4,6??二氨基三嗪(G28273,简称C)、2,4,6??三环丙氨基三嗪(CGA73036,简称D)、6??氨基??2??氯??4??环丙氨基三嗪(CGA22977,简称E),均为进口对照品。2??方法与结果2.1??色谱条件??薄层板为硅胶G板;展开剂为乙赵富华(1969年~),女,助理研究员,从事兽用化学药品的质量复核和标准研究工作。&14&中国兽药杂志????????????????????):13~15/赵富华??至刻度,摇匀,即得每1mL含D、E分别为0.025mg的溶液,作为混合对照溶液?。2.3??5种有关物质对照品溶液斑点与环丙氨嗪样品溶液斑点位置的确定??依次分别吸取对照品溶液A、B、C、D、E和供试品溶液2、2、2、4、4、2??L点于同一硅胶G薄层板上,按2.1项下条件展开后,Rf值由小到大依次为A(0.27)、环丙氨嗪(0.44)、B(0.62)、D(0.78)、C(0.81)、E(0.89),见图1。2.5.1??对照品对照方法[1]??吸取供试品溶液和混合对照品溶液%各2??L,分别点于同一硅胶G薄层板上,吸取供试品溶液和混合对照品溶液?各4??L,点于另一硅胶G薄层板上,按2.1项下方法展开、显色,供试品溶液如显杂质斑点,其颜色与对照品溶液相应的斑点比较,不得更深。按此方法对3个厂家的环丙氨嗪原料进行了检测,经与有关物质对照品溶液的主斑点对照,甲、乙两厂的6批环丙氨嗪样品均出现3个杂质斑点,确定为A、B、E;丙厂的3批环丙氨嗪样品均出现2个杂质斑点,确定为B、C。2.5.2??自身对照方法2.5.2.1??方法一??根据相关性试验,甲、乙两厂可按以下方法检查环丙氨嗪有关物质:按2.2.1项和2.2.2项制备供试品溶液和1%自身对照溶液,(吸取供试品溶液2??L和对照溶液4??L,分别点于同一硅胶G薄层板上,按2.1项下方法操作,供试品溶液如显杂质斑点,位于主斑点上、下并靠近主斑点的杂质斑点,其颜色均不得超过对照溶液的斑点(3%,1%);)吸取供试品溶液4??L和对照溶液1??L,分别点于同一硅胶G薄层板上,按2.1项下方法操作,供试品溶液如显杂质斑点,离主斑点最远的杂质斑点颜色不得超过对照溶液的斑点(0.5%)。2.5.2.2??方法二??丙厂检查环丙氨嗪有关物质的方法:按2.5.2.1项下方法配制供试品溶液及对照品溶液,分别吸取供试品溶液2??L和对照溶液1??L、4??L,点于同一硅胶G薄层板上,按2.1项下方法操作,供试品溶液如显杂质斑点,离主斑点较近的杂质斑点颜色不得超过对照溶液4??L的斑点(3%);离主斑点较远的杂质斑点颜色不得超过对照溶液1??L的斑点(0.9%)。3??讨论3.1??操作中一定要恰当地掌握氯气的熏蒸时间,时间过短斑点不明显,时间过长氯气不容易吹尽。3.2??薄层板展开后,要用氯气熏蒸,并吹干薄层板上的氯气,再喷显色剂,吹氯气时不要用热风吹,否则其有关物质中有的会不显色或者颜色变浅,导致结果不准确。最好用冷风吹。3.3??使用薄层板不同,所得环丙氨嗪及有关物质斑点的Rf值就不相同。所以用自身对照法测定有关物质时不用Rf值大小来控制,而是通过判断与主斑点距离的远近来控制。1.A,2.B,3.C,4.环丙氨嗪,5.D,6.E图1??环丙氨嗪及其有关物质的薄层色谱图2.4??环丙氨嗪与5种有关物质的相关性试验??分别吸取自身对照溶液1、2、4??L,混合对照品溶液%2??L,混合对照品溶液?4??L,按2.1项下条件进行试验,比较各斑点的颜色深浅及大小,结果显示:1%的自身对照液4??L的斑点与A(1%)2??L,B(3%)2??L的杂质斑点相接近,1%的自身对照液1??L的斑点与C(0.9%)2??L,D(0.5%)4??L,E(0.5%)4??L的杂质斑点相近。经重复试验,结果基本一致。5种有关物质与环丙氨嗪的响应相关性见表1。表1??5种有关物质与环丙氨嗪的响应相关性有关物质ABCDE有关物质限量[1]/%1??3??0.90.50.5环丙氨嗪自身对照/%2??2??0.50.250.252.5??样品有关物质检查??):13~15/赵富华????????????????????中国兽药杂志&15&3.4??由于环丙氨嗪的生产工艺不同,各企业在合成环丙氨嗪的过程中会产生不同的有关物质。企业可以根据进口有关物质对照品确定有关物质种类以后,参照本文给出的5种有关物质与环丙氨嗪的响应相关性,采用自身对照法作为内控标准。既可简化操作,又可降低成本。参考文献:[1]中华人民共和国农业部.进口兽药质量标准[S].]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典一部二???年版[S].北京:化学工业出版社.附录23.Determinationoftherelatedsubstancesincyromazinewithself??controlbythethin??layerchromatographyZHAOFu??hua(ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing??100081;China)Abstract:Withself??control,amethodofTLCfordeterminingtherelatedsubstancesincyromazinewasestablished.Keywords:thethin??therelatedsubstances三亿文库包含各类专业文献、应用写作文书、生活休闲娱乐、高等教育、专业论文、行业资料、幼儿教育、小学教育、79薄层色谱法检测环丙氨嗪中5种有关物质等内容。　
　【用法与用量】在苍蝇季节开始时,每吨饲料按 5g 纯品(5ppm)计量,加入饲料中...薄层色谱法检测环丙氨嗪... 3页 3下载券 环丙氨嗪预混剂10%说明书... ... 　环丙氨嗪 (2)_畜牧兽医_农林牧渔_专业资料。【兽药...无害,已被世界卫生组织 (WHO)列为最低毒性物质。...3、气雾喷洒:5 千克水中加入本品 500 克,集中喷洒... 　环丙氨嗪预混剂10%说明书_畜牧兽医_农林牧渔_专业...鸡内服本品后迅速吸收和排泄,在鸡排泄物中有内服... 　(HHI )两个指标被经常运用在反垄断经济分析之中。...区域市场需求变化趋势 第五章 环丙氨嗪行业生产分析...品牌测试研究第8页 ◇ 商圈分析研究 ◇ 产品测试... 　如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法_药学_医药...因为 一者实际检测时样品中不可能存在此种情况; ...供试品溶液和对照溶液浓度之间的比例关系 5.加样... 　了薄层色谱法的含义、有关原理、操作方法、各个环节...检测技术等方面的发展,加之其简单、便捷、经济、...[5] 2 操作环节及方法 2.1 吸附剂、载体 薄层... 　5. 结论薄层色谱分析方法对层析分离过程的控制性分析...方中利血平、 利眠宁和盐酸异丙嗪 3种成分 ,取 ...结果, 3 种有关物质与原药完全分离,Rf 值适中,... 　薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很...样品在溶剂中的溶解度很大, 原点将呈空心环――...15cm),取出薄层板,晾干,按各品种项下的 规定检测...关注今日：0 | 主题：304732
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【求助】薄层色谱法Rf值限度？
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现在做薄层，不知道点与点之间的Rf值在多大范围算是相同？在线等！急！
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在同一块板上，样品与对照品一起展开，两个点应该在同一位置。
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和溶剂前沿比较主斑点的Rf值0.3-0.7最好，难得0.2-0.8也行。点和点之间的相对Rf值，我觉得还是用分离度表示好，符合药典规定&1.5个人观点，仅供参考
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楼上说的是薄层鉴别是的分离度（用Rf表示）也就是用概率算出来的,置信区间&99.7%即Rf在0.3--0.7之间，复杂的样品在0.2--0.8之间也行。置信区间&95%,这是判断两个斑点完全分离的参数。
我个人认为楼主所说的是判别是否是 同一物质斑点。对于简单样品，药典一般描述是在同一薄层板上，（同一条件下）样品与对照品在相同位置上显相同颜色的斑点（深浅可不同），就可以说明是同一物质。但对于复杂样品，常常需要从完整的薄层色谱与对照的薄层色谱全面的比较，或靠完整的“指纹”图谱才能准确鉴别。在如：西洋参与人参的鉴别，他们都有Rg1、Rb1、Re的成分，所以做薄层时，除用对照品外，还要用对照药材作对照。但这样方法也不是完全可靠。在样品组分的Rf值与对照品不一致时，也并不能说就不是同一物质，因为样品可能有干扰组分，如有时点样浓度不同，特别是中药及其制剂，待测组分含量少、点样量大，样品斑点的Rf值小于对照品的Rf值，就要根据不同的情况采取不同的方法解决了，如纯化样品点样，为提供较确切的证据，有时还需再用几个相互独立的薄层色谱系统（如吸附色谱、反相色谱）进行比较（包括展开剂、显色剂、吸附剂）或把样品和标准品混合点样，在多个独立系统中都不分离，就可确定是同一化合物了。希望能对你有帮助！！！
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谢谢各位！请版主给xiangfree 加分！
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好问题！药典中“供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点” 这谁都知道，但是到底Rf在多大范围之内算是“相应的位置”？
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我理解错了，我以为是同一条色谱带中的点、楼主说的是不同色谱带中的点。
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