1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集；rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管；2.取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，1；除上清；注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到；3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL溶液P；用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀；注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的；4.向离心
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000
rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2. 取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3. 向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使
用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。质粒
4. 向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。注意：温和
地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5. 向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出
现白色絮状沉淀。12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。 注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6. 将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm
（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
7. 12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
8. 向吸附柱CP4 中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心l min，倒掉收
集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
9. 向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm
（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。
10. 向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW , 12000rpm（13400g）离心l min，倒掉收集管
中的废液。
11. 将吸附柱CP4 重新放回收集管中置于12000rpm（~13400g ）离心2 min，目的是将吸
附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4 开盖，置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12. 将吸附柱自科置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300μL洗脱
缓冲液TB ，室温放置2 min，12000rpm（~13400g ）离心l min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中．重复步骤12 。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内（可以用NaOH 将水的pH 值调到此范围）, pH 值低于7.0 会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于100μL，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存
在-20 ℃ ，以防DNA 降解。
质粒DNA 浓度及纯度检测:
得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA 条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。 OD260值为 l 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA 。 OD260 / 0D28 。比值应为 1.7 -1.9 ，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值。
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医疗样本基因组研究方案
&&&&基因疾病的相关性及基因检测等研究中涉及到的样本纷繁复杂，一般统称为医疗样本，包括组织、血液（抗凝或非抗凝）、拭子、血清/血浆、漱口水、毛囊等多种样本。这些样本的基因组DNA被广泛应用于基因检测、基因分型、基因多态性分析等研究领域。&&&&&目前国内血液样本核酸制备方法中，针对大量样本比较普遍采用的为传统的酚/氯仿等有机溶剂抽提方法，然而由于方法操作繁琐、耗时，酚、氯仿等有机溶剂对环境污染以及对操作者健康有害等方面因素，已经越来越被简单方便、安全可靠的试剂盒方法所取代。 天根公司的系列医疗样本基因组提取产品，可以从组织、新鲜或冻存全血（抗凝血）、血凝块、血细胞、白膜层、各种拭子、血清/血浆、血痕、漱口水、毛囊、微量组织等多种不同医学样本中分离纯化基因组DNA，可满足基因检测或者组织分型等多种精细的后续实验要求。 　　 　　　
★ 是一种简单稳定的方法，适宜较小体系样本的核酸提取（&1ml全血；&0.2ml白膜层细胞）★ 针对单个样品最快在30分钟内分离纯化得到基因组DNA ★ 整个操作无需酚氯仿抽提，分离纯化得到的产物纯度高，深受用户好评
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质粒小提试剂盒为什么没有提出质粒或者质粒浓度很低
质粒小提试剂盒为什么没有提出质粒或者质粒浓度很低？菌种老化建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化。涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1：500的比例进行菌种培养。二次培养细胞最好不要超过16小时。质粒丢失建议：某些质粒在多次继代培养的过程中会出现丢失的现象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。裂解不充分建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。请根据选取的试剂盒，处理相应量的细菌量。Buffer中有沉淀未溶解建议：Buffer B和Buffer C在温度较低时会出现沉淀，使用前请检查是否有沉淀生成，如有沉淀生成，请置于37℃温育片刻，待溶液澄清后使用。DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇建议：按照说明书要求加入要求量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，防止乙醇挥发。溶解液pH值不正确建议：将DNA从柱子上溶解下来的最适pH值在7.0~8.5之间，如果溶解液的pH超出此范围将会显著影响溶解效果，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10 mM Tris-HCl）进行溶解，如果用ddH2O或者其他溶液进行溶解，请确保pH在7.0~8.5之间。溶解体积及时间的选择建议：溶解体积将会影响最终的收获量，溶解体积越大，收获量越高，但是浓度将会降低。请使用试剂盒推荐的溶解体积进行溶解，以保证最好的收获量和浓度。如果需要高浓度的质粒，请减少溶解体积。另外，如果想收获高浓度高收获量的质粒，可进行二次溶解。建议：加入Elution Buffer后，室温放置2~5 min，更有利于溶解。质粒纯度不高蛋白质污染OD260/ OD280&1.8建议：选择推荐量的菌体，离心后小心吸取上清，如果上清液中混有悬浮物，可再次离心，以彻底去除蛋白质。RNA污染OD260/ OD280&2.0建议：检查配送的RNase A是否完全加入到Buffer A中，加入RNase后，Buffer A/RNase应该存放在4℃，如果存放时间过长，或者没有正确存放，请重新加入RNase。基因组DNA污染建议：加入Buffer B后，轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡涡旋，加入Buffer B的处理时间最好不要超过5 min。注：内容供参考，具体产品信息请来电或在线咨询。上海华壹生物科技有限公司Shanghai HuaYi Bio-technology Co.,Ltd
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