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考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量的优缺点?环境生物学方面的实验!环境生物学实验，考马斯亮蓝法测定重金属对植物体可溶性蛋白质含量的影响！
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Bradford法的突出优点是：（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比...
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考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点
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蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定
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【求助】关于使用考马斯亮蓝法测定血红蛋白含量的问题！
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这个帖子发布于9年零28天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
想测定小鼠血中的血红蛋白含量，使用考马斯亮蓝法。但是不知道怎样处理血液？拜托各位大虾了！万分感谢！
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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量定
考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量定
来源：互联网
点击次数：4085
学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
二、材料、主要
1．实验材料
新鲜绿豆芽
（1）分析天平、台式天平
（2）刻度吸管
（3）具塞试管、试管架
（5）离心机、离心管
（6）烧杯、量筒
（7）微量取样器
（8）分光光度计
（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。
考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。
（4）磷酸（85％）
四、操作步骤
1．标准曲线制作
（1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。
表1 低浓度标准曲线制作
（2）0~1 000μg／mL 标准曲线的制作：另取6 支10mL 具塞试管，按表2 取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为0~1 000μg／mL 的标准曲线。
表2 高浓度标准曲线制作
2．样品提取液中蛋白质浓度的测定
（1）待测样品制备：称取新鲜绿豆芽下胚轴2g 放入研钵中，加2mL 蒸馏水研磨成匀浆，转移到
中，再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一
中，放置0.5~1h 以充分提取，然后在4 000r/min 离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL 容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。
（2）测定：另取2 支10mL 具塞
，按下表取样。吸取提取液0.1mL（做一重复），放入具塞刻度
中，加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白试剂，充分混合，放置2min 后用1cm 光径比色杯在595nm 下比色，记录光密度OD
nm，并通过标准曲线查得待测样品提取液中蛋白质的含量X（μg）。以标准曲线1 号试管做空白。
五、结果计算
式中：X 为在标准曲线上查得的蛋白质含量（μg）。
1．Bradford 法由于染色方法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。
2．有些阳离子，如K
、乙醇等物质不干扰测定，但大量的去污剂如TritonX-100、
等严重干扰测定。
3．蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合的反应十分迅速，在2min 左右反应达到平衡；其
结合物在室温下1h 内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。
七、思考题
1．制作标准曲线及测定样品时，为什么要将各
中溶液纵向倒转混合？
中溶液纵向倒转混合目的是使反应充分，并且使整个反应液均一，否则在比色测定时，结果会有较大偏差，使标准曲线的制作不标准，后续的测定结果就不可靠。
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DXY All Rights Reserved.三种方法测定绵羊血红蛋白含量的比较试验
测定血红蛋白含量的方法很多 ,有沙利氏法、氰化法、叠氮法、全血铁测定法等 ,最常用的是沙利氏法。然而 ,在长期教学过程中 ,我们发现采用传统的沙利氏比色法测定动物的血红蛋白含量很低 ,但临床检查的动物却不存在贫血的症状。为此 ,我们采用血红蛋白仪法、氰化高铁血红蛋白法和沙利氏法对同一份绵羊血样的血红蛋白含量进行了测定和比较试验。1　材料和方法1
1　材料ＸＦ 1型血红蛋白仪 ,南京半导体器件总厂生产 ;72 1分光光度计 ,上海第三分析仪器厂生产 ;沙利氏比色计 ,江苏省苏州市医疗器械厂生产。氰化高铁血红蛋白标准和氰化高铁血红蛋白稀释液 ,上海伊华临床医学科技公司生产 ,批号为 970 50 6。试验动物 ,湟源县波航乡农户饲养的绵羊 30只。1
2　测定方法从绵羊颈静脉采取抗凝血 5ｍＬ ,对每份血样都用氰化高铁血红蛋白法、血红蛋白仪法及传统的沙利氏比色法测定其结果。1
3　数据处理将所测定结果分别统计 ,用Ｆ检验比较各...&
(本文共1页)
权威出处：
测定血红蛋白含量的方法很多 ,有沙利氏法、氰化法、叠氮法、全血铁测定法等 ,最常用的是沙利氏法。然而 ,在长期教学过程中 ,我们发现采用传统的沙利氏比色法测定动物的血红蛋白含量很低 ,但临床检查动物却不存在贫血的症状。为此 ,我们对同一份绵羊血样采用血红蛋白仪法、氰化高铁血红蛋白法和传统的沙利氏法测定血红蛋白含量的结果比较试验。1　材料和方法1.1　材　料ＸＦ - 1型血红蛋白仪 ,南京半导体器件总厂生产 ;72 1分光光度计 ,上海第三分析仪器厂生产 ;沙利氏比色计 ,江苏省苏州市医疗器械厂生产。氰化高铁血红蛋白标准和氰化高铁血红蛋白稀释液 ,上海伊华临床医学科技公司生产 ,批号为 970 5 0 6。实验动物为湟源县波航乡农户饲养的绵羊 30只。1.2　测定方法从绵羊颈静脉采取抗凝血 5ｍｌ,对每份血样都用氰化高铁血红蛋白法、血红蛋白仪法及传统的沙利氏比色法测定其结果。1.3　数据处理将所测定结果分别统计 ,以均数 (Ｘ)、...&
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测定血红蛋白含量的方法很多 ,有沙利氏法、氰化法、叠氮法、全血铁测定法等 ,最常用的是沙利氏法。然而 ,在长期教学过程中 ,我们发现采用传统的沙利氏比色法测定动物的血红蛋白含量都很低 ,但临床检查动物却不存在贫血的症状。为此 ,我们对同一份绵羊血样采用血红蛋白仪法、氰化高铁血红蛋白法和传统的沙利氏法测定血红蛋白含量的结果比较试验。1　材料和方法1
1　材料ＸＦ
1型血红蛋白仪 ,南京半导体器件总厂生产 ;72 1分光光度计 ,上海第三分析仪器厂生产 ;沙利氏比色计 ,江苏省苏州市医疗器械厂生产。氰化高铁血红蛋白标准液和氰化高铁血红蛋白稀释液 ,上海伊华临床医学科技公司生产 ,批号为970 50 6。实验动物 ,湟源县波航乡农户饲养的绵羊 30只。1
2　测定方法　从绵羊颈静脉采取抗凝血 5ｍｌ,对每份血样都用氰化高铁血红蛋白法、血红蛋白仪法及传统的沙利氏比色法测定其结果。1
3　数据处理　将所测定结果分别统计 ,以均数 ...&
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权威出处：
在对中小学生的体检中 ,血红蛋白含量的测定一般采用氰化高铁血红蛋白测定法 ,但通常在血红蛋白仪器说明上只注明了最短转化时间为 5ｍｉｎ ,没有注明显色后的稳定时间 ,同时基层单位常常到一些乡村中小学进行体检 ,不便在现场测定 ,需要将经转化后的血标本放置一定时间后再进行检测 ,为了掌握不同的检测时间对检测结果准确性的影响 ,2 0 0 1年 9月在县城实验小学学生体检时对本法显色稳定性作了初步的探讨。现将结果报告如下 :1　对象与方法随机抽取 1到 6年级每个班级中的 10名学生 ,共计 330名学生。采双份血样 ,每份血样 2 0 μｌ,采后及时加入 5ｍｌ转化液中 ,一份在采血后 5ｍｉｎ～ 2ｈ内测定 ,另一份加塞放置 2 4ｈ后再测定 ,血样经充分混匀 ,静置待测。血红蛋白测定仪每次测定前先预热30ｍｉｎ ,校零点及用 10 0ｇ/Ｌ标准液进行定标校正。2　材料(1)血红蛋白测定仪　选用江苏省姜堰市新康【作者单位】绩溪县...&
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氰化高铁血红蛋白法(简称HICN法)是国际血液学标准化委员会(I csH)于1966年推荐的测定血红蛋白的标准化方法①②。普遍认为该方法是测定血红蛋白最准确的方法@④,世界许多国家都已开始推广和普及。国内自1974年以来,上海市一些卫生单位就开始推广HicN法,1978年上海市医学化验所制成了HicN参考标准液①。但是,在兽医临床上还没有开展这项工作,至今仍沿用沙利氏法。为此,我们于月试验用该方法测定了健康马血红蛋白的含量,同时应用沙利氏法作了对照测定,提供兽医临床上使用和推广HicN法参考。现将结果报告如下。 材料与方法 (一)健康马的选定供测马78匹,为杂种马,年龄3、10岁。以放牧为主,每日补饲两次精料,营养中等。临床检查眼结膜粉红色,体温、脉搏数、呼吸数在正常范围;循环系统检查,白细胞计数及分类计数均未见异常,马传染性贫血琼脂扩散反应阴性。 (二)器材 1.光电比色计:沈阳市电子仪器厂产JGB一1型晶体管...&
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fSI亚硝酸盐在某些食品加工过程中可以添加,但其摄入后毕竟对人体健康不利甚至有害。那么·播入多少容昜引起中毒?(四川白某)^■如果短时间内经口摄入(误食或超量摄入)较CI大量的亚硝酸盐,则容易引起急性中毒,使血液中具有正常携氧能力的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白(临床上称其为高铁血红蛋白血症失去携氧能力,造成组织缺氧。当一次摄入亚硝酸...&
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