western blot内参选择_基础医学_医药卫生_专业资料。内参抗体种类很多,比如 β -actin、β -tubunlin、GAPDH、Lamin B 等,那么针 对自己的实验, 我们该如何选择呢......https://www.haoxp123.com/p1bb8f67d1cb939.htmlWestern Blot内参抗体选择原则_生物学_自然科学_专业资料。内参抗体内参抗体 种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B 等,那么针对自己的实验......https://www.haoxp123.com/p1cfb1e79a89272d.htmlβ-Actin 用途β-Actin 是 PCR 常用的内参,β-Actin 抗体是 Western Blot 很好的内参指数。内参即是 内部参照(Internal Cool) ,对于哺乳动物细胞表达来说一般......https://www.haoxp123.com/p1aa3a0bf78a557f.htmlwestern内参GAPDH_生物学_自然科学_专业资料。刚开始接触 western,看了很多和内参...(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和细胞骨架蛋 白 beta-actin 或 beta......https://www.haoxp123.com/p10b30bbcbf121dd36a32d828c.html
细胞总蛋白的 Western Blot 的内参蛋白一般用 ACTIN, TUBLIN 等细胞内较稳定表达的蛋 白。但是核蛋白的 Western Blot 内参有 LAMIN A, LAMIN B 等;膜蛋白的 ......https://www.haoxp123.com/pee06eff9aef807db.html免疫细胞研究 western blot Western Blot 常见问题及处理总结阿 木 1、western ...47、 做半定量 Western Blot, 内参 β-actin, GAPDH 哪个好? 答:选用 beta......https://www.haoxp123.com/p19a0de1ccfab069dc5022019c.htmlWestern Blot 为什么必须要用内参要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达...(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和细胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-......https://www.haoxp123.com/p1850e4cfeaa9b.htmlWestern-Blot内参的选择_生物学_自然科学_专业资料。 15:07:48 PM...β-actin 是分布于非肌细胞中的一种骨架蛋白,选择作 β-acti n 内参时首先......https://www.haoxp123.com/p16be87e8c852ec.htmlβ -Actin 用途 β -Actin 是 PCR 常用的内参,β -Actin 抗体是 Western Blot 很好的内参指数。内 参即是内部参照(Internal Cool),对于哺乳动物细胞表达来......https://www.haoxp123.com/p171d6d4d840f7.htmlWestern Blot 蛋白归一化定量目标蛋白 内参 A B C A B C 光密度读值 看...从而上样量很大的时候, actin、tubulin、GAPDH抗体产生的信号已经不能反映上样量......https://www.haoxp123.com/p1d7c77b80a300a6c30d229f49.html作为内参,β-tubulin 的蛋白水平通常丌会发生改变,因此被广泛用于 Western ...比如一些少量特殊的情况下,如脂肪组织戒细胞内,β-Actin 的表达量就很少, 丌......https://www.haoxp123.com/p868762cbaed519.html
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Western blot 内参跑不齐怎么调整
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第三，PAGE胶的制备也很关键，一抗、二抗的接合GAPDH不好，本人在发文章做WB的时候也是做过很多次，每次都是不一样的结果。因为WB中间的步骤太多，影响因素很多。看到条带信号连在一起，一方面因为胶不好。第二，内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐，调整上样量一样再检测GAPDH。都有可能。第五，但是还是可以控制一下的，本人觉得不同细菌可能表达量不一样，造成信号强弱不一样。可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异第一。第六，做过多次WB还是不行，虽然是持家基因，转膜的效率会不会是不一致的，样品扩散，另一方面蛋白表达量
高，曝光时间长。第四，应该确认每个样品表达GAPDH的量一样
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参，我们所说的“内参”通常即指新闻内参。与普通的新闻不同的是，新闻内参是一种不进行公开发布的报道。目前，新闻内参特指新闻媒体向各级党政机关专门呈送的一种新闻报道，是新闻的一种特殊形式。在我国，顾名思义就是内部参考。广义的内参可指任何机构搜集的供内部人员参考的信息资料
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内参基因选择相关软件相关软件GeNorm程序NormFinder 程序获得最稳定的内参基因BestKeeper 程序GeNorm程序是Jo Vandesompele于 2002年编写的专门用qPCR方法选择内参基 因的程序。geNorm程序核心原理是：不同 实验条件或不同组织细胞中，2个理想看家 基因表达水平的比值在所有样本中应当一 致，表达水平比值变异度的增加意味着看 家基因表达稳定性的下降。该程序将某一 看家基因与其他看家基因表达水平的两两 比值经对数变换后，计算其平均标准差作 为基因表达稳定度的平均值M。对所有候 选看家基因的表达稳定度进行排序，看家 基因的M值越小，表示该看家基因的表达 越稳定。GeNorm程序可以用于筛选任何组 细胞的任意数量内参基因，选择出2个以上， 而不是传统地使用单一内参基因，有利于 系统偏差的校正，得到更可靠的相对定量 结果。另外geNorm程序可以利用对标准化 因子进行差异分析确定所需看家基因的最 适数目。参考文献： Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes， 2002， Genome Biology例如：
GeNorm计算公式
BestKeeper是Michael等(2004)编写的针对 内参基因和目标基因进行选择的程序。 BestKeeper软件可以比较100个样品中10个内 参基因和10个目标基因的表达水平。具体操 作是把原始数据输入BestKeeper 软件的Excel 表格中，内参基因和目标基因进行单独分析。 BestKeeper程序在每个基因之间产生配对的 相关系数和BestKeeper指数（每个候选基因 Ct值的几何平均数），根据其值的大小进行比较。其优点是不但可以分析内参基因的稳定性，而且可以比较目标基因的表达水平。参考文献：Determination of stable housekeeping genes, differentially regulated target genes and sample integrity: BestKeeperCExcel-based tool using pair-wise correlations， 2004， Biotechnology LettersNormFinder 程序是用于选择合适内参基 因的工具，由 Claus 等 2004 年编写其运行 原理与 geNorm 程序类似，产生基因表达稳 定值,然后根据稳定值排序，最终将表达稳 定值最小的基因作为最稳定的基因。其缺点 是只能选择一适的内参基因作标准。而 geNorm 程序通过基因配对的形式,筛选出最 不稳定基因，然后将剩下基因重新排序重新配对进行筛选，最终选出适当数目的合适基因。参考文献：Normalization of Real-Time Quantitative Reverse TranscriptionPCR Data: A Model-Based Variance Estimation Approach to Identify Genes Suited for Normalization, Applied to Bladder and Colon Cancer Data Sets， 2004， cancer research
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