中国生化药物杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆ；作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：；赵雪娇，姜山，何娟，孙美娜，李晖，ZHAOXue；哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室,黑龙江；ChineseJournalofBiochemi；参考文献(12条)；1.TerlauH;OliveraBMConus；5.AzamL;MclntoshJMAlp
中国生化药物杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ２０１２年第３３卷第３期２１３?论著－仅一芋螺毒素特异性结合受体．神经型烟碱乙酰胆碱受体的同源模建及功能预测赵雪娇，姜山，何娟，孙美娜，李晖（哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室，黑龙江哈尔滨１５００８６）摘要：目的探讨神经型烟碱乙酰胆碱受体能被其竞争性拮抗剂ｎ－芋螺毒素选择性阻断的机理。方法采用同源模建的方法构建神经型烟碱乙酰胆碱受体ａ一７亚型的三维空间结构．并利用分子对接的方法与已知空问构像的ａ一芋螺毒素对接。结果已构建的神经型烟碱乙酰胆碱受体ａ－７亚型结构合理。并与已知空阅构像的ａ．芋螺毒素对接成功。结论持统的烟碱型乙酰胆碱受体桔抗荆缺乏专一性．而靶向神经元神经型烟碱乙酰胆碱受体的口．芋螺毒素种美多，特异性强，与不同亚单位组成的受体亲和力不同，应用潜力很大。关毽词：神经型烟碱乙酰胆碱受体；ａ一芋螺毒素；同源模建；分子对接中图分类号：Ｒ９６２文献标识码：Ａ文章编号：１００５－１６７８ｌ２０１２）０３－０２１３－０４ＮｅｕｒｏｎａｌｎｉｃｏｎｔｉｎｉｃａｃｅｔｙＩｃｈｏｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｈｏｍｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆａ－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｂｉｎｄｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒＺＨＡＯＸｕｅ－ｊｉａｏ，ＪＩＡＮＧＳｈａｎ，ＨＥＪｕａｎ，ＳＵＮＭｅｉ―Ｈａ，ＬＩＨｕｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００８６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＰｕｒｐｏｓｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｂｌｏｃｋｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｗｈｏｓｅｎｅｕｒｏｎａｌｎｉｃｏ－ｔｉｎｉｃａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ｎＡＣｈＲｓ）ｃａｎｂｅｔｈｅｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｄ―ｃｏｎｏｔｏｘｉｎＰｎｌＢｒｕｓｈｅｒ．ｉｓＭｅｔｈｏｄｓＨｏｍｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｒｅａｄｏｐｔｅｄｔｏｂｕｉｌｄｎＡＣｈＲｓｄ一７ｓｕｂｔｙｐｅｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅ?ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｔｈｅｋｎｏｗｎｓｐａｔｉａｌｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａ―ｅｏｎｏｔｏｘｉｎｄｏｃｋｉｎｇＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂｕｉｌｄｉｎｇｔｈｅｋｎｏｗｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｒｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｕｓｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｔ－７ｓｕｂｔｙｐｅｏｆｎＡＣｈＲｓｉｓｒａｔｉｏｎａｌ，ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄｉｔｈａｓｂｅｅｎｄｏｃｋｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｆ仅－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎｎＡＣｈＲｓｌａｃｋｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｅｎｔｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆａ－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎｓｔａｒｇｅｔｉｎｇｎＡＣｈＲｓｗｈｉｃｈｈａｖｅｄｉｆｆｅｒ－ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓａｎｄｓｐｅｅｉｆｉｃｉｔｉｅｓ，ａｎｄｔｈｅｙｃａｌｌｂｅａｐｐｌｉｅｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ．Ｔｈｕｓ，ｗｅｈｏｐｅｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｍｏ?ｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇｉｓｕｓｅｄｗｈｅｒｅ俚?ｃｏｎｔｏｘｉｎｃｏｕｌｄｂｅｂｅｔｔｅｒｆｏｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｓｕｂｔｙｐｅｓｏｆｎＡＣｈＲｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｎｅｗｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｆｏｒｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎｅｕｒｏｎａｌｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｉｎｇ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ｎＡＣｈＲｓ）；ｑ－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎ；ｈｏｍｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌ－烟碱乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲｓ）是含有多成员的超家族配体门控离子通道，主要介导快速兴奋性神经传导，基本上可分为两类…：神经型乙酰胆碱受体收稿日期：２０１１．１０．１４基金项目：黑龙江省卫生厅科技项目基金（２００６－２７２）；国家自然科学基金面上项目（３０７７１８６３）；国家自然科学基金面上项目（８１１７２６１６）（ｎＡＣｈＲｓ）和肌肉型乙酰胆碱受体。ｎＡＣｈＲｓ是药物作用的靶点之一，与人类重大疾病和病理现象有密切的关系，如ｎＡＣｈＲｓ突变引起的先天性免疫无力症和夜间前叶癫痫；由ｎＡＣｈＲｓ遗传缺陷而引起的早发痴呆；与ｎＡＣｈＲｓ损害有关的阿尔兹海默病，即老年痴呆症和帕金森症旧１。此外，肌肉型或神经元型的ｎＡＣｈＲｓ也是能被最小的神经肽类毒素仪－芋螺毒素（ｄ―ＣＴＸ，ＰｎｌＢ）特异性抑制的受体¨１，并且该毒索还能进一步区分不同的神经元型ｎＡＣｈＲｓ亚型，作者简介：赵雪娇，女。硕ｔ研究生；李晖，女，通信作者，教授，博士研究生导师．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｈｕｉ＠ｅｍ?．ｈｆｂｍｕ．副ｕ．ｅｌｌ。万方数据２１４中国牛化药物杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｅｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｅｅｕｔｉｅｓ２０１２年第３３卷第３期鉴定ｎＡＣｈＲｓ亚型功能。ｎＡＣｈＲｓⅡ－７亚型是ｎＡＣｈＲｓ常见亚型，ａ－ＣＴＸ能特异性的阻滞０ｃ＿７ｎＡＣｈＲ’４１，但在三维窄间结构上并没有得到证实。因此利用蛋白结构同源模建技术，采用ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＳｔｕｄｉｏ１．１序列来源和设备本研究中同源建模的模板仪．ＣＴＸ特异性抑制的人ｎＡＣｈＲｓ的ａ．７亚型副由５３１个氨基酸组成，从ＢｒｏｏｋｈｅａｖｅｎＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａｂａｎｋ（ＰＤＢ）［ｓｊ数据库中ｖ２．５分子模建系统模建获得其一级结构序列（图１）。所有计算利用Ｄｉｓ．ｃｏｎｅｒｙｎＡＣｈＲｓ的三维结构，有助于弄清０【?ＣＴＸ选择性阻断ＡＣｈＲｓ的分子机制，阐明其镇痛作用的生物学基础。１材料与方法１６１１２１Ｓｔｕｄｉｏｖ２．５（Ａｃｃｅｌｒｙｓ公司。美国）分子软件包以及网站：ｈｔｔｐ：／／ｄｉｃｓｏｆｔｌ．ｐｈｙｓｉｃｓ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／ｒｐ／。ｍｚｃｓｐｑｇ＇ｗｔｌａｌａａ５１ｌｈ口ｋａ＇ｃａｓｐｐｓｔｐｐｗｄｐｑｈｉｌ：ｇａｓｅｌｖｋｎｙｎＤｌｅｓｅｙｐｇｖｋｔｖｒｒｐｖａｎｄｓｑｐｌｔｖｙｆｓｌｓｌｌｑｉｍｄｖｄｅｋｎｑｖｆｄａｔｆｈｔｎｖｌｍｑｅａｄｉｓｇｙｌｖｌｉｓａｌａｌｌｖｉｉｖｇｌｓｖｖｖｔｆｐｄｇｑｉｗｋ＇ｐｄｉｌｌｙｎｓａｄｅｒｓｙｇｇｗｓｌｄｌｑｙｙｇｌｎｌｌｉｐｃｌｉａｑｙｆａｓｔｍｖｒｐａｐｇｐｖｓｌｉｔｔｎｌｗｌｑｍｓｖｎｓｓｇｈｃｑｙｌｐｎｇｅｗｄｌｖｇｉｆｌｌｐａｄｓｇｅｋｖｉｖｌｑｙｈｈｈｄｓａｖａｐｐＤａｓｎｄｌａｋｉｌｅｅｖｒｎｆｖｅａｖｓｋｄｆｑｑｅｆｑｒｋｌｙｋｗｔｄｈｙｌｑｗｎｖｐｐｇｉｆｌ【ｓｓｃｙｐｇｋｒ５ｅｒｆｙ芒ｉｓｌｇｉｔｖｌｌｓｐｄｇｇｋｍｐｋｗｔｇｎｌｌｙｉｇｆｒｇｙｉａｎｚＺｒｃｑｄａ１８１２４１３０１３６１４２１ｉｄｖｒｗｆｐｆｄｖｑｈｃｋｌｋｆｇｓｗｃｃｋｅｐｙｐｄｖｔｉｔｖｆｍｌｌｖａｅｒＶｉｌｌｎｗｃａｗｆｔｖｔｍｍｒｒｔｌｉｍｐａｔｓｄｓｖｐｆｌｒｍｋｒｐｇｅｄｋ＇ｖｒｐａｃｑｈｋｑｒｚｃｓｌａｓｖｅｍｃｓｐｃｈｄｅｈｌｌｌｍａｆｓｖｆｔ；ｉｉｈｇｇｑＰｐｅｇｄｐｌｄｇｖｈｃｖｐｃｐｄｓｇｖｖｃｇｒｍａ４８１ｅｓｅａｖｃｓｅｗＥｆａａｃｗｄｚｌｃＦｉｇ．Ｉｃｃｉｇｉｌｚ昭ａｐ图１人神经型烟碱乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲｓ）的ａ－７亚型序列ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｎＡＣｈＲｓⅡ－７１．２三维结构模型构建１．２．１表１Ｔａｂ．１Ｔｈｅｓｅｔ溶剂化过程相关参数设置ｏｆｐａｒａｍｅｔｅｒｉｎｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｓｏｌｖａｔｉｏｎ序列联配以该序列为模板，用ＢｌａｓｔＰ程序在ＰＤＢ库中搜索其同源蛋白。选择同源性高并且蛋白类型已知的同源蛋白作为模板门。。用同源蛋白叠加，确定ＳＣＲ区和ＬＯＯＰ区。利用Ａｃｅｅｌｒｙｓ公司ＤｉｓｃｏｎｅｒｙＳｔｕｄｉｏ参数的名称溶剂化模型精确的周期从界限处的最小距离细胞形态值（Ｖａｌｕｅ）斜ｖ２．５分子软件包¨’进行序列对比，增加反离子盐浓度随机值阳离子型阴离子型寻找该ｎＡＣｈＲｓ的ａ－７亚型序列最相似的部分。在“ＶａｌｕｅＣｕｔＯｆｆ’’中看相似度，进行评分，根据该结果进行结构校准得到序列图及差异大小的均方图，再由该均方图进行空间对比。１．２．２建立模型ｃｏｎｅｒｙ飘枷蓑真堇一Ⅳ盯根据上面序列联配结果用Ｄｉｓ－Ｈｏｍｏｌｏｇｙ中进行能量优化，以消除结构中不合理的碰撞和张力。应用Ｃｈａｒｍｍ力场，能量优化采用逐步放开的策略，先优化所有的侧链，而后是整个蛋白。优化后的结构模型用Ｐｒｏｆｉｌｅ－３Ｄ和Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ图来验证其合理性。为限制分子的稳定性，继续进行能量最小化，在Ｃｈａｒｍｍ力场下分别进行６０００步最陡下降法优化和ｌ０００步共轭梯度法优化。１．３分子对接分子对接采用Ａｃｃｅｌｒｙｓ公司（美国）ＤｉｓｃｏｎｅｒｙＳｔｕｄｉｏＳｔｕｄｉｏｖ２．５的同源模建（ＢｕｉｌｄＭｏｄｅｌｓ）中的Ｍｏｄｅｌｅｒ模块构建蛋白的结构模型，在模型构建中采用中等优化水平。接着考察三维结构与氨基酸序列兼容性的Ｐｒｏｆｉｌｅ－３Ｄ一１和Ｒａｍａｃｈａｎｄ－ｒａｎ图来验证其合理性。并对得到的结构模型进行初步评价打分”－。ｌ。２．３能鼍优化及合理性评价将得到的同源结构模型进行能量优化。“１，以消除结构中的不合理的碰撞和张力。首先进行溶剂化（Ｓｏｌｖａｔｉｏｎ），溶剂化作用是溶剂分子通过它们与离子的相互作用，而累积在离子周围的过程。该过程形成离子与溶剂分子的络合物，并放出大量的热。溶剂化作用改变了溶剂和离子的结构。因为蛋白分子大多数是极性分子，为了使它不受外界电场的影响，要在分子中显正电的地方加上负电，显负电的地方加上正电，该溶剂化过程计算相关参数设置如表ｌ。将经过溶剂化后得到的结构模型在ＳＹＢＹＬ６．９ｖ２．５分子软件包，以蛋白质原配体分子所在的位置作为结合位点，半径为０，５ｆｉｎ内的作为结合位点，即半径为０．５ｎｍ内的所有子结构作为结合位点的活性区部分。配体分子在受体活性区中的可能构象模式采用Ｌｉｇａｎｄｆｉｔ方法¨引进行采集。然后运用系列命令如何自由旋转单键数目、半自由环上的单键数目等定义小分子的柔性部位，设定对接参数在Ｌｉｇａｎｄｆｉｔ模块中完成对接，根据配体一受体相互作用大小和几何构型匹配程度确定相互作用温的候选万方数据ｐ国生化药物杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ２０１２年第３３卷第３期２１５化合物。当配体产生一个新的构象，就进行配体和受体之问的分子对接：在Ｌｉｇａｎｄｆｉｔ计算中，最大保存构象设为１００，其他参数为Ｌｉｇａｎｄｆｉｔ给定的缺省值。蛋白质的结构在对接时保持刚性，因为每个配体中可旋转单键数甘的不同，所以每个配体得到的结合构象从２―９９个不等。由于采＿ｆ｝ｊ的是柔性对接，因此能够较好地考察对接过程中配体与受体的构象变化。由于打分函数是对能量、几何形状、化学环境综合评价，因此采用打分函数来评价对接结果。以原配体的打分函数为阈值，得出ａ―ＣＴＸ与ｎＡＣｈＲｓ作用较强的活性区。从ＮＣＢＩ中获得Ｏｔ．ＣＴＸ的三维空间结构。２结２．１系呈电中性。图３Ｆｉｇ．３ｎＡＣｈＲｓ的Ｏｔ一７亚型经同源模建后溶剂化得到的结果ＴｈｅｓｏｌｖａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｎＡＣｈＲｓａ一７ａｆｔｅｒｈｏｍｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌｉｎｇ２．４２．４．１ｎＡＣｈＲｓ的ｃｔ－７亚型结构模型ｎＡＣｈＲｓ的Ｏｔ一７亚型结构总体特征由Ｒａ－ｍａｃｈａｎｄｒａｎｐｏｈＨｅｌｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ分析得到ｄ．螺旋区（Ａｌｐｈａ果Ｒｅｇｉｏｎ）有７１个氨基酸残基，约占优化整体Ｓｈｅｅｔ序列联配及同源模建结果本研究序列联配结果表明人ｎＡＣｈＲｓ的全长序的４７．９７％，３－折叠区（ＢｅｔａＯｆｆ”中看相似度，Ｒｅｇｉｏｎ）有７５个氨基酸残基约占５０．６８％，３一１０个螺旋区有２个残基，约占３．９６％。非甘氨酸有８个残基，约占２．６４％，甘氨酸残基４个，约占１．３２％。２．４．２能量优化后的结果小化的结果，由Ｄｉｓｃｏｎｅｒｙ在图２中得到能量最ｖ２．５软件算得，在列相似程度很高。在“ＶａｌｕｅＣｕｔ分数＝０（若＜１０，说明相似程度高）根据该结果进行结构校准得到五条序列图及差异大小的均方图，再由该均方图进行空间对比。通过序列联配的结果可知所模建的ｎＡＣｈＲｓ的ａ－７哑型的结构在理论上是合理的，２．２模建得到的结构模型示意图用考察三维结构与氨基酸序列兼容性的Ｒａｍ．ａｃｈａｎｄｒａｎ图和Ｐｒｏｆｉｌｅ一３Ｄ对其进行评价。分析Ｒａ―ｍａｃｈａｎｄｒａｎ｜冬ｌ发现最佳区域的残基占９５％以Ｅ，落在不允许Ⅸ仅０．７％，说明了蛋白质主链结构合理二该蛋白质Ｐｒｏｆｉｌｅ．３Ｉ）对得剑的结构模型进行初步评价打分，评价结果没有不兼容残基（所有兼容分值＞０）最高分为１３８．８０５，大于预期值７６．７８０；最低分为６２．４６２，低于该预期值．说明得到的三维结构与氨基酸序列兼容性ＩＥ常好。以上结果均说明模建的受体蛋白结构模型合理。模建得到的结构模型见图２。ＳｔｕｄｉｏＣｈａｒｍｍ力场下分别进行６０００步最陡下降法（Ｓｔｅｅ―ｐｅｓｔＤｅｓｃｅｎｔ）优化和１０００步共轭梯度法优化后得到最陡下降法得到的模型（图４）和共轭梯度法（ＣｏｎｊｕｇａｔｅＧｒａｄｉｅｎｔ）的模型（图５）。最陡下降法得到ｎＡＣｈＲｓ构型最初势能为３６１７８７９．５７８ｋｃａｌ／ｍｏｌ，模建后势能变为一５３６９５０．１３。共轭梯度法最初的势能是一５３６９５０．１０２ｋｃａｌ／ｍｏｌ，模建后潜在自由能变为一５４９７０８．８７２。通过能量最小化的优化后构象的变化差异较小，势能变成负，并且较之前的最初势能小，说明能量优化后释放能量，能量降低＝图４经最陡下降法得到的同源模建的模型Ｆｉｇ．４ＴｈｅｍｏｄｅｌｄｅｓｅｒｖｅｄｆｒｏｍＳｔｅｅｐｅｓｔＤｅｓｃｅｎｔ图２Ｆｉｇ．２ｎＡＣｈＲｓ的ｄ－７亚型同源模建结果ＴｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆｎＡＣｈＲｓａ?７２．３能量优化及合理性评价结果将２．２项得到的同源模型进行能量优化，溶剂化后得到图３所示模建结果，即将所构建的模型置于八面体盒子中心，体系中加入水分子和Ｎａ＋使体图５经共轭梯度法得到的同源模建的模型Ｆｉｇ．５ＴｈｅｍｏｄｅｌｄｅｓｅｒｖｅｄｆｒｏｍＣｏｎｊｕｇａｔｅＧｒａｄｉｅｎｔ万方数据２１６巾四生化药物杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ２０１２年第３３卷第３期２．５分子对接结果为了证实我们模建的ｎＡＣｈＲｓＣｔ．７亚型结构的合理性以及初步研究ｎＡＣｈＲｓ与０【一ＣＴＸ结合情况，通过Ｓｕｒｆｌｅｘ－ｄｏｃｋｉｎｇ模块进行分子对接后，Ｃｓｏｒｃｅ模块会对每一个配体的对接结果进行打分，包括Ｄ―ｓｃｏｒｅ、ＰＭＦ―ｓｃｏｒｅ、Ｇ―ｓｃｏｒｅ、Ｃｈｅｍｓｃｏｒｅ这四个函数。打分函数基于受体一配体复合物的结合亲和力，也会考虑疏水性、极性、排斥、溶剂化作用。同时作不同初始结构的多次对接，然后进行结构平均。我们得到了ｎＡＣｈＲｓ与ａ―ＣＴＸ的复合物结构（图６）。对接计算得到的结合自由能ＣＧ为一２８．９９８ｋＪ／ｔｏｏｌ，比ＨＡｌ４―１的一２０．６９１ｋＪ／ｍｏｌ低，和已知前者亲和力（Ｉｃ５０为０．２３ｉｘｍｏｌ／Ｉ．）比后者（ＩＣ，。为９ｐｍｏｌ／Ｌ）高使用Ｐｒｏｃｈｅｃｋ程序评价模型的结构的市体化学参数，此程序凭经验比较所给蛋白质结构与最合理的蛋白质结构之间市体化学的差异．通过生成的Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ图来表示。验证结果表明所构建的ｎＡＣｈＲｓ的０【．７亚型与底物０【一ＣＴＸ结合后具有很强的亲和力。可以看出ｄ－ＣＴＸ因对ｎＡＣｈＲｓ具有较好的选择性而被作为区分ｎＡＣｈＲｓ亚型的工具。０【一ＣＴＸ对ｎＡＣｈＲｓ强亲和力与高选择性，决定了它具有明显的医药应用潜力，实际上已有几种芋螺毒素作为镇痛药物进入了临床研究阶段。致谢：感谢哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室李晖教授、李凤兰和董钦老师对该研究项目的支持。参考文献［１］ＴｅｒｌａｕＨ，ＯｌｉｖｅｒａＢＭ．Ｃｏｎｕｓｖｅｎｏｍｓ：ａ的实验结果吻合。ｒｉｃｈｓｏｕｒｃｅｏｆｎｏｖｅｌｉｏｎｃｈａｎｎｅｌ?ｔａｒｇｅｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ［ＪＪ．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ．２００４．８４（１）：４１－６８．ＭＮｅｕｒｏｎａｌｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｅｔｙｌｅｈｏｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓＥｘｐ［２］ＬｌｏｙｄａｓＧＫ．Ｗｉｌｌｉａｍｓｄｒｕｇｎｏｖｅｌｔａｒｇｅｔｓ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，２０００，２９２（２）：４６Ｉ＿４６７．［３］ＷｅｌｌｓＧＢ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｆｌｓｗｅｎａｎｄｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｑｕｅｓｔｉｏｎｓａｂｏｕｔｈｏｗｎｉｃｏｔｉｎｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒｓｗｏｒｋ［Ｊ］ＦｒｏｎｔＢｉｏｓｃｉ．２００８，１３：５４７９－５５１０．Ｅ．ｅｔａ１．Ｓｉｎｇｌｅ－ｒｅｓｉｄｕｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｕｂｔｙｐｅｉｎ图６ｎＡＣｈＲｓｑ?７旺基和与ｎ?ＣＴＸ（ＰＩｎＢ）结合，Ｏｔ?ＣＴＸ用［４］ＬｕｏＳ，ＮｇｕｙｅｎＴＡ．ＣａｒｔｉｅｒＧＰｎｌＡ黄色标记，ｎＡＣｈＲｓ分别用灰色和蓝色标记，图中标有脯氨酸（Ｐｒｏ）、酪氨酸（Ｔｙｒ）位点Ｆ＿｜ｇ．６Ｔｈｅａｌｐｈａ”ｏｎｏｌｎｘｉｎｓｗｉｈ?ｈＰ＿ｉｌｓｎＡＣｈＲｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ？＇．１９９９．３８《４４）：１４５４２?１４５４８．ｃｏｎｊｕｅｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｎＡＣｈＲｓＯｔ－７ａｎｄａ－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈｙｏｕ：５ｊＡｚａｍ１．，ＭｅＩｎｔ，ｓｈｏｆＪＭ－、ｌｌ，ｈａ”ｏｎｏｈ）ｘｉｔｌｓｍａｓｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｂｅｓＰｈａｒｍａｃｏｌＭ?ｏｌｉｎｉｆｌａ（．ｅｔｙｈｈｏｌｉｎｅ（ＰＩｎＢ），ｄ－ｃｏｎｏｔｏｘｉｎ（ＰＩｎＢ）ｉｓｎＡＣｈＲｓＯｔ一７ｉｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈｇｒｅｙｙｅｌｌｏｗｃａｌｌａｎｄ３０（６）：７７Ｉ一７８３．ｓｅｅｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＳｉｎ，２００９，ａｎｄｂｌｕｅ（Ａｎｄａｌｓｏ１６］ＲｕｔｇｅｒｓＡＲｅｓｏｕｒｅｅｆｏｒｓｔｕｄｙｉｎｇｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕ］ｅｓ［ＤＢ／ｔｈｅｓｉｔｅｓｏｆＰｒｏａｎｄＴｙｒｉｎｔｈｅｇｒａｐｈ）ＯＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｈ．２０１０－３－２３．３讨论：７］ＬｉｐｍａｎＤＪ．ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴａｎｄＰＳＩ?ＢＬＡＳＴ：ａｎｅｗｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆ本研究通过同源模建的方法构建了ａ－ＣＴＸ特异性抑制的人神经型ｎＡＣｈＲｓ的Ｏｔ．７亚型。构建ｎＡＣｈＲｓ的方法可以是先模建受体部分，将其能量优化，然后将已知的Ｏｔ―ＣＴＸ的空间构象对接到ｎＡＣｈＲｓ相应部位，最终用能量优化的方法及分子动力学模拟，对能量优化结果进行进一步优化构建较合理的结构。而本研究中由于模板中具有０【一ＣＴＸ的对应结构，因此直接将人ｎＡＣｈＲｓ的０【．７亚型模建之后与已知的０【．ＣＴＸ结合，这样更有利于复合物模型中模建的两部分接触面上残基符合空间约束条件以及具有合理的立体化学几何。本研究还对对接后的模型进行了局部能量优化，这在一定程度Ｅ使结合更加合理。１８ｊｐｒｏｔｅｉｎｄａｔａｂａｓｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒａｍｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，１９９７，２５（１７）：３３８９?３４０２．Ｍａｘｅｎｆ．｜ｅＣ，ＭｉｃｈａｅｌＡＰ．ＭｉｃｈａｅｌＡ，ｅｔａ１．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙｓｔｕｄｉｏ：ＬｉｆｅＳｃｉ―Ｍｏｄｅｌｉｎｇ＆Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ［ＣＰ／ＯＬ］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ，ａｃｃｅｌｒｙｓｃｏｒｎ．２０１０－０３－０ｌ［９］ＩｎｓｉｇｈｔｌＩ２０００ｏｓｅｒｇｕｉｄｅ！ｃＰ］ＳａｎＤｉｅｇｏ：ＭｏｌｅｃｕａｌｒＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｌｎｃ．，［１０］ＭｏｒｒｉｓｕｓｉｎｇｅｎｅｒｇｙａＧＭ．ＧｏｏｄｓｅｌｌＤＳ．ＨａｌｌｄａｙＲＳ，ｅｔａ１．ＡｕｔｏｍａｔｅｄｄｏｃｋｉｎｇＩａｍａｒｃｋｉａｎｇｅｎｅｔｉｃａｌｇｏｒｉｔｈｍａｎｄｅｍｐｉｒｉｃａｌｂｉｎｄｉｎｇｆｒｅｅｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｏｍｐ３ＵｓｅｒＣｈｅｍ，１９９８，１９：１６３９－１６６２ＤｉｅｇｏＣＡ：ＭＳＩ［１１］Ｄｉｓｃｏｖｅｒ１９９９．Ｇｕｉｄｅ［ＣＰ］．ＳａｎＡｃｃｅｌｅｒｙｓＩｎｓ．．［１２］ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＳｔｕｄｉｏ，ｖｅｒｓｉｏｎ２５［ｏＩ。］．ＡｃｃｅｌｒｙｓＩｎｃ．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｃ―ｃｅｌｒｙｓ．ｃｏｒｎ．万方数据α-芋螺毒素特异性结合受体-神经型烟碱乙酰胆碱受体的同源模建及功能预测作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：赵雪娇， 姜山， 何娟， 孙美娜， 李晖， ZHAO Xue-jiao， JIANG Shan， HE Juan，SUN Mei-na， LI Hui哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室,黑龙江哈尔滨,150086中国生化药物杂志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics) 参考文献(12条) 1.Terlau H;Olivera B M Conus venoms:a rich source of novel ion channel-targeted peptides .Lloyd G K;Williams M Neuronal nicotinic acetylcholine receptors as novel drug targets .Wells G B Structural answers and persistent questions about how nicotinic receptors work 20084.Luo S;Nguyen T A;Cartier G E Single-residue alteration in alpha-conotoxin PnIA switches its nAChRsubtype selectivity 1999(44)5.Azam L;Mclntosh J M Alpha-conotoxins as pharmacological probes of nicotinic acetylcholinereceptors[期刊论文]-Acta Pharmacologica Sinica 2009(06)6.Rutgers A Resource for studying biological macromolecules 20107.Lipman D J Gapped BLAST and PSI-BLAST:a new generation of protein database search programs1997(17)8.Max C;Michael A P;Michael A Discovery studio:Life Science Modeling & Simulation 20109.Insight Ⅱ user guide 200010.Morris G M;Good sell D S;Hallday R S Automated docking using a Ⅰ amarckian genetic algorithm andempirical binding free energy function 199811.Discover 3 User Guide 199912.Discovery Studio,version 2.5
本文链接：http://d..cn/Periodical_zgshywzz.aspx三亿文库包含各类专业文献、各类资格考试、高等教育、幼儿教育、小学教育、行业资料、中学教育、文学作品欣赏、专业论文、α-芋螺毒素特异性结合受体-神经型烟碱乙酰胆碱受体的同源模建及功能预测85等内容。　
　琥珀胆碱 C、烟碱 2、肾上腺素能神经合成与释放的...乙酰胆碱作用的消失主要依赖于 A、摄取 1 C、胆碱...激动突触前膜α 2 受体可引起 A、递质释放抑制 B... 　神经系统的功能 第一节 神经系统功能活动的基本原理...受体与递质结合的亲和力、受体 的数量均可发生改变,...分类 毒蕈碱受体(M 受体) 烟碱受体(N 受体) 分布... 　的兴奋性神经递质, 通过结合特异受体, 在神经细胞...2 乙酰胆碱受体与疾病 神经肌肉接头处的烟碱型受体...Ca2+离子通道超家族成员之一,为同源 性或非同源性... 　同理,剥夺胆碱能传递乙酰胆碱受体或胆碱能神经纤维去神经支配遗传性就会严重损害实验动物的学习和记忆能力。然而针对α4β2和α7烟碱型乙酰胆碱受体化合物的临床试验... 　神经节细胞的保护者:alpha7 烟碱型乙酰胆碱受体? ...视网膜神经节细胞含有α 7 烟碱受体,是脊椎动物视 ...2015年11月临床医学基础知识重点：临床内科学用药之多巴胺
来源:91考试网
作者:www.91exam.org
^91考试网卫生人才网为考生提供临床内科学知识里面关于心血管系统用药的知识，其中多巴胺是临床医学基础知识考查的重点。这部分需要掌握的几个核心知识点是：
一、多巴胺在药理学中的地位
学习临床内科学的用药，如果单纯靠背诵，是不能达到良好的复习效果的，因为药物有自己的分类，同种类别的药物基本都有共性，但不同药物之间又有细微的用药差别，所以复习内科学的药物必须先从药理学开始。
多巴胺是一个在循环系统和泌尿系统都有非常重要作用的药物，在药理学中它归属于肾上腺素能神经受体激动药，肾上腺素能神经受体激动药的共同特点是：收缩血管升高血压(α受体)，兴奋心脏、舒张气道平滑肌扩张气管、扩张冠状动脉、分解脂肪(β受体)。多巴胺、肾上腺素、麻黄碱均属于此类药物 ，其中肾上腺素效果最强，多巴胺次之，麻黄碱效果最弱。多巴胺除了上述作用外，还能够特异性激动多巴胺受体，因此能够扩张血管尤其是肾脏血管，增加肾血流量改善肾脏功能。
【^91考试网专家指导】弄清楚药理中多巴胺的分类后，才能很好用药。多巴胺属于肾上腺素受体激动剂，具有肾上腺素能神经受体激动药的一般作用，同时能激动多巴胺受体增加血流量改善肾脏功能。
二、多巴胺在临床运用中的特点
多巴胺常作为肾上腺素的类似药，但作用稍弱。并且能够改善肾脏功能，特别是用于心血管疾病伴肾脏功能减退的患者。但在多巴胺的运用中，大家尤其要注意的是，多巴胺在不同给药剂量时，产生的效果是不同的：
小剂量(1～3ug/kg/min)兴奋多巴胺受体，使肾动脉、肠系膜动脉和冠状动脉扩张，对肾动脉的扩张作用可以产生一定的利尿作用。
中剂量(3～6ug/kg/min)给药兴奋β1受体为主，具有增强心肌收缩力作用，增加心输出量。
大剂量(大于6ug/kg/min)则通过兴奋外周的α受体使血管收缩，外周阻力增加，血压升高，发挥维持动脉血压的作用。
【^91考试网专家指导】不同给药剂量的多巴胺产生的作用不同，这是临床用药和考试中特别需要注意。大家一定要在熟悉药理分类的基础上，将不同的用药方式记忆清楚。Better to do well than to say well. 说得好不如做得好. All rivers run into the sea. 条条江河归大海.
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