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如何计算western blot 两条marker中间蛋白条带的分子量?
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这个帖子发布于12年零272天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如题， 请大虾指教
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发给你份分析胶面条带的软件,希望有所帮助!
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xiexie xiang1x
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【资源】【献给初学者】western blot操作步骤2012版
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这个帖子发布于6年零95天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
2011年鄙人做western的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份western blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献（原谅我无法像Endnote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考资料），希望对大家有帮助。鄙人按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的western条带了，所以相信你也行。为了节省时间，鄙人总结了一下western blot Quick Guide和一天做出western的具体时间规划，附在文末。初次发这么长的帖子，难免有错，欢迎批判指正。背景：蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于<font style="color:#81年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。一、蛋白质的样品制备:由于这一步方法各异，具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Western Blotting的第一步，样品制备是关键步骤，要求尽可能的获得所有蛋白质，应注意以下问题:&
在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。&
选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液。尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。&
防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰，制备过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（加入合适的蛋白酶抑制剂）。&
样品建议分装成合适的量（比如分装出20ul检测蛋白质定量用），然后保存与-20°或-80℃中长期保存，但要注意不要反复冻融，因为会使蛋白的抗原特性发生改变。&
若蛋白提取过程存在问题或蛋白发生降解则很难进行好之后的实验，也就很难做出好的结果了。除此之外 loading buffer的作用也不容忽视，切莫使用不新鲜的上样缓冲液，同时在处理时也应注意将样品与loading buffer混合均匀。二、蛋白质定量
如果要定量的话，一般选择BCA或者Bradford方法，BCA要求检测波长为562nm，Bradford为595nm。具体方法见各试剂盒说明书。为避免假阳性结果，建议先把lysis buffer加入BCA工作液或考马G250混合看是否产生颜色。测完蛋白含量后，计算含50~100ug蛋白的溶液体积即为上样量（一般8cm宽的迷你胶每个泳道最大能承载的蛋白质量为150ug，所以如果从组织提取蛋白的话上样量不宜过大）。网上有人喜欢等质量上样（即每个泳道的上样体积不一但质量一定），也有使用等体积上样（即先把各个样品稀释到某一固定浓度，然后等体积等质量上样，计算上样体积时需包含loading buffer的体积）。按分子克隆的说法，还是使用等体积上样比较好。上样总体积一般不超过15ul，加样孔的最大限度可加20ul样品。上样前要将样品置于烧杯内，将烧杯置于石棉网上用酒精灯加热至沸腾，在沸水中煮3~5min使蛋白充分变性。也可以使用PCR仪95°加热5min，效果佳，操作方便。之后样品可以在4°冰箱短时间保存，也可在-20°冰箱保存数月，但是反复冻融会使蛋白质的抗原特性改变。三、SDS－PAGE电泳
（1）清洗玻璃板：
蘸点洗洁精轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。若不继续使用，需用无水乙醇擦拭后晾干再妥善收起来，玻璃板之间垫玻璃纸隔开。梳子应用水洗干净，临用前用无水乙醇擦拭晾干。
（2）灌胶与上样
1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶（操作前先往玻璃板间灌水，检查是否漏）。
2、按配胶试剂盒说明书选择合适的分离胶浓度配置，最后加入TEMED，之后摇匀即可灌胶。配制凝胶时要充分混匀，此外应保证试剂的新鲜，特别是过硫酸铵。灌胶时掌握好速度，避免气泡产生（注意浓度越小的胶含水越多，凝固后胶体积缩小越多）。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢，否则胶会被冲变形）。未聚合的丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应该戴手套防护。梳子插入浓缩胶时，应确保没有气泡。注意给积层胶留出足够的空间（分子克隆推荐长度为插入的梳齿长再加1cm）。
3、当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等几分钟觉得差不多的时候就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。聚合时间由AP以及TEMED决定，通常在30min左右，AP不新鲜会导致聚合变慢，气温较低时胶是会凝得慢一些，必要时可适当增加AP以及TEMED的量，但通常不会超过1h，若超过1h甚至更长仍未聚合，应检查配制的操作有无错误。由于TEMED催化APS释放相关化学基团，再由APS释放的基团催化Acr/Bis聚合，所以如果APS不新鲜的话加再多的TEMED效果也不佳，这就是为什么推荐APS每周新鲜配置的原因。
4、按说明书配积层胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固前最好在两边补胶至刚刚冒顶。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5、趁积层胶聚合的这段时间，取适当体积样本混合1X SDS loading buffer（最好事前分装好，每次从冰箱里取一管即可），95~100°加热5min，若有沉淀可用稍低温度，比如45~55°加热1h达到变性的目的。我一般习惯分装20ul到PCR管里，先和loading buffer混合好，临用前用PCR仪加热95°C 5min，效果不错。
6、胶做好后连同玻璃板一起安装到电泳槽上，加入电泳缓冲液后开始准备上样（我们使用的是大连竞迈科技公司的MV-III型小型单垂直板电泳槽，电泳液至少要漫过内测的小玻璃板，电泳槽下面不用倒太多电泳液）。加样前可用5ml注射器或加样器先冲洗一下加样孔。用微量加样器贴壁吸取样品，将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品（加样太快可使样品冲出加样孔，若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时，进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤3次，以免交叉污染。目前我们做的mini胶上有10个上样孔，一般在第一个孔加入marker（我用的是Fermentas预染marker），其余9个孔加入样品，也可在头尾孔内加入marker，中间8个孔加样品。加样前样品应先离心，尤其是长时间放置的样品。在未加样的孔中应加入等量的样品缓冲液。上样时，小心不要使样品溢出而污染相临加样孔。也可使用10ul的枪头就行，比用微量加样器快很多，用枪头时注意不要插得太深，容易把玻璃板撑开，样品就落到胶和玻璃板之间的空隙了。
（3）电泳电泳槽内加入电泳缓冲液冲洗清除黏附在凝胶底部的气和未聚合的丙烯酰胺，网上有资料建议低电压短时间的预电泳，清除凝胶内的杂质，疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通，但是在《分子克隆》上却反对这种做法，理由是会破坏缓冲系统pH的不连续性。请各位按照实际经验来做即可。电泳时间和电压说法各异。按照各实验室的惯例或者电泳槽的使用说明来操作。电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳，进行转膜。为减少蛋白质条带的扩散，上样后应尽快进行电泳，电泳结束后也应直接或者转印。四、转膜
我们实验室使用的是半干转膜电泳槽。对于转印90kd以下的蛋白，转膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的话可以加入0.037%的SDS。
（1）在电泳结束前20min开始准备转膜所需的东西。转一张膜需准备6张的滤纸（长一般为8.1~8.3cm，宽度根据裁的胶大小实际测量，但胶一般会缩水，所以裁8cm就行）和1张PVDF膜。切滤纸和膜时一定要戴干净手套，因为手上的蛋白会污染膜。PVDF膜使用前用无水甲醇中浸泡1min~2min。目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。
（2）将玻璃板撬开才可剥胶，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板（撬时一定要小心，玻板很脆弱，我用的是冰箱里附带的塑料除霜铲，效果出奇的好）。除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去，要避免把分离胶刮破。也可取10ml注射器吸满转印缓冲液，往玻璃板与凝胶之间注水，使液体的压力将两者自然分开。取出凝胶后应注意分清上下，可以在右上角裁一个小角。之后有两种方法供选择，一是按照marker指示，把含有自己感兴趣的蛋白的胶裁下来，二是把整张胶转膜，前一种方法更加节约材料，但操作稍微麻烦了一点。在加有转移液的培养皿里放入裁好的胶、浸过甲醇的PVDF膜和滤纸，平衡10min左右，也是为了除去滤纸和转移膜中的气泡以及胶上多余的SDS。
（3）带上手套，平放转移槽的底座，依次在石墨电极上叠放3张浸泡过缓冲液的滤纸、PVDF膜（此时可在PVDF右上角减去一个角，以辨明转膜后的蛋白面与非蛋白面）、刚刚完成电泳的凝胶和另外3张浸泡过缓冲液的滤纸。用枪头或移液管在叠层的滤纸上滚动，除去气泡。注意每叠一层就要用玻璃棒或圆筒试管赶去气泡，因为一个气泡的厚度对于蛋白来说都是十万八千里的。用干净纱布将叠层上面和周围的多余缓冲液吸干（这一步很重要，宁可太干也不能太湿，太干容易烧胡，太湿的话多余的缓冲液会导致电流短路，大大降低转移效率，如果同时转好几条胶的时候更要小心，有一个胶短路就会影响整体的转移效率）。最后将转移槽的上盖扣上，接通电源开始转膜。由于设备昂贵，第一次操作应向熟手请教，否则短路可能烧坏设备！转完后立即清洗设备，特别是金属上盖，转膜液特别容易在金属上盖上形成结痂，影响设备的正常使用，我们实验室今年做western的同志因为忽略这一点，转膜仪烧坏了好几次。
（4）依据分子量大小电泳15~60min。如果初次转膜，可以根据一般经验，即多少kD的蛋白就转多少分钟，再根据结果调整时间。之后断开电源，取出转移膜进行后继实验。
（6）为了便于观察电泳效果和转膜效果，以及判断蛋白分子量大小，最好使用预染。传统方法是将膜用1×丽春红染液染5min（于脱色摇床上摇）。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白。实际上更常用且简便的方法是先将膜晾干，然后浸入20%的甲醇，待完全浸湿后取出透光观察即可看到蛋白条带（此方法仅仅适合PVDF膜）。将膜晾干备用。使用预染marker话可以看见marker的颜色转印到了膜上，但是凭借这个颜色来判断是否转印完全或转印过头是不可靠的。五、免疫杂交反应
（1）将膜移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h即可。如果是自己配置的封闭液，最好过滤一下以消除固体杂质。实际经验表明与其封闭过夜，不如一抗孵育过夜，具体原因可以参考这个帖子：http://protein.dxy.cn/bbs/topic/
（2）将一抗用封闭液稀释（一般用封闭液稀释即可，如果背景不高用TBST稀释也可以，当然熟练后还可以自由发挥，配制一些自己的复方稀释液）至适当浓度（可以在1.5mlEP管中配置工作液，常用稀释倍数为1:200，1:500，1:1000，具体需要预实验进行摸索，用后可回收重复用2~3次，但回收重复利用的效果如何就要看抗体的质量，分装的抗体不推荐回收。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于抗体液面上，掀动膜四角以赶出残留气泡（也可使用手术室的病理袋，质量不错，减去下面的折叠部分，用封口器（40~80元一个）封上，不漏液即可）。37°孵育1h之后转移到室温下再孵育1h（或者4°孵育过夜），用TBST在室温下脱色摇床上洗两次，每次10min；再用TBS洗一次，10min。也可以多洗几次，比如4次，每次5min。
（3）在培养皿内加入二抗稀释液（10ml足够了，一般1:1000甚至1:10000用TBST稀释），放在摇床上，室温下孵育1～2h后，用TBST在室温下脱色摇床上洗两次，每次10min；再用TBS洗一次，10min，进行化学发光反应。选择好一个合适的条件不要轻易改变，另外相比一抗，二抗作用的时间应严格控制，实践证明一抗时间长点可能没什么关系，而二抗时间若过长过短都将会直接影响结果。二抗孵育之后还要注意好好洗涤，否则显影是背景可能脏。六、化学发光（ECL），显影，定影
（1）现在工作台上铺一张保鲜膜，将PVDF膜放在保鲜膜上。将ECL的A和B两种试剂在EP管内等体积混合（注意吸完A试剂后吸B试剂前要患枪头），然后均匀滴在PVDF膜的蛋白面，反应1~2min后，将PVDF膜上多余的ECL工作液吸干，之后转移到在X片夹中预先铺好的保鲜膜上一侧，把另一侧翻过来盖在其上。用透明胶把保鲜膜固定在片夹上。
（2）在暗室中，将1×显影液和定影液分别到入塑料盘中；在红灯下取出X－光片，用切纸刀剪裁适当大小（比膜的长和宽均需大1cm）；打开X-光片夹，把X－光片放在膜上，一旦放上，便不能移动，关上X-光片夹，开始计时；根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min到2min，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果（也有人重叠压好几张片，固定曝光5~10分钟，从这好几张片中选出最合适的底片）；曝光完成后，打开X-光片夹，取出X-光片，迅速浸入显影液中显影，待出现明显条带后，即刻终止显影。显影时间一般为1～2min（20～25℃），温度过低时（低于16℃）需适当延长显影时间；显影结束后，马上把X-光片浸入定影液中，定影时间一般为5～10min，以胶片透明为止；用自来水冲去残留的定影液后，室温下晾干（注意：显影和定影需移动胶片时，尽量拿胶片一角，手指甲不要划伤胶片，否则会对结果产生影响）。X光片一般选用柯达原装的生物实验专用柯达X-OMATBT胶片 。显影液和定影液最好每周配置一次，避光室温保存，显影和定影液是最便宜的试剂了，千万不要因为它而影响了整个结果。七、凝胶图象分析将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值，比如bio-rad的Quantity One。如何使用请看这里。主要参考资料：1、WB实战指南+正确使用Quantity One定量 by
jacqueslm2001 2、Abcam的western新手指南 3、土豆网的western blot视频 上海交大出品 4、《分子克隆实验指南》精编版 化学工业出版社5、《抗体技术实验指南》科学技术出版社6、milipore的western blot的优化方案 7、Western blot步步看(网络流传最广的资料) 作者不详 8、Bio-rad 蛋白印迹手册 9、穷人的劳斯莱斯-我的五年western blot体会 by seagate 附：Western Blot Quick Guide（以及一天跑完Western的时间规划）前期准备：蛋白已经定量，各样本已经稀释到某固定浓度，已经和SDS loading buffer混合，已经分装好，保存与-20°。头天下午或晚上配胶，分离胶和浓缩胶一起配好，带上梳子，放入潮湿的自封袋内放入4°冰箱备用。8:00 从冰箱里取出蛋白样品，用PCR仪95度加热5min。混合均匀并离心。8:30 取出昨晚配好的胶，组合，加电泳液。在电泳液里拔梳子能稍微容易一些。用10ul的枪加样。9:00 开始电泳。恒流30mA一般1个小时足够了。9:30 开始准备转膜用的滤纸和PVDF膜，PVDF膜泡甲醇。一般8cm的宽是固定的，所以如果要裁胶的话可以先大概估计一下。10:10 电泳结束（假设电泳用了70分钟），起开玻璃板，裁出胶上所要的条带，如果整块胶转就更方便了。把胶放在盛有转膜缓冲液的培养皿里。11:00 转膜开始（这里裁纸和铺三明治还是比较费时间的，我一般要用30分钟到50min，所以这里要抓紧时间）。12:00 转膜结束（这里按60min的半干转的时间来计算）。开始封闭1h。13:00 封闭结束，开始孵育一抗（在这里你可以选择一抗孵育过夜，如果不过夜的那一天就能结束），如果不过夜的话我一般选择37° 1h然后在室温（23°左右）再1h。15:00 一抗孵育结束。TBST洗涤3*10min或者5*6min。15:30 开始孵育二抗。室温1h足够了。16:30 二抗孵育结束。TBST洗涤3*10min或者5*6min，这里推荐采用5*6min。17:00 ECL发光，压片10min，显影1min，定影10min，那么在18:00之前你就能看到结果了，呵呵，如果结果不好还有后招，用stripping（一抗二抗洗脱液）洗涤，我用的是碧云天的碱性一抗二抗洗脱液，按照说明书来一般20min就行，然后洗涤几次，重新封闭1h，然后一抗过夜，明日在继续战斗。这样的话18:30之前也能结束战斗了。行了，暂时就讨论到这里吧，如果您觉得对您有帮助，请投上您宝贵的一票鼓励鼓励作者哦！
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dlzhangyu 编辑于
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楼主说的很详细也很实用。我最近跑了两次，非特异性条带很多，除了一抗是多抗的原因外。。其他还有待改进的地方么？期间有次用蒸馏水稀释了一抗和二抗，不知道这不操作的影响有多大，明天有牛奶稀释抗体看看效果如何。
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学习了，谢谢lz
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非常感谢！
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为何Western Blot 电泳出来的marker条带中间细，两端粗？
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请教各位大侠，为何Western Blot 的marker条带中间细，两端粗？而目的条带是好的。电泳的时候就发现marker 是这样了。谢谢！
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有可能是中间有杂质，挡住样本电泳了，这个问题比较奇葩呀，不好说怎么给解释呢！
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marker泳道是否添加了RSB, 把marker和RSB混匀加入，就会基本避免这种情况
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胶没混匀吧！
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关于丁香园客户服务热线400-
电话：400-
预染发光Western Marker
预染发光Western Marker
100μl (20-50T)
预染发光Western Blot Marker 是专门为Western
Blot 试验设计的分子量标准。传统的Western Blot 试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率。
但预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断，另外预染蛋白Marker都经过化学修饰，经过化学修饰的蛋白在SDS-PAGE 电泳过程
中迁移率发生改变，分子量信息不再准确，往往导致Western
Blot 结果判断出现较大偏差。
海基Western Blot Marker由7
种不同分子量的蛋白组成(19、20、35、45、60、65、110 KDa)，
其中19、45 、65KDa 三条带为蓝色预染蛋白，用于SDS-PAGE胶电泳时控制蛋白的电泳分离率和监测蛋白转膜效率，其他4 种蛋白都可与人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、
兔的IgG 恒定区结合, 因此预染发光Western Blot Marker就能与抗原在同一张胶片上曝出信号，阳性信号可以直接通过Western Blot Marker的位置来判断。另外，预染发光
Western Blot Marker 还可作为Western Blot 试验的阳性对照。
-20°C保存，有效期2年。避免反复冻融，建议分装后于-20°C保存。
Western blot结果的阳性对照
蛋白转膜效率鉴定
蛋白大小鉴定
Fig.小鼠脑组织RIPA裂解定量后SDS-PAGE电泳，
转膜后一抗二抗孵育，超敏ECL发光液检测，一抗为ANT（N-19）多克隆抗体。M为预染
发光Western Marker，泳道1-5为不同处理组
的样品杂交结果。Western blotting 蛋白Marker
最小起订2支
供货总量5000支
发货地址北京北京市
建议售价￥120/支
更新日期日
电话咨询请告知是在盖德化工网上看到的，谢谢!
企业认证：
注册资本：2000万
企业性质：私营独资企业
主营产品：生化试剂、实验耗材
公司地址：北京市通州区马驹桥联东U谷
产品英文名称：
Western blotting protein Marker
产品规格：
Western&Blot&Marker&产品简介：本产品包含5种预染的已知分子量标准蛋白质，分子量范围为43kD-200kD，条带分别为：43，66.2，97.4，130， 220。可以直接观察蛋白质电泳及清晰地判断WesternBlot的转移 效果。经SDS-PAGE凝胶电泳后转移到PVDF或NC膜上可得到清 晰的5条蓝色的蛋白带。储存条件：-20℃保存六个月。避免反复冻融，建议分装后 于-20℃保存。 使用说明：1.开封后，可根据需要分装成小管，建议每管分装10&l，-20℃ 贮存，每次取一管使用。2.本产品已经含有了样品缓冲液，使用前取分装后的小管65℃预 热5分钟即可上样进行电泳，上样量5-10&l。 3.建议分离胶浓度为8%。注意：上样前，蛋白样品65℃预热是必需的，否则电泳后一些蛋 白会沉积在分离胶的上沿，出现一条蛋白杂带。
Western&Blot&Marker&&说明书
货号：PR1800
规格：10T(50&l)&/20T(100&l)
保存：-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融，建议分装保存。
本产品由北京索莱宝科技有限公司优惠供应，公司常年现货，欢迎广大科研工作者及经销商同仁前来咨询选购；另外公司专业从事进口科研生化试剂的批发及零售业务，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学等诸多生命科研领域。因公司业务发展的需要，现诚征各地经销代理商，欢迎有志从事本行业的精英、同行莅临指导。
Western&Blot&Marker是专门为Western&Blot试验设计的分子量标准。传统的Western&Blot试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率。但预染蛋白Marker用在Western&Blot试验中有三大缺点：（1）预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断，因此后续的图片需要拼接才能两者合而为一；（2）预染蛋白Marker都经过化学修饰，经过化学修饰的蛋白在SDS-PAGE电泳过程中迁移率发生改变，分子量信息不再准确，往往导致Western&Blot结果判断出现较大偏差；（3）预染蛋白Marker无法检测作为杂交过程的阳性对照。Western&Blot&Marker由6种不同分子量的蛋白组成（20、40、60、70、80、120&KDa），其中70KDa条带为蓝色预染marker，其它五个条带都可与人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、兔的IgG恒定区结合。&Western&Blot &Marker可以直接结合二抗，&或通过结合一抗间接结合二抗，&因此蛋白Marker就能与抗原在同一张胶片上曝出信号，&阳性信号可以直接通过Western&Blot&Marker的位置来判断。&Western&Blot&Marker不经过任何化学修饰，分子量精确。
1.&取出后于室温放置融化；
2.&温和地充分混匀，取&5&l&该&Western&Blot&Marker&至上样孔中，进行&SDS-PAGE&电泳。
3.&电泳完毕后转至&PVDF&膜，与一抗二抗孵育。
4.&孵育完毕，将&Western&Blot&Marker&与抗原一起通过&ECL&曝光至胶片。
Lane&1,2,3:上样量为5、10、20&&l的Western&Blot&Marker
1.&本产品可直接使用，不需要加热。
2.&及时更换电泳缓冲液并使用新配制的凝胶，以免影响电泳结果。
N8010-5Naphthalene&acetic&acid(NAA)&&－萘乙酸5g
CColchicine&秋水仙碱250mg
I8020-13-Indole&acetic&acid(IAA)&吲哚-3-乙酸1g
I8020-53-Indole&acetic&acid(IAA)&吲哚-3-乙酸5g
I8030-1Indole-3-butyricacid(IBA)&吲哚-3-丁酸(水溶)1g
I8030-5Indole-3-butyricacid(IBA)&吲哚-4-丁酸(水溶)5g
A8060-25Abscisic&acid&(ABA)&　脱落酸25mg
AAbscisic&acid&(ABA)&　脱落酸100mg
F8080-1Forchior&fennron&氯吡苯脲&(促进植物细胞分裂)1g
X8040-5Zeatin&玉米素&(细胞分裂素，用于植物组织培养)5mg
T8110-50Trans-Zeatin&(反玉米素&植物细胞分裂素)50mg
TThidiazuron&(TDZ)&噻苯隆100mg
CChlormequat&矮壮素100g
PPaclobutrazol&多效唑100g
D-D&2,4-二氯苯氧乙酸5g
D-D&2,4-二氯苯氧乙酸10g
KKinetin&激动素250mg
A8170-16-Benzyl&Aminopurine&6-苄氨基喋呤1g
北京索莱宝科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材，合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、Thermo等。
北京索莱宝科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。 总部位于北京，并在上海、哈尔滨等全国30多个省市设有经销、代理机构。涉及的产品被中国科学院、清华、北大、复旦等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“Solarbio”品牌已经得到全国科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的名牌产品。 公司拥有一批专业研发人员，专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达5800多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和一流的售后服务。 索莱宝公司坚持与国际接轨，注重和国际先进企业的合作与交流，目前已经和Sigma、Axygen、Amresco、Corning、DBbiotech、AAT、Applichem、以及Dragon等著名企业结成紧密的合作关系，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多知名品牌合作，为广大生物科研工作者提供优质、专业的服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作，为广大科研工作者提供更加优质的产品和服务。 索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
成立时间：
企业经济性质：
私营独资企业
年营业额：
1000万-5000万
注册资金：
经营模式：
生产商,贸易商,
员工人数：
该公司其他产品
价格：￥230/支（20...
产品详情：
价格:230&元/支（20T）
品牌:solarbio
价格：￥1100/盒
产品详情：
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