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000抢先预约杂交扇贝（华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis ♀×栉孔扇贝C.farreri ♂）的分子细胞遗传学分析--《中国海洋大学》2004年硕士论文
杂交扇贝（华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis ♀×栉孔扇贝C.farreri ♂）的分子细胞遗传学分析
【摘要】：本研究对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)♀×栉孔扇贝(C．farreri)♂单对杂交的受精过程以及杂交子代幼虫的核型进行了分析；首次将基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization GISH)技术应用到扇贝的杂交分析中；构建了一种针对于这两种扇贝的种特异性探针，结合实践探讨了荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)在贝类杂种鉴别中的应用前景。结果如下：
1．利用HOECHST33258荧光染料对华贵栉孔扇贝♀×栉孔扇贝♂受精过程以及子代早期胚胎发育进行了观察分析，以验证利利用这两种扇贝进行人工杂交的可行性。结果表明华贵栉孔扇贝的成熟卵子处于第一次减数分裂的前期或中期，来自于栉孔扇贝的部分异源精子可以附着并进入华贵栉孔扇贝的成熟卵子，激活卵子恢复并完成两次减数分裂并依次排放出第一及第二极体，精卵原核完全形成后在卵子细胞中央位置完成融合。精卵原核的融合以及早期胚胎进行正常发育证实了异源精子参与了后代遗传物质的组成。
2．对华贵栉孔扇贝♀×栉孔扇贝♂子代担轮期幼虫以及双方亲本扇贝进行了常规核型分析。结果表明亲本扇贝基因组染色体之间无论从数目还是到形态上均存在着明显的差别。70％以上的杂交子代担轮幼虫期的核型为2n=35=6m+5sm+11st+13t，NF=46，符合杂交的理论预期价值。本研究进一步证明了亲本双方的遗传物质参与了大部分子代基因组的构建。
3．探讨了GISH技术应用到贝类基因组研究的可行性。对GISH在扇贝基因组研究的应用条件进行了优化处理。摸索出了一套适合贝类杂种基因组分析的GISH技术流程。并利用优化后的GISH方案对华贵栉孔扇贝♀×栉孔扇贝♂子代幼虫进行了检测，结果表明子代中超过70％的分裂相含有35条染色体。利用华贵栉孔扇贝基因组探针作杂交，FITC-PI作为信号检测系统时，分裂相中有16条染色体被稳定地涂染成绿色，正符合华贵栉孔扇贝亲本染色体的单套数目(n=16)；利用栉孔扇贝基因组探针作杂交时，分裂相中有19条染色体被涂染成绿色，这也符合栉孔扇贝亲本染色体的单套数目(n=19)。结合前面我们对同批杂交子代的常规核型分析结果，我们可以确定到担轮期时，大多数的子代仍然符合理论预期型(2n=6m+5sm+11st+13t)，即其基因组染色体是由亲本扇贝基因组单
毕克中国海洋大学硕士论文
套染色体构成的。实验中我们没有发现明显的染色体丢失、断裂及重组等现象，
也没有发现单倍型的染色体分裂相(n二16或n二19)的出现。
4.发现在华贵栉孔扇贝早又栉孔扇贝占过程中产生了极少数的雌核发育个
体。对杂交的受精生物学观察分析探测出了2一4%的来自于华贵栉孔扇贝的卵子
仅通过栉孔扇贝精子的外部刺激即可完成成熟分裂。常规核型分析探测出子代中
约2%的分裂相染色体组型与华贵栉孔扇贝核型完全一致。利用GISH对这部分
个体进行检测鉴定，结果表明其分裂相染色体能够完全被华贵栉孔扇贝基因组
DNA探针所涂染。综合三方面的结论，我们推测这两种扇贝在进行人工远源杂
交的过程中，通过某种未知的机制诱发产生了部分雌核发育个体。
5.探讨了FISH技术和种属特异性探针在扇贝杂种鉴别中的实际应用。根
据栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝转录间隔区I(ITSI)之间的变异度，设计了适当的
FISH杂交温度和洗脱严紧度，构建了针对这两种扇贝的种特异性探针。FISH的
结果表明，在当前的洗脱条件下，利用栉孔扇贝ITSI探针进行FISH能够在栉
孔扇贝种内近交子代中检测到两簇较强阳性信号位点;在华贵栉孔扇贝早X栉孔
扇贝古子代幼虫中只能够检测到一簇较微弱的阳性信号;而在华贵栉孔扇贝种内
近交子代中没有检测到明显的阳性信号。本研究成功地将FISH技术应用到华贵
栉孔扇贝早X栉孔扇贝占杂种鉴定当中，证明利用FISH与种属特异性探针在贝
类的杂交育种研究中将会具有广阔的应用前景。
【学位授予单位】：中国海洋大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2004【分类号】：S917
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（责任编辑：巨弘懿）
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法拉利在官方声明中写到：
法拉利车队宣布和塞巴斯蒂安-维泰尔签订三年合约，他将自2015赛季开始为法拉利车队效力。
明年的车队阵容将由基米-莱科宁和塞巴斯蒂安-维特尔组成。
“法拉利车队决定联手F1历史上最年轻的多届世界冠军，”法拉利车队领队马科-马蒂亚齐说道，“在F1赛事中，塞巴斯蒂安-维泰尔独特地结合了年轻和经验，他有着良好的团队精神，这将在和基米的合作中证明这一精神的价值，他们将和我们一起迎接挑战，我们正致力于尽快重回领先行列。塞巴斯蒂安和我们一样，对于胜利有着无尽的热情和渴望，具有强烈的职业精神和坚韧的性格，这亦是作为法拉利车队成员的必备素养，他将与我们一起，书写法拉利历史的新胜利篇章。”
“我的F1生涯下一步将来到法拉利车队，对我来说，这意味着一生的梦想成为了现实，”塞巴斯蒂安-维泰尔说道，“当我还是一个孩子的时候，驾驶红色赛车迈克尔-舒马赫是我真正的偶像，现在，最终成为一名法拉利车手于我是令人难以置信的荣耀。我已经对于法拉利精神稍有了解，当我2008年在蒙扎赛道赢得自己职业生涯首胜的时候，当时我所驾驶的赛车正是装备了马拉内罗制造的跃马引擎。法拉利车队在这项运动中有着伟大的传动，有机会帮助车队重回巅峰令我万分激动。我将会全身心投入，致力于使一切成为现实。”
同时，法拉利宣布效力五年的西班牙车手费尔南多-阿隆索将在今年底告别车队。据信，阿隆索将加盟迈凯轮车队。
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