蛋白标签TAG是什么高大上的东西？_解螺旋_传送门
蛋白标签TAG是什么高大上的东西？
解螺旋·麦子
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——日读一帖，解螺旋大V团队伴你科研路解螺旋出品，转载需经授权　　麦子刚进实验室的时候，经常听不懂师兄们在交流神马，比如：“你的flag砸（杂）出来了么？”　　　“头大啊~没有呢，我打算换个tag试试。”哎，跟这群人真是没法好好的玩耍了！　　本来麦子在每次都装听得懂的高冷日子里可以继续好好逍遥，突然有一天，麦子因为研究一个比较新的蛋白没有找到与之相关的抗体，只能望着很多五颜六色的抗体公司传单兴叹，无奈丧着一张大饼脸去找师兄······　　“干嘛？”　　“没抗体”　　“买”　　“没抗体”　　“几个意思”　　“没！抗！体！卖！”　　师兄把我拎起来打了两个回合锻炼了其自身体魄后，开始一本正经的跟我讲述如何用蛋白标签解决这种小问题！　　首先，蛋白标签（proteintag）是什么？　　蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。　　蛋白标签大体可分为三大类：遗传标签、in vivo标签和in vitro标签。大家最熟悉的莫过于遗传标签，即c-Myc、FLAG等：将目的基因克隆到含有标签的载体上，以便下游通过抗体或荧光检测。同时，标签的存在也方便了蛋白纯化。　　　　下面麦子就介绍几款常用的tag给大家扫扫盲：名声在外的Flag-tag:　　Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。优点：FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质；融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高；FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。2.平易近人的His6-tag：　　His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。优点：标签的分子量小，只有~0.84KD，一般不影响目标蛋白的功能；His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化；His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。3. 高大上的GST-tag:　　GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个：一个是因为它是一个高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。　　GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。　　纯化：该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化。GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。　　如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。　　检测：可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测
4. 常规化的c-Myc-tag　　C-Myc标签蛋白，是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。　　······这些当然只是一小部分，有的小伙伴会说：我还想加荧光的tag，多么的绚丽华美！那麦子下次再详解什么是拽酷炫的荧光标签吧！------------看完不过瘾？-------------不妨看看解螺旋近期的几篇文献精读系列推荐和另外一些受欢迎的文章吧！查看请在解螺旋公众号中回复文章后面括号中对应的索引号：一篇LincRNA-P21的Cell文献深度分析解读（J001）有关”卵巢癌转移微环境“的Oncogene文献精读（J002）令人拍手叫好的cell metabolism最新lncRNA相关文献分享（J003）《HEPATOLOGY》：如何从临床问题出发研究lncRNA（J004）7分的Cell Reports文章深度剖析！（J005）谷歌学术用不了怎么办？用谷粉学术！（1001）肿瘤功能基因的研究套路（1002）META分析：如何用RevMan软件绘制森林图（1004）META分析：如何用RevMan软件绘制漏斗图（1011）了解高通量测序，一篇就够了！（1012）【怎么查索引号对应的文章？】　　如需查看以上文章，请点击页面右上方或，点击“查看公众号”并关注！在解螺旋订阅号页面下方此处输入索引号即可：解螺旋课程培训通知！解螺旋SCI写作和投稿精讲培训班上海站（-）解螺旋Meta分析培训班广州站（-）解螺旋Meta分析培训班武汉站（-）开课啦！详细信息请点击本文左下角“阅读原文”或咨询：固话：021-（工作日：8:30-17:00）移
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