ELISA实验结果常见问题及解决方案——标准曲线不佳
ELISA实验结果常见问题：标准曲线不佳
ELISA实验结果常见问题：标准曲线不佳
ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因：
1、 标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：
& 可能原因
& 解决方法
& 如OD绝对值靠谱，则显色过度
& TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，
& 当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
& 仅作单波长检测
& 由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等，&
& 对结果也有影响。建议最终结果以双波长为最准确。
2、 标准曲线最高点吸光值偏低
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：
& 解决方法
粉末标准品未充分溶解
& 粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀，
& 室温静置30分钟，充分溶解。
标准品反复冻融
& 标准品反复冻融后活性降低。
孵育温度、时间
& 按说明书要求孵育条件进行孵育。
显色时间控制
& TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，
当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
3、标准曲线无梯度
ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：
&样品或标准品污染
&错误的样品或标准品的稀释
&完全按照说明书稀释
&偶联抗体浓度过高
&按照说明书调整到最佳的浓度
&TMB底物孵育时间过长
&调整到合适的孵育时间
&错误的孵育时间或温度
&完全按照说明书
&孵育时未加盖导致溶液挥发和污染
&贴封片或加盖
总结得到完美ELISA标准曲线，需要注意几点：
1、 充分溶解标准品；
2、 标准品避免反复冻融；
3、 梯度稀释标准品注意混匀。
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【求助】求助亲们，帮我用logit-log直线回归计算模式绘制两个大鼠ELISA指标的标准曲线,
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这个帖子发布于6年零42天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
浓度由小到大为横坐标，OD值为纵坐标第一个指标IL-1B：浓度由小到大依次为：5,50,100,250,500
OD值依次为：1.778,1.541,1.213,0.624,0.188第二个指标IL-2：浓度由小到大依次为：15,50,100,200,500,1000
OD值依次为：2.318,2.122,1.798,1.044,0.418,0.212就是这么回事，正在处理硕士毕业论文，但是遇到这个，怎么都搞不出来，急需亲们帮忙~~
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楼主缺少 S0 的OD，只怕有些麻烦具体算法见贴 有工具
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MasterPlex ReaderFit可以做，软件的下载地址是：
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关于丁香园关注今日：0 | 主题：217971
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【求助】ELISA的标准曲线用直线还是曲线做？
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这个帖子发布于5年零199天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我在做ELISA的实验中遇到点问题需要各位的帮忙，这是我做的ELISA标准品的吸光度及对应的浓度，希望各位能帮我指导一下究竟使用直线还是曲线绘制标准曲线，而且用不用将标准品的吸光度及浓度取对数后再绘制标准曲线？谢谢！ OD值 0.5
2.4255 浓度
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1.将每个标准品和样本吸光度值除以0浓度标准品的吸光度值再乘以100%，即百分吸光度值。2.以标准品百分吸光率为纵坐标，以样本或标准品浓度的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。3.将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度。
或参考附件中方法
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给力！学习啦
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谢谢，非常感谢！
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关于丁香园如何利用SPSS绘制标准曲线_百度知道
如何利用SPSS绘制标准曲线
我有更好的答案
一、做ELISA试剂盒标准曲线样品检测时有几个问题需要注意 1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
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