废水中低浓度挥发性脂肪酸组分的5点pH滴定测量--硕士论文下载
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废水中低浓度挥发性脂肪酸组分的5点pH滴定测量
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联系方式： QQ:一、自我介绍： 办公室 2#－309，8241257，宅 8241523。 二、上课安排： 63 学时，内容安排： 1、实验室基本操作技术、饲料分析样本的采集与制备、初水 分的测定；4 学时 2、饲料中干物质的测定；4 学时 3、饲料中粗蛋白质的测定；12 学时 4、饲料中粗脂肪的测定；4 学时 5、饲料中粗纤维的测定；4 学时 6、饲料中粗灰分的测定；4 学时 7、饲料中钙的测定（高锰酸钾法） 学时 ；4 8、饲料中磷的测定；4 学时 9、饲料中食盐的测定；4 学时 10、饲料中氟的测定；4 学时 11、饲料中总能的测定；12 学时 12、油脂中酸价的测定；3 学时 三、教学目的与要求 1.实验前认真预习， 领会实验原理， 了解实验步骤和注意事项， 做到心中有数； 2.实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，并及 时记录； 3.要认真写好实验报告。实验报告一般包括题目、日期、实验 目的、简单原理、原始记录、结果（附计算公式）和讨论。 四、课外学习要求 预习下一个实验。 五、课程要求 1．课前必须认真预习。理解实验原理，了解实验步骤，探寻 影响实验结果的关键环节，做好必要的预习笔记。未预习者不得进 行实验。 2．所有实验数据，尤其是各种原始数据，必须随时记录在专 用的、预先编好页码的实验记录本上。不得记录在其他任何地方， 不得涂改原始实验数据。 3．认真阅读“实验室安全制度”和“化学实验课学生守则”，遵 守实验室的各项规章制度。树立环境保护意识，尽量降低化学物质 （特别是有毒有害试剂以及洗液、洗衣粉等）的消耗。 4．保持实验室内安静、实验台面清洁整齐。爱护仪器和公共 设施，树立良好的公共道德。 5．每次实验不得迟到。迟到超过 15 分钟取消此次实验资格。 因病、因事缺席，必须请假。 6．希望学生在每次实验报告后附上自己在学习本实验的感 受，特别欢迎提出宝贵的意见和建议。 六、成绩的确定 实验考核方式为平时成绩和期末考试两部分， 成绩计算方式为 平时成绩占 50%，期末考试占 50%。 平时实验成绩由以下三部分组成： 1.实验报告占 30%，根据分析结果的准确度对每位学生实验成 绩划分等级（根据教师预做数据进行综合评价） 。 2.平时预习、实验态度、实验台整洁、实验操作、报告书写及 值日卫生的状况等占 40%。 3.对已知物的定量分析（含操作、结果、报告等）占 30%。 绪论 第一节 饲料分析实验室基本操作技术 一、实验室规则 1、实验室须保持清洁整齐： 仪器药品的放置应有次序；试剂药品不得洒在桌面或地面上； 玻璃仪器用过后应随时洗净、烘干；实验废弃物应及时弃去。 2、使用的玻璃仪器必须清洁，实验过程中产生的废液倒入水 槽中， 放水冲走； 强酸强碱废液须先用水稀释， 然后倒入废液缸内， 以免腐蚀水管；固体物如滤纸、残渣须倒入垃圾桶或袋，不得投入 水槽。 3、凡发生烟雾、或有毒有害气体的操作，都须在通风橱中进 行。 4、使用易燃药品如乙醚、酒精等，应远离明火，以防着火引 起火灾，使用电炉、恒温箱、高温炉等时，人不得远离，以防意外。 5、精密仪器如分光光度计、氧弹测热计等应特别爱护，使用 前必须熟读使用方法，必须在教师的指导下严格按操作规程使用。遇有问题，及时请教教师，不得任意拆卸。 6、取用试剂或标准溶液，用后必须立即将原瓶塞盖严，放回 原处，自瓶中取出的试剂如未用尽，切勿倒回瓶内，一面掺混。量 取有毒有害试剂时，切勿用口吸，可用移液管或量筒，或借助洗耳 球。 7、配制的试剂，必须贴上标签，注明试剂名称、浓度、时间 等信息。 8、注意节约水、电、试剂、药品等，不得浪费滤纸及其它消 耗品，养成节约的好习惯。 9、实验室内不许吸烟，不许打闹嬉戏，不许干与实验无关的 事情。 二、基本操作 1、仪器的洗涤 洗涤方法： ①用水刷洗：可溶性物质或附着在器壁上的灰尘等； ②用去污粉或洗涤剂洗：油污等； ③用铬酸洗液洗：等体积的浓硫酸和饱和的重铬酸钾溶液配 制而成，对有机物和油污等具有很强的去污能力，尤其是口小管细 的仪器； ④再用蒸馏水，遵循“少量多次”的原则。 ⑤判断仪器洗涤“干净”的标准： 将仪器倒置， 其中的水可以完 全流尽，而没有水珠附着在器壁上。 2、仪器的干燥 ①加热烘干； ②晾干或吹干 3、仪器标号 ①铅笔标号：有磨砂的表面； ②蜡笔标号：干的玻璃器皿； ③记号笔：不能用于加热的器皿； ④氯化铁+墨水灼烧：瓷坩埚。 4、过滤 ①过滤前的准备：选择合适的滤纸；加水后应有液柱；漏斗 末端触及烧杯内壁。 ②过滤：将玻璃棒垂直放在漏斗边缘，使其末端挨近滤纸上 部但不接触；充满漏斗的 2/3 时暂停，以使杯口的最后一滴沿玻璃 棒流入滤纸，不会流到烧杯外边；洗涤烧杯数次，洗液亦倒入漏斗 过滤。 5、常用仪器的使用 ①吸量管： 刻度吸管：准确性差，但可移任意体积； 移液管：准确性高，只能移取一定体积的溶液。 “快”、“吹” 用干燥的吸量管——移取——洗涤晾干 ②容量瓶：准确配制溶液，不是盛器。 准确称样——溶解于烧杯中——转移到容量瓶——漂洗烧杯 ——定容——摇匀； 液体——准确移取——定容——摇匀。 ③滴定管：滴定时准确测量标准溶液体积的量器。 按精密度： （0.1mL） 半微量 常量 、 （0.05mL） 微量 、 （0.01mL） ； 按所盛溶液性质：酸式（活塞） 、碱式（橡皮管） ； 按颜色：无色、棕色。 涂油——检验是否漏水——洗涤——漂洗——倒满标准溶液 ——赶气泡+滴定——读数（深色溶液则从液面上沿读数） 。 6、常用试剂规格 ①基准试剂：可直接配置标准溶液，不需标定； ②优级纯试剂：绿色标签，精密的分析工作； ③分析纯试剂：红色标签，多数分析科研； ④化学纯试剂：蓝色标签，厂矿的日常分析； ⑤试验试剂：试验中自配的试剂； 普通蒸馏水、重蒸水 7、化学药品的取用 ①固体：干净的药匙；取完后立即盖上盖子；尽量不要取多； 用硫酸纸，不用滤纸等，但有腐蚀性、强氧化性或易潮湿试剂不能 称在纸上。 ②液体：从滴瓶中取用时，滴管不能触及所使用的容器器壁； 取细口瓶中的液体时， 瓶塞反放在桌面上， 有标签的一面握在手心， 逐渐倾斜瓶子， 倒出试剂。 最后将瓶口剩余一滴试剂碰到试剂瓶中； 定量取用可借助量筒或移液管，取多的试剂不准倒回原瓶，可倒入 1指定容器内供他人使用。 第二节 饲料分析法简介 饲料分析是评定饲料营养价值的一种基本方法。 它可以分为概 略养分分析法与纯养分分析法两种。 饲料概略养分分析法是 1860 年德国家畜营养学家汉尼伯哥 （Henneberg）和司徒门（Stohman） ，在总结了前人饲料分析方法 的基础上汇编而成的，此法测定饲料中六大概略养分即水分、粗蛋 白质、粗脂肪、粗纤维、粗灰分和无氮浸出物的含量。我国国家标 准中所列的六大成分的测定方法也是应用上述分析方法。但是，这 套方法对某些成分的测定不够精确，因此，国内外许多学者都试图 对某些测定方法进行一些改革。Van Soest（1966）建议对粗纤维的 测定，改用测定中性洗纤维（NDF） 、酸性洗涤纤维（ADF）和酸 性洗涤木质素（ADL）作为测定饲料中纤维性物质的指标，至于其 他项目的分析，尚未更好的方法。 随着畜禽营养科学的发展， 特别是集约化生产的发展和先进分 析仪器的应用， 饲料分析则从过去的一般成分分析逐渐趋向于更精 细的纯养分分析。纯养分分析项目包括各种矿物元素、氨基酸和维 生素等。纯养分分析更进一步揭示了饲料养分的实质，对于配合全 价日粮，研究和治疗畜禽营养性疾病是必不可少的。但是，纯养分 分析要求设备条件比较高，因此，在当前科研和生产中，饲料一般 成分分析法和纯养分分析法应相互配合，各尽所能，对评定我国饲 料营养价值充分发挥各自的作用。水分（干物质） 粗蛋白 粗灰分 粗脂肪 粗纤维 无氮浸出物 氨基酸 微量元素 维生素出现，它的出现是偶然的，所以又称为偶然误差。例如仪器临时出 现故障、样品称量不准确等。方法误差 系统误差 误差 偶然误差 仪器误差 试剂误差 操作误差 误差的减免方法 重复试验 空白试验 校正仪器 回收试验概略养分分析饲料分析二、误差的减免方法 为了减少分析过程的误差，常采用以下方法： 1． 重复测定 对同一样品同一成分的测定进行几个重复， 这种方法可以减小 随机误差。 2． 空白试验 在不加样品的情况下，铵分析步骤和测定条件所进行的试验， 叫空白试验，所测得的值叫空白值。将空白值从测定值中除去，就 可消除仪器误差和试剂误差。 如测定粗蛋白时用蔗糖代替试样做空 白试验。 3． 校正仪器 在仪器使用前先进行校正，这种方法可以减少仪器误差， 4． 回收试验 即测定标准样品的回收率。若回收率符合一定要求，则说明系 统误差合格，分析方法是可行的。测粗蛋白时用硫酸铵做回收率试 验，回收率大于活等于 98%即认为合格。 三、误差的表示方法和允许量 绝对误差 （一）误差的表示方法 准确度 相对误差 误差的表示方法有两种： 误差的表示方法 绝对偏差 1． 准确度：是指测定结果与真实值的符合程度。用误差表 示： 精确度 对偏差 绝对误差 = 测量结果-真值 绝对误差 相对误差 = ——————× 100% 真 值 2．精密度：在实际工作中，真值往往是不知道的，因而准确 度无法求得。因此，对分析结果的评定，常用精密度表示同一测量 中多次平行测定之间的符合程度，精密度高，表示各结果之间的重 现性好，即各结果的离散程度小，一组分析结果精密度高，并不一 定准确度高， 因为系统误差的存在可能并不一定影响每次测定值之 间的符合程度，即不影响精密度，但却影响准确度。但准确度高， 必然精密度高。精密度用偏差表示。通常把测定值与平均值之差称 为绝对偏差或偏差。 绝对偏差（偏差）= 测定值 - 平均值 测定值-平均值 相对偏差 = ————————— × 100% 平 均 值 例：某饲料含水量所得三次测定值为 12.4%，12.2%，12.3%， 求各测定值的相对偏差。 12.4%+12.2%+12.3% 解：平均值= —————————— =12.3% 3 12.4%-12.3% 相对偏差= ———————× 100%=0.81% 12.3% 那么， 如何判断测定结果是否符合要求呢？这就涉及到误差的 允许范围。 （二）误差的允许量 根据实际应用上的要求及可能达到的精密度，对饲料各项成 分分析结果的分析误差允许范围规定见表 1。饲料样品某成分重复 测定的相对偏差或相对相差在以上允许范围内， 则求出重复值的算 术平均数作为饲料样品该成分的含量。纯养分分析第三节 饲料分析的误差 饲料分析过程中，由于分析时使用的仪器、采用的方法、试剂 条件以及分析者的操作能力等多方面因素的影响， 使测定结果与真 实值之间产生一定的差距，这种差距称为误差。虽然真实值客观存 在，但在实际工作中却是不可知的，因为即使是一个操作熟练、经 验丰富的分析者，采用最精密的仪器，对同一样品进行多次重复测 定，也不一定能获得完全一致的分析结果，因此，分析结果有误差 是必然的，也是不可避免的。我们的目的是要尽量减小分析过程中 的误差，使误差在规定的允许范围内。要减小误差，必须先弄清误 差来源。 一、误差来源 任何分析结果都是经过一系列操作步骤获得的，因此，分析结 果的误差必然是整个操作过程中每一步产生误差的总和， 其来源有 以下几个方面： 1． 方法误差 由分析方法本身造成的误差。对某一项目的测定可以采用多 种分析方法，采用不同的分析方法产生的误差不同。例如对微量元 素铬的测定可以采用原子吸收法，也可以采用比色法，同一操作者 用这两种方法对同一样品进行测定产生的误差不同。 2． 仪器误差 由于仪器的精密度低或仪器未进行校正产生的误差。 例如容量 瓶在使用时未进行校正，常量滴定管的精密度低于微量滴定管等。 3． 试剂误差 由于试剂纯度不够产生的误差，例如蒸馏水的纯度不够，试剂 的纯度不够等。 4． 操作误差 指在正常的操作情况下，由于操作人员的主观因素造成的误 差，例如观察颜色的敏锐程度不够以及操作不严格等。 上述四种误差都是由于固定的、经常的原因造成的，它是可测 的，因此又称为系统误差。 5． 随机误差 由于不确定因素造成的， 具有随机性变化的误差， 称随机误差。 随机误差是不能人为控制的，它在某一测定中可能出现，也可能不 表 1 饲料各项成分分析结果的分析误差允许范围2成分 吸附水含量 ≥10% 5～10% ≤5% ≥10%允许测定的相对偏差≤ 1% 3% 5% 0.50% 1% 5% 1% 2% 3% 1% 3% 5% 10% 1% 5% 10% 3% 5% 10% 5% 10% 1% 20% 2% 3%粗灰分5～10% ≤5% ≥25%粗蛋白质10～25% ≥10% ≥10%粗脂肪5～10% 1～5% ≤1% ≥10%粗纤维5～10% ≤5% ≥5%钙1～5% ≤1% ≥0.5%磷0.1～0.5% ≤0.1% ≥10%食盐5～10% ≤5%第四节饲料样品的采集与制备要使分析结果做到准确、 可靠， 除了在分析过程中做到认真、 精确外，还要对分析所用的样品进行正确的采集和制备，使所采集 的样品具有足够的代表性。怎样才能使这少量的样品（± 250g） ，代 表几吨、几十吨、甚至上百吨分析对象呢？这就是下面我们要学习 的内容。 样品是待检饲料原料或产品的一部分。从待测饲料原料或产 品中按规定扦取一定数量、具有代表性样品的过程，称为采样。将 样品经过干燥、磨碎和混合处理，以便进行理化分析的过程称为样 品的制备。 饲料样品的采集和制备是饲料分析中两个极为重要的步 骤，必须加以重视。 一、样品的采集 （一）采样的目的 样品的采集是饲料分析的第一步， 采样的根本目的是通过对样 品的理化指标的分析，客观反映受检饲料原料或产品的品质。样品 的分析结果有不同的用途。对饲料工业而言，采样左右着许多方面 的决策，并且这种影响面很广泛，具体主要表现在以下 8 个方面。 1． 为饲料配方选择原料； 2．选择原料供应商； 3．接收或拒绝某种饲料原料； 4． 判断产品的质量是否符合规格要求和保证值， 以决定产品 出厂与否或仲裁买卖双方的争议； 5．判断饲料加工程度和生产工艺控制质量； 6．分析保管贮存条件对原料和产品质量的影响程度； 7．保留每一批饲料原料或产品的样品，以备急需时用； 8． 分析测定方法的准确性和实验室或人员之间操作误差的比 较：由权威实验室仔细分析化验的样品可作为标准样品。将标准样 品均匀分成若干平行样品，分别送往不同实验室或人员进行分析， 比较不同实验室或人员测定结果的差异， 用于校正或确定某一测定 方法或某种仪器的准确性，规范实验分析操作规程，提高分析人员 的操作水平。 由此可见，采样对饲料工业的影响是非常广的。正如 Gehrt （1976）所述“采样比分析更为重要。 （二）采样的要求 1． 样品必须具有代表性 受检饲料容量和质量往往都很大， 而分析时所用的样品仅为其 中的很小一部分，所以样品采集的正确与否决定分析样品的代表 性，直接影响分析结果的准确性。因此，在采样时，应根据分析要 求，遵循正确的采样技术，并详细注明饲料样品的情况，使采集的样品具有足够的代表性，使采样引起的误差减至最低限度，使所得 分析结果能为生产实际所参考和应用。否则，如果样品不具有代表 性，即使一系列分析工作非常精密、准确，无论分析了多少个样品 的数据，其意义都不大，有时甚至会得出错误结论。事实上，实验 室提交的分析数据不可能优于所采集的样品。 2． 必须采用正确的采样方法 正确的采样应该从不同代表性的区域取几个样点， 然后把这些 样品充分混合成为整个饲料的代表样品， 然后再从中分出一小部分 作为分析样品用。采样过程中，做到随机、客观，避免人为和主观 因素的影响。 3． 样品必须有一定的数量 不同的饲料原料和产品要求采集的样品数量不同，主要取决 于以下几个因素。 （1）饲料原料和产品的水分含量：水分含量高，则采集的样 品应多， 以便干燥后的样品数量能够满足各项分析测定要求； 反之， 水分含量少，则采集的样品可相应减少。 （2）饲料原料和产品的颗粒大小和均匀度：原料颗粒大，均 匀度差，则采集的样品应多。 （3）平行样品的数量：同一样品平行样品的数量越多，则采 集的样品数量就越多。 4． 采样人员应有高度责任心和熟练的采样技能 采样人员应明白自己是饲料厂管理及产品质量的“眼睛“，应具 有高度的责任心，在采样时，认真按操作规程进行，不弄虚作假和 谋取私利，及时发现和报告一切异常情况。 采样人员应通过专门培训，具备相应技能，经考核合格后方 能上岗。 5． 重视和加强管理 主管部门、权威检测机构和饲料企业必须高度重视采样和分 析的重要性，加强管理。管理人员必须熟悉各种原料、加工工艺和 产品；对采样方法、采样操作规程和所用工具提供相应规定；对采 样人员提供培训和指导。 （三）采样工具 采样工具种类很多，但必须符合要求： （1）能够采集饲料中 的任何粒度的颗粒，无选择性； （2）对饲料样品无污染，如不增加 样品中微量金属元素的含量或引入外来生物或霉菌毒素。 目前使用 的采样工具主要有以下几种。 1． 探针采样器 也叫探管或探枪，是最常用的干物料采样工具。其规格有多 种，有带槽的单管或双管，具有锐利的尖端。 32． 锥形袋式取样器 该种取样器是用不锈钢制作的，特点是具有一个尖头、锥形体 和一个开启的进料口。 3． 液体采样器 （1）空心探针：实际上是一个镀镍或不锈钢的金属管，直径 为 25mm，长度为 750mm，管壁有长度为 715mm，宽度为 18mm 的孔，孔边缘圆滑，管下端为圆锥形，与内壁成 15° 角，管上端装 有把柄。常用做桶和小型容器的采样。 （2）炸弹式或区层式采样器：为密闭的圆柱体，可用做散装 罐的液体采样，能从贮存罐的任何指定区域采样。当到达贮罐低部 时，一个阀提起，或如果在中间的深度取样时，它可由一根连在该 阀的柱塞上的绳子手动提起。 4． 自动采样器 自动采样器可安装在饲料厂的输送管道、分级筛或打包机等 处，能够定时、定量采集样品。自动采样器适合于大型饲料企业， 其种类很多，根据物料类型和特性、输送设备等进行选择。 5． 其它采样器 剪刀（或切草机） 、刀、铲、短柄或长柄勺等也是常用的采样 工具。 （四）采样的步骤和基本方法 1． 采样的步骤 （1）采样前记录：采样前，必须记录与原料或产品相关的资 料，如生产厂家、生产日期、批号、种类、总量、包装堆积形式、 运输情况、贮存条件和时间、有关单据和证明、包装是否完整、有 无变形、破损、霉变等。 （2）原始样品采集：也叫初级样品，是从生产现场如田间、 牧地、仓库、青贮窖、实验场等的一批受检的饲料或原料中最初采 取的样品。原始样品应尽量从大批（或大数量）饲料或大面积牧地 上，按照不同的部位即深度和广度来分别采取一部分，然后混合而 成。原始样品一般不得少于 2Kg。 （3）次级样品：也叫平均样品，是将原始样品混合均匀或简 单的剪碎混匀，从中取出的样品。平均样品一般不少于 1Kg。 （4）分析样品：也叫实验样品。次级样品经过粉碎、混匀等 制备处理后，从中取出的一部分即为分析样品。用作样品分析用。 分析样品的数量根据分析指标和测定方法要求而定。 2． 采样的基本方法 在一般情况下，用来分析的样品总是少量的，而分析的结果却 是对大批的被检物品给以客观的评定。因此，采样的正确程度对分 析结果有着直接影响。所以，必须遵循正确的采样原则，使采集的 样品能代表全部分析对象。 一般来说， 采样的基本方法有以下两种。 （1）几何法：指把整个一堆物品看成一种具有规则的几何体， 如立方体、圆柱体、圆锥体等。取样时先将该立体分成若干体积相 等的部分（或在想象中将其分开） ，这些部分必须在全体中分布得 均匀，而不只是在表面或在一面。从这些部分中取出体积相等的样 本，称之为支样，将这些支样混合即得样品。 几何法常用于采集原始样品和大批量的原料。 （2）四分法：将饲料置于一张方形纸或塑料布上（大小视样 本的多少而定） ，提起纸的一角，使饲料流向对角，随即提起对角 使饲料流回， 如此反复使饲料混合均匀， 然后将饲料平铺， 用药铲、 刀子或其他适当器具，从中画一“十”字或一角线相连接，将样本分 成四等份，除去对角线的两份，将剩余的两份如前述混合均匀后， 再分成四等份，重复上述过程，直至剩余样本数量与测定所需要的 用量相接近时为止。 大量饲料也可在洁净的地板上堆成锥形，然后，用铲将堆移至 另一处，移动时将每一铲饲料倒于前一铲饲料之上，这样使饲料由 堆顶向下流动到周围， 如此反复移动三次以上即可混合均匀。 最后， 将饲料堆成圆锥形，将顶部略略压平使成圆台状，再从上部中间按 前面“十字形法”进行取样。适于原始样品的采集； 适于原始样品制成分析样品； 多点分层取样； 混匀； 几何法 采样点不少于 5 个； 四分法 从中画一“×”或“+”； 总量：干样≥2Kg， 除去对角线两份； 鲜样≥5Kg。 重复上述过程使剩余风干样不少 于 2Kg。四分法常用于小批量样品和均匀样品的采样或从原始样品中 获取次级样品和分析样品。也可采用分样器或四分装置代替上述手工操作。 如常用的锥形 分配器和具有分类系统的复合槽分配器。 对粉末状、 均匀度高的样品， 可直接通过四分法采集分析样品， 一般在 500g 左右。对颗粒大、均匀度不好的饲料如子实饲料，通 过四分法可从原始样品中采集次级样品。次级样品至少在 1Kg 左 右。 对于不均匀的物品如各种粗饲料、块根、块茎饲料、动物屠体 等，则需要将几何法和四分法结合起来反复使用，使用的次数随物 品体积的大小和不均匀性质的情况而定。 （五）不同饲料样品的采集 不同饲料样品的采集因饲料原料或产品的性质、状态、颗粒 大小或包装方式不同而异。 1．粉状和颗粒饲料 （1）散装：散装的原料应在机械运输过程中的不同场所（如 滑运道、传送带等处）取样。如果在机械运输过程中未能取样，则 可用探针取样，但应避免因饲料原料不匀而造成的错误取样。 取样时，用探针从距边缘 0.5m 的不同部位分别取样，然后混 合即得原始样品。 取样点的分布和数目取决于装载的数量， 见下图。 也可在卸车时用长柄勺、自动选样器或机器选样器等，间隔相等时 间，截断落下的料流取样，然后混合得原始样品。 （2）袋装：用抽样锥随意从不同袋中分别取样，然后混合得 原始样品。每批采样的袋数取决于总袋数、颗粒大小和均匀度，有 不同的方案， 取袋数量至少为总袋数的 10%， 也可以按 （总袋数/2） 的平方根计算出。中小颗粒饲料如玉米、大麦等取样的袋数不少于 总袋数的 5%。 粉状饲料取样的袋数不少于总袋数的 3%。 总袋数在 100 袋以下，取样不少于 10 袋，每增加 100 袋需增加 1 袋。 取样时，用口袋探针从口袋的上下两个部位采样，或将袋平 放，用采样器沿每只袋的对角线取样。采样器插入时应使槽朝下， 然后转 180 度，再取出。 大袋的颗粒饲料在采样时，可采取倒袋和拆袋相结合的方法 取样，倒袋和拆袋的比例为 1：4。倒袋时，先将取样袋放在洁净 的样布或地面上， 拆去袋口缝线， 缓慢地放倒， 双手紧握袋底两角， 提起约 50cm 高，边拖边倒，至 1.5m 远全部倒出，用取样铲从相 当于袋的中部或底部取样，每袋各点取样数量应一致，然后混匀。 拆袋时，将袋口缝线拆开 3～5 针，用取样铲从上部取出所需样品， 每袋取样数量一致。将倒袋和拆袋采集的样品混合即得原始样品。 （3）仓装：一种方法是原始样品在饲料进入仓装车间或成品 库的流水线或传送带上、 贮塔下、 料斗下、 称上或工艺设备上取样， 具体方法： 用长柄勺、 自动选样器或机器选样器等， 间隔相等时间， 截断落下的料流。间隔时间应根据产品移动的速度来确定，同时要 考虑到每批选取的原始样品的总量。对于饲料级磷酸盐、动物性饲 料粉和鱼粉应不少于 2Kg，而其它饲料产品则不低于 4Kg。另一种 方法是针对贮藏在饲料库中的散状产品的原始样品。 方法是按高度 分层采样，即采样前将层表面划分为 6 个等份，在每一部分的四方 形对角线的四角和交叉点 5 个不同地方采样。 料层厚度在 0.75m 以 下时，从 2 层中选取，即从距料层表面 10～15 深处的上层和靠近 地面的下层选取；当料层厚度在 0.75m 以上时，从 3 层中选取，即 从距料层表面 10～15 深处的上层、中层和靠近地面的下层选取， 采集时从上而下进行。料堆边缘的点应距边缘 50cm 处，地层距底 部 20cm。 圆仓可按高度分层，每层分内（中心） 、中（半径的一半处） 、 外（距仓边 30cm 左右）3 圈，圆仓直径在 8m 以下时，每层按内、 中、外分别采 1、2、4 个点，共 7 个点；直径在 8m 以上时，每层 按内、中、外分别采 1、4、8 个点，共 13 个点。将各点样品混匀 即得原始样品。 2．液体或半固体饲料 （1）液体饲料：桶或瓶装的植物油等液体饲料应从不同的包 装单位（桶或瓶）中分别取样，然后混合。取样的桶数如下： 7 桶以下，取样桶数不少于 5 桶； 10 桶以下，取样桶数不少于 7 桶； 10～50 桶，取样桶数不少于 10 桶； 51～100 桶，取样桶数不少于 15 桶； 101 桶以上，按不少于总桶数的 5%桶扦取。 取样时，将桶内饲料搅拌均匀（或摇匀） ，然后将空心探针缓 慢地自桶口插至桶底，然后堵压上口提出探针，将液体饲料注入样 品瓶内混匀。 对散装（大池或大桶）的液体饲料按散装液体高度分上、中、 下三层分层布点取样。 上层距液面约 40cm 处， 中层设在液体中间， 4下层距池底 40cm 处，三层采样数量的比例为 1：3：1（卧式液池、 车槽为 1：8：1） 。采样时，用液体取样器在不同部位采样，并将 各部位采集的样品进行混合，即得原始样品。原始样品的数量取决 于总量，总量为 500t 以下，应不少于 1.5Kg；500～1000t，不少于 2.0Kg；1001t 以上，不少于 4.0Kg。原始样品混匀后，再采集 1Kg 次级样品备用。 （2）固体油脂：对在常温下呈固体的动物性油脂的采样，可 参照固体饲料采样方法，但原始样品应通过加热融化混匀后，才能 采集次级样品。 （3）黏性液体：黏性浓稠饲料如糖蜜，可在卸料过程中采用 抓取法，即定时用勺等器具随机采样。原始样品数量应为总量 1t 至少采集 1L。原始样品充分混匀后，即可采集次级样品。 3．块饼类 块饼类饲料的采样依块饼的大小而异。大块状饲料从不同的 堆积部位选取不少于 5 大块，然后在每块中切取对角的小三角形， 将全部小三角形块锤碎混合后得原始样品，然后按“四分法”取分析 样品 200g 左右。 小块的油粕，要选取具有代表性的饼片数至少一吨取 10 片 （25～50 片） ，粉碎混合后得原始样品，然后按“四分法”取分析样 品 200g 左右。 4．副食及酿造加工副产品 此类饲料包括酒糟、醋糟、粉渣和豆渣等。取样方法是：在 贮藏池、木桶或贮堆中分上、中、下 3 层取样。视池、桶、堆的大 小每层取 5～10 个点， 每点取 100g 放入瓷桶内混合后得原始样品， 然后从中随机取分析样品约 1500g，用 200g 测定其初水分，其余 放入大瓷盘中，在 60～65℃恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。 对豆渣和粉渣等含水较多的样品，在采样过程中应注意避免 汁液损失。 5．根茎及瓜果类 这类饲料的特点是含水量大，由不均匀的大体积单位组成。 采样时，通过采集多个单独样品来消除每个个体间的差异。样品个 数的多少，根据样品的种类和成熟的均匀与否，以及所需测定的营 养成分而定，见表 2。 表 2 根茎及瓜果类的取样数量 种类 个数 种类 一般根茎类饲 10～20 胡萝卜 料 马铃薯 50 南瓜个数 20 10采样时，从田间或贮藏窖内随机分点采取原始样品 15Kg，按 大、中、小三类分堆称重求出比例，按比例取 5Kg 次级样品。先用 水洗干净，洗涤时注意不得损伤外皮。洗净后用清洁纱布拭去表面 的水分。如果个体太大，应采取对角采样法，从块根的顶部至根部 纵切具有代表性的对角四分之一、 八分之一……直至适量的分析样 品，迅速切碎后混合均匀，取 300g 左右测定初水分，其余样品平 铺于洁净的瓷盘内或用线串联置于阴凉通风处风干 2～3 天，然后 在 60～65℃恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。 6．新鲜青绿饲料及水生饲料 新鲜青绿饲料包括天然牧草、蔬菜类、作物的茎叶和藤蔓等。 一般取样是在天然牧地或田间， 在大面积的牧地上应根据牧地类型 划区分点采样。每区选取 5 个以上的采样点，每点一平方米范围。 在此范围内离地面 3～4cm 处割取牧草，除去不可食草，将各点原 始样品剪碎，混合均匀得原始样品。然后，按四分法取分析样品 500～1000g，取 300～500g 用于测定初水分，一部分立即用于测定 胡萝卜素等，其余在 60～65℃恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。 栽培的青绿饲料应视田块的大小，按上述方法等距离分点， 每点采 1 至数株，切碎混合后取分析样品。该方法也适用于水生饲料，但注意采样后应凉干样品外表游离水分，然后切碎混合取分析 样品。 7．青贮饲料 青贮饲料的样品一般在井窖类或沟窖类内采样。取样前应除 去覆盖的泥土、秸秆及发霉变质的青饲料。原始样品质量为 500～ 1000g，长形青贮壕的采样点视青贮壕长度大小分为若干段，每段 设采样点分层取样。 井窖类青贮料采样，应从距壁 30～50 厘米处引一圆，然后由 圆心及互相垂直的两直径与园相交的各点进行采取（见下图） 。采 取时应将表面 50 厘米的青贮饲料除去。 利用刀切取边长 20 厘米的 立方饲料块。 图一 井型窖采样部位示意图 图二 沟窖采样部位 示意图 沟式窖采样的部位，应从青贮沟一端，除去最外层的草层， 同样由表层 50 厘米处采样。采样的部位为距贮沟两臂及沟底与草 面各 30～50 厘米处作一方形，并将对边中点连续成田字形（见下 图）采样时要求与井型窖相同，切忌摘取，打乱原青贮饲料的组成 与结构。 8．粗饲料 这类饲料包括秸秆及干草类。取样方法为在存放秸秆或干草 的堆垛中选取 5 个以上不同部位的点采样（采用几何法） ，每点采 200g 左右，采样时应注意由于干草的叶子极易脱落，影响其营养 成分的含量，故应尽量避免叶子脱落，采取完整或具有代表性的样 品，保持原料中茎叶的比例。然后将采取的原始样品放在纸或塑料 布上，剪成 1～2cm 长度，充分混合后取分析样品约 300g，粉碎过 筛。 少量难粉碎的秸秆渣应尽量锤碎弄细， 并混入全部分析样品中， 充分混合均匀后装入样品瓶中，切记不能丢弃。 二、样品的制备 样品的制备指将原始样品或次级样品经过一定的处理成为分 析样品的过程。样品制备方法包括烘干、粉碎和混匀，制备成的样 品可分为半干样品和风干样品。 （一）风干样品的制备 风干饲料指自然含水量不高的饲料， 一般含水量在 15%以下， 例如晒干的玉米、小麦等作物子实、糠麸、青干草、鱼粉、贝壳粉、 配合饲料等。 风干样品的制备包括 3 个过程。 1．原始样品的采集 按照几何法和四分法采集。 2．次级样品的采集 对不均匀的原始样品如干草、秸秆等，可经过一定处理如剪 碎或锤碎等混匀，按四分法采取次级样品。对均匀的样品如玉米、 粉料等，可直接按四分法采取次级样品。 3．分析样品的制备 （1） 制备设备： 常用样品制备的粉碎设备有植物样本粉碎机、 旋风磨、咖啡磨和滚筒式样品粉碎机。其中最常用的有植物样本粉 碎机、旋风磨。植物样本粉碎机易清洗，不会过热及使水分发生明 显变化，能使样品经研磨后完全通过适当筛孔的筛。旋风磨粉碎效 率高，但在粉碎过程中水分有损失，需注意校正。 注意磨的筛网的孔径大小不一定与检验用的大小相同。而粉 碎粒度的大小直接影响分析结果的准确性。 （2）制备过程：次级样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过孔径 为 1.00～0.25mm 孔筛即得分析样品。主要分析指标样品粉碎粒度 要求见表 3。注意：不易粉碎的粗饲料如秸秆渣等在粉碎机中会剩 留极少量难以通过筛孔，这部分决不可抛弃，应尽力弄碎如用剪刀 仔细剪碎后一并均匀混入样品中，避免引起分析误差。将剪碎完毕 的样品 200～300g 装入磨口广口瓶中，贴好标签放入避光、阴凉、 干燥处备用。标签上应注明样品名称、采集地点、采集时间、采样 人以及必要的若干说明，以便对照核查。表3指标主要分析指标样品粉碎粒度的要求分析筛规格/目 40 18 60 筛孔直径/mm 0.45 1.00 0.25水、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷、盐 粗纤维、体外胃蛋白酶消化率 氨基酸、微量元素、维生素、脲酶活性、蛋白质溶解度（二）半干样品的制备1． 半干样品的制备过程 半干样品是由新鲜的青饲料、青贮饲料等制备而成。这些新鲜 5样品含水量高，占样品质量的 70%～90%，不易粉碎和保存。除少 数指标如胡萝卜素的测定可直接使用新鲜样品外， 一般在测定饲料 的初水分后制成半干样品，以便保存，供其余指标分析备用。的样 品称为新鲜样品。例如：青草、多汁饲料、青贮饲料、鲜肉、鲜乳、 粪便等。 初水分是指新鲜样品在 60～65℃恒温干燥箱中烘 8～12h，除 去部分水分，然后回潮使其与周围环境条件的空气湿度保持平衡， 在这种条件下所失去的水分称为初水分。 去掉初水分之后的样品为 半干样品。 半干样品的制备包括烘干、回潮和称恒重 3 个过程。最后， 半干样品经粉碎机磨细，通过 1.00～0.25mm 孔筛，即得分析样品。 将分析样品装入磨口广口瓶中，贴好标签放入避光、阴凉、干燥处 备用。标签上应注明样品名称、采集地点、采集时间、采样人以及 必要的若干说明，以便对照核查。 2．初水分的测定步骤 （1）原理 把样品置于 60～65℃恒温干燥箱中烘至恒重，失去的质量即 为初水分。 （2）步骤 ① 瓷盘称重：在普通天平上称取瓷盘的质量。 ② 称样品重：用已知质量的瓷盘在普通天平上称取新鲜样 品 200～300g。 ③ 灭酶：将装有新鲜样品的瓷盘放入 120℃烘箱中烘 10～ 15min。目的是使新鲜饲料中存在的各种酶失活，以减少 对饲料养分分解造成的损失。 ④ 烘干：将有鲜样的瓷盘迅速放入 60～70℃烘箱中，烘一 定时间，直到样品干燥容易磨碎为止。烘干时间一般为 8～2h，取决于样品含水量和样品数量。含水低、数量少 的样品也可能只需 5～6h 即可烘干。 ⑤ 回潮和称重：取出瓷盘，放于室内自然条件下冷却 24h， 然后在普通天平上称重。 ⑥ 再烘干：继续将瓷盘放入 60～70℃烘箱中烘 2h。 ⑦ 再回潮和称重：取出瓷盘，同样放于室内自然条件下冷 却 24h，然后在普通天平上称重。 如果两次质量之差超过 0.5g， 则将瓷盘再放入烘箱， （6） 重复 和（7）步骤，直至两次质量之差不超过 0.5g 为止。以最低的质量 即为半干样品的质量。将半干样品粉碎至一定细度即为分析样品。 ⑧ 计算公式与结果表示：乎规定） 。此外，对某些饲料在饲喂后能出现问题，故该饲料样本 应长期保存，备作考验。但一般情况下原料样本应保留两周，成品 样本应保留一个月（与对客户的保险期相同） 。有时为了特殊目的 饲料样本有需保留 1～2 年的。 这种样本的保存可用锡铝纸软包装， 经抽真空充氮气后密封，在冷库中保存备用。专门从事饲料质量检 验监督机构的样品保存期一般为 3～6 个月。 饲料样品应由专人采集、登记、制备与保管。 实验二 饲料中干物质（吸附水）的测定w（初水分）= m 新鲜样品 - m 半干样品 / m 新鲜样品第五节 样本的登记与保管一、样品的登记 制备好的样本应置于干燥且洁净的磨口广口瓶中，作为分析 样本。瓶外应标明样本名称及采样时间、采样人等，不同的饲料应 当额外加以标明秸秆类饲料的收获期，调制与储存方法，青饲料的 生长阶段及收获期，青贮料的原料种类及收获期，青贮方式，品质 鉴定结果和混合比例，根茎类饲料的收获期，储藏时间与条件等均 应加以记录说明。要求样本登记内容如下： 1．样本名称（一般名称、学名和俗名）和种类（必要时要注 明品种、质量等级） 。 2．生长期（成熟程度） 、收获期和茬次。 3．调制和加工方法即贮存条件。 4．外观形状及混杂度。 5．采样地点和采集部位。 6．生产厂家和出厂日期。 7．重量。 8．采样人和分析人姓名。 饲料样本都由专人采取、登记、粉碎和保管，如需测定氨基 酸和矿物质等项目的原料（样本）应用高速粉碎机，粉碎细度为 100 目。其它样品可用圆环式或自制链片式粉碎机，粒度 40～60 目，样本量一般在 1 千克以上。 二、样品的保管 1． 保存条件 样品应避光保存，并尽可能低温保存，并做好防虫措施。 2．保存时间 样本保存时间的长短应有严格规定，这主要取决于原料更换 的快慢及买卖双方谈判情况（如水分含量过高，蛋白质不足是否合饲料中的水分包括游离水、吸附水和结合水。游离水是指游 离在细胞内和细胞间的水；吸附水是指吸附在蛋白质、淀粉及细胞 膜上的水；结合水是指结合在蛋白质等大分子物质中的水。 一、适用范围 本方法适用于测定配合饲料和单一饲料中水分的含量， 但用做 饲料的奶制品、动植物油脂和矿物质除外。 二、实验仪器 1．实验室用样品粉碎机或研玻； 2．分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 3．分析天平。感量 0.0001g； 4．称量瓶。玻璃或铝制，直径 40mm 以上，高度 25mm 以下； 5．电热式恒温烘箱。可控制温度为（105±2）℃； 6．干燥器。用变色硅胶或氯化钙做干燥剂。 三、测定原理 样品在（105±2）℃烘箱内，在一个大气压下烘干，直至恒 重，丢失的质量为水分，剩余的质量为干物质。在该温度下干燥， 不仅饲料中的吸附水被蒸发，同时一部分胶体水分也被蒸发，另外 还有少量挥发油挥发。 含水分多的新鲜饲料，须先测定初水后制成风干样品，再在 （105±2）℃烘箱中，烘至恒重，丢失的质量为吸附水的含量。同 样，烘后样品的质量为饲料干物质的含量。 四、操作步骤 1、将洗净的称量瓶放在（105±2）℃的烘箱内半开盖烘 1 小 时，用坩埚钳取出称量瓶，并移入干燥器中冷却约 30 分钟， （将盖 盖严）称重（准至 0.0002 克） 。重复以上操作，直至两次质量之差 小于 0.0005g 为恒重。 2、 在已知重量的称量瓶中称取 2 份平行试样， 每份 2～5g （含 水量 0.1g 以上，样厚 4mm 以下） ，准至 0.0002 克，将盛有样品的 称量瓶放入（105±2）℃烘箱内，将瓶盖揭开少许。 3、样品在烘箱内烘 5～6 小时后紧盖瓶盖，移入干燥器中， 冷却 30 分钟，进行第一次称重。 4、按照上述方法，继续将称量瓶放入烘箱内，烘 1 小时后， 进行第二次称重，直到前后两次称重的差数在 0.002 克。 五、结果计算样品（105±2）℃烘干前后重量之差（克） 吸附水= ————————————————————×100% 样品质量（克）六、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。两 个平行样测定值之差不得超过 0.2%，否则重做。 当水分含量在 10％以上时，允许相对偏差为 1％； 当水分含量在 5％～10％时，允许相对偏差为 3％； 当水分含量在 5％以下时，允许相对偏差为 5％。 七、注意事项 1． 如果是新鲜样品，则水分含量为初水分加吸附水。 2． 加热时试样中有挥发性物质可能与试样中水分一起损 失，例如青贮饲料中的 VFA。 3． 含脂肪高的样品，烘干时间长反而增重，应以增重前一 次称量计算。 4． 含糖分高的、易分解或易焦化样品，应使用减压干燥法 （70℃，80kPa 以下，烘干 5h， ）测定水分。 实验三 饲料中粗蛋白质的测定 饲料中的含氮物质包括纯蛋白质和氨化物(氨化物有氨基酸、 酰胺、硝酸盐及铵盐)，两者总称为粗蛋白质。 测定粗蛋白质的方法很多，有间接法和直接法。间接法是根 据每种蛋白质的含氮量是恒定的， 通过测定样品中含氮量推算蛋白 质含量的方法。常用的有：K 氏定氮法、杜马斯法、强碱直接蒸馏 6法、纳氏试剂比色法和靛粉蓝比色法。直接方法是根据蛋白质的物 理和化学性质直接测定蛋白质含量的方法，其中有紫外吸收法、酚 试剂法，双缩脲法、染料结合法（DBL 法） 、茚三酮法、折射率法、 放射性同位素法、比浊法等。在这些方法中，K 氏定氮法是 19 世 纪建立的经典方法，由于设备比较简单易得，结果可靠，被广泛应 用于一般试验室，并称之为标准方法。K 氏定氮法是 1883 年丹麦 化学家 Kjeldahl（凯道尔）首先提出的，故称之为凯氏法，由于 后来又经过 Gunning（岗宁）和 Arndel（阿罗得）进行补充，故又 称之为凯道尔—岗宁—阿罗得法。经典的 K 氏定氮法操作费时，因 此，人们在经典方法的基础上选择催化剂，加快分析速度，改进仪 器装置，研制出蛋白质测定仪，如瑞典 Tecator 1035 型自动定氮 分析仪，国产 KDN-01 蛋白质测定仪等。 一、 适用范围 本方法适用于配合饲料、 浓缩饲料和单一饲料等粗蛋白质的测 定。 二、 测定原理 各种饲料中的有机物质在加速剂（硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠） 的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和氨态氮都转化为氨 气， 氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵； 而非含氮物质， 则以二氧化碳、 水、二氧化硫的气体状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏， 释放出的氨气，通过蒸馏，氨气随水蒸汽顺着冷凝管流入硼酸吸收 液中，并与之结合成硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿作混合指示 剂， 用盐酸标准液滴定， 求出氮的含量。 再乘以一定的换算系数 （一 般为 6.25） ，即可得出样本中粗蛋白质含量，上述过程中的化学反 应如下： 2CH3CHNH2COOH+13H2SO4→(NH4)2SO4↑ +12SO2+16H2O+6CO2↑ （NH4）2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO4 H3BO3+NH3→NH4H2BO3 NH4H2BO3+HCl→NH4Cl+H3BO3 三、仪器设备 1．实验室用样品粉碎机或研玻； 2．分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 3．分析天平。感量 0.0001g； 4．消煮炉或电炉； 5．半微量滴定管； 6．凯氏烧瓶 100ml 7．容量瓶 100mL； 8．三角瓶 100mL； 9．移液管 10mL。 10． 氏蒸馏装置：电炉、蒸气发生器、螺丝夹、小玻杯及 棒状玻塞、反应室、反应室外层、橡皮管及螺丝夹、 冷凝器、蒸馏液接收三角瓶。 四、试剂及配制 1． 浓硫酸（GB625） 。化学纯； 2． 硫酸铜（GB665） 。化学纯； 3． 硫酸钠 （HG 3－920） 化学纯或硫酸钠 。 （HG 3－908） 。 化学纯； 4． 40％氢氧化钠溶液。40g 氢氧化钠溶于 100mL 水中； 5． 2%硼酸溶液。2g 硼酸（GB628）溶于 100mL 水中； -1 6． 0.05 mol·L 盐酸标准滴定溶液。 配制： -1 C(HCl)=0.1mol·L :8.3ml 盐酸 （GB622，分析纯）注入 1000mL 水中。 -1 C(HCl)=0.2mol· :16.7ml 盐酸 L （GB622， 分析纯） 注入 1000mL 水中。 -1 C(HCl)=0.05 mol· :4.2 ml 盐酸 L （GB622， 分析纯） 注入 1000mL 水中。 标定： 准确称取约 0.1g 于 270～ 300℃灼烧到恒重的基准无水碳酸 钠，称准至 0.0001g，溶于 50ml 水中，加 10 滴甲基红-溴甲酚绿 混合指示剂，用配好的盐酸溶液滴定到溶液由绿色变为暗红色，煮 沸 2min 冷却后继续滴定至溶液呈暗红色，同时做空白试验。 CHCl= mNa2CO3 /（V1-V2）× 0.05299 V1：滴定试样盐酸用量（mL） ； V2：滴定试样盐酸用量（mL） ； 0.05299：与 1ml 1mol/L HCl 标准液相当的无水碳酸钠的克 数。7．甲基红一溴甲酚绿混合指示剂。0.1%甲基红乙醇溶液与 0.5%溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合。 五、操作步骤 （一）试样的消化： 1．称样：称取样本 0.5～1 克（含氮量 5－80mg） 。准确至 0.0002g，将称样纸卷成筒状，小心无损地将样本放入 100 毫升洗 净烘干的凯氏烧瓶中。 2．加试剂：加入无水硫酸钠（或无水硫酸钾）6 克，五水硫 酸铜 0.4 克，与试样混和均匀，再加浓硫酸 10 毫升和玻璃珠 2 粒。 3．消化：将凯氏烧瓶放在通风厨里的电炉上加热。开始加热 时，先用小火，以免瓶内产生大量泡沫，溢出瓶口。等泡沫停止产 生后， 再加强火力。 消化时经常转动烧瓶， 使全部样本浸入硫酸内。 如有黑泡油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗，再继续加 热消化。如有黑碳粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量浓 硫酸，继续加热，直到瓶内溶液澄清，消化才告完毕。 试剂空白测定可另取 100 毫升凯氏烧瓶一个，加入无水硫酸 钠 6 克，硫酸铜 0.4 克及浓硫酸 10 毫升；同样加热消化，直至瓶 内溶液澄清。此溶液的氮量即试剂中的含氮量，必须由样品测定结 果中减去。 （二）氨的蒸馏 1．定容：凯氏瓶冷却后加蒸馏水 20 毫升，摇匀，然后将烧 瓶中溶液无损移入 100 毫升容量瓶内，用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶数 次，洗液亦注入容量瓶中，冷却后，加入蒸馏水稀释至容量瓶刻度 处，混匀后共测定氮用。 2．准备吸收液：将凯氏半微量定氮仪装置准备妥当后，先用 蒸气洗涤一次。用量筒量取 15 毫升 2%硼酸溶液加入 150 毫升三角 瓶内，再加入甲基红一溴甲酚绿混合指示剂 2 滴，置于蒸馏装置的 冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液内。 3．蒸馏：煮沸蒸气发生瓶中蒸馏水。用移液管量 10 毫升样 本消化液，由凯氏蒸馏装置上的小玻璃瓶注入反应室，再以少量蒸 馏水冲洗小杯，将小玻杯的棒状玻璃塞塞紧，使之不漏气，取 10 毫升饱和氢氧化钠溶液，小心地轻轻提起棒状玻塞，使氢氧化钠流 入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水以洗涤碱液，部分水留 于小玻杯，以防漏气，夹紧外套出口的橡皮管，开始蒸馏。蒸馏 4 分钟，移动三角瓶，使硼酸液面离开冷凝管，继续蒸馏 1 分钟，并 用蒸馏水冲洗管口外壁，洗液均流入三角瓶内，然后停止蒸馏。 4．放出费液：蒸馏完毕后，在小玻杯中加满蒸馏水，将玻塞 提起使流入反应室中，随手夹紧橡皮管以断气源，于是反应室中残 液自动吸入反应室外层中， 如此冲洗 4 次后将外套管下端出口的橡 皮管打开，使反应室外层中的残液排出，待残液排完后，夹紧橡皮 管。 5．测定试剂空白：将试剂空白测定之消化液同样处理。 （三）滴定 -1 1． 先将半微量滴定管装备妥当， 装入 0.05mol· HCl 标准液。 L -1 将上述三角瓶移开蒸馏装置后，即以 0.01mol·L 盐酸液滴定，溶 液由蓝绿色变成灰红色为终点。 2．同样滴定试剂空白消化液。 （四）空白测定 称取蔗糖 0.5g，以代替试样，按上述方法进行空白测定，消 -1 -1 耗 0.1 mol· HCl 标准液的体积不超过 0.2mL； L 消耗 0.2mol· HCl L 标准液的体积不超过 0.3mL。 （五）蒸馏器的检查 在使用蒸馏器前须先作检查。准确称取硫酸铵 0.2g，代替试 样，按上述方法蒸馏、滴定，测得硫酸铵含氮量为 21.19±0.2%， 否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 六、结果计算（V1-V2）×C×6.25×0.0140 样本中粗蛋白质 （N×6.25） 含量%=——————————————×100% ′ W×(V /V)式中： W=样本重（克） ； V=消化液稀释容量（毫升） ； ′ V =稀释液蒸馏用量（毫升） ； -1 V2=滴定样本馏出液的 0.01 mol·L HCl 耗量（毫升） ； -1 V1=空白所用 0.01 mol·L HCl 耗量（毫升） ； C=HCl 标准溶液浓度； 6.25 是按照每 100 克蛋白质含有 16 克氮计算而得； -1 0.0140 为 1 毫升 1 mol·L HCl 标准溶液相当于 0.014 克氮。 七、重复性 7每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在 25％以上时，允许相对偏差为 1％； 当粗蛋白质含量在 10％～25％时，允许相对偏差为 2％； 当粗蛋白质含量在 10％以下时，允许相对偏差为 3％。 八、注意事项 1．消化时应经常转动凯氏烧瓶，以使消化进行的迅速完全。 2． 蒸馏完毕应先取下接收瓶， 然后关闭电源， 以免酸液倒流。 3． 一次蒸馏后必须彻底洗净碱液， 以免再次使用时引起误差。 4．含硝酸盐多的饲料，用此法测定粗蛋白时，很多硝酸盐还 原而损失。 5．各种饲料的粗蛋白质中氮的含量，差异很大，变异范围约 在 14.7～19.5%之间，平均为 16%。凡饲料的粗蛋白质中实际含量 尚未确定的，可用 6.25 平均系数来乘氮量换算成粗蛋白质量。凡 饲料的粗蛋白质中实际含量已经确定的， 可用它们的实际系数来换 算。例如荞麦、玉米系数 6.00，箭豌豆、大豆、蚕豆、燕麦、小 麦、黑麦用系数 5.70，牛奶用系数 6.38。 6．CH3CHNH2COOH 为α —氨基酸，代表饲料中粗蛋白质分解后 的一种简单氨基酸，是饲料中有机态氮物的来源之一。 7．加入无水硫酸钠（或无水硫酸钾）的目的是提高浓硫酸的 沸点，使消化效力提高，纯硫酸的沸点 317℃，加入无水硫酸钾后， 硫酸沸点可增至 325—341℃。 K2SO4+H2SO4→2KHSO4 2KHSO4→K2SO4+ H2O+SO3 在消化过程中，随着硫酸的不断分解，水分的不断蒸发，硫 酸钾的浓度不断增大，则沸点升高，加速了对有机物的分解作用。 无水硫酸钠的作用同无水硫酸钾，但不如无水硫酸钾的作用 好。 8．硫酸铜为还原催化剂，其反应原理如下： 2CuSO4+C(有机物质)→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4+ 2H2SO4→2CuSO4+2H2O+2H2O + SO2↑ 在有机物全部消化后，溶液具有清澈的蓝绿色。硫酸铜除具 有催化作用外，并可在下一步蒸馏时做碱性反应的指示剂。 实验四 饲料中粗脂肪的测定 饲料脂肪的测定，脂肪是由碳、氢、氧三种化学元素组成。 它包括真脂肪和类脂肪。真脂肪由脂肪酸与甘油结合而成的，类脂 肪除了脂肪酸、甘油以外还有其他含氮物质。 饲料中的脂肪不仅是动物体热能的重要来源，而且也是脂溶 性维生素的良好溶剂，同时，脂肪的某些不饱和脂肪酸还是动物不 可代替的营养物质。因此，测定饲料中脂肪的含量，对于评定饲料 营养及其合理利用是必要的。 饲料脂肪的测定，通常是将试样放在特制的仪器中，用脂溶 性溶剂（乙醚、石油醚、氯仿等）反复抽提，可把脂肪抽提出来， 浸提出的物质除脂肪外，还有一部分类脂物质也被浸出，如游离脂 肪酸、磷脂、蜡、色素以及脂溶性维生素等，所以称为粗脂肪。 测定粗脂肪的方法常用的有油重法、残余法、浸泡法等。本 节仅介绍残余法。 一、适用范围 本方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩料和单一饲料中 粗脂肪的测定。 二、测定原理 利用脂肪不溶于水而溶于有机溶剂的特性，用乙醚、石油醚、 汽油等有机溶剂， 反复浸提浸提饲料样品， 使其中的脂肪溶于乙醚， 根据试样质量和残渣质量之差计算饲料中粗脂肪的含量， 由于浸提 物中除了真脂肪以外，还有固醇、石蜡、磷脂、叶绿素、色素、脂 溶性维生素等，故称之为粗脂肪。 三、仪器 1． 实验室用样品粉碎机或研玻； 2． 分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 3． 分析天平。感量 0.0001g； 4． 电热恒温水浴锅。室温至 100℃； 5． 恒温烘箱； 6． 干燥器。用变色硅胶或氯化钙做干燥剂； 7． 滤纸。中速、脱脂； 8． 索氏抽脂器： 抽提瓶 （盛醚瓶） 抽提管 、 （浸提管） 、 虹吸管、冷凝管。 四、试剂 无水乙醚。分析纯。五、操作步骤 1．准备：将索氏抽脂器洗净（内放沸石数粒） ，然后按装在 水浴锅上，切忌仪器各连接处漏气。洗净称量瓶并烘干备用。 2． 称样： 在分析天平上称取脱脂滤纸的重量， 然后称试样 1～ 5 克（准确至 0.0002g） ，二者之差即为所称取的样品重（m 样） 。 3． 烘样： 将脱脂滤纸上的样品小心包好， 并用铅笔标上号码， 将滤纸包放在称量瓶中置于（105±2）℃烘箱中烘至恒重（m1） 。 然后， 把滤纸包放入浸提管中， 将全部抽提器安置妥当， 注入乙醚， 滤纸包的长度应以全部浸泡于乙醚中为准。 4．浸提：加热水浴锅（蒸馏水） ，使温度保持在 60～75℃， 乙醚蒸发，至冷凝管处冷凝为液体，流回到浸提管中。样品受乙醚 浸提，其中所含脂肪即被溶解。当浸提管中乙醚积聚相当高度时， 即由虹吸管回流入盛醚瓶。控制乙醚回流次数约 10 次/h，提取时 间 4～10h，以浸提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为终点。 5．烘样、称重：提取完毕后，移去上部的冷凝管，取出滤纸 包，在室温放置一段时间使乙醚全部挥发，然后放在原称量瓶中置 于（105±2）℃烘箱中烘至恒重（m2） ，减少的质量即为粗脂肪的 量。 6．回收乙醚：浸提完毕后，安装好继续蒸馏，浸提管中乙醚 达到一定高度时停止蒸馏，拿下浸提管稍倾斜，使管中乙醚流入回 收瓶，直至盛醚瓶中只有粗脂肪和极少量乙醚。 六、结果计算 m1 - m2 粗脂肪% =————×100% m样 七、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗脂肪含量在 10％以上时，允许相对偏差为 3％； 当粗脂肪含量在 10％以下时，允许相对偏差为 5％。 八、注意事项 1． 用滤纸包样品时，需先用肥皂把手洗净或戴手套。 2． 使用乙醚时，严禁明火，保持室内良好通风，抽提时防 止乙醚过热而爆炸。 3． 乙醚或饲料中含有水分，能使饲料中部分糖溶解，随脂 肪浸出，影响测定结果，同时，饲料中有水分，乙醚不 易穿透。因此，抽提前必须粉碎烘干。 4． 浸提结束，需待滤纸或盛醚瓶中的乙醚挥发后，方能放 入烘箱中烘干，否则乙醚易燃烧掉样品。 实验五 饲料中粗灰分的测定试样经 550℃灼烧完全后，余下的残留物质（如氧化物和盐） 称为灰分。灰分有水溶性、水不溶性、酸溶性和酸不溶性。水溶性 灰分大部分是钾、钠、钙、镁等氧化物和可溶形盐、水不溶性灰分 除泥沙外，还有铁、铝等的氧化物和碱土金属的碱式磷酸盐。酸不 溶性灰分大部分为污染掺入的泥沙和原来存在于动植物组织中的 经灼烧生成的二氧化硅。 饲料中各种矿物质对畜禽营养具有十分重要的意义，同时，植 物性饲料中矿物质元素的含量和种类变化很大。因此，具体分析各 地区、各生产阶段、各种饲料的矿物质成分，对于合理地饲养家畜 是非常必要的。 一、适用范围 本方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩料和单一饲料中 粗灰分的测定。 二、测定原理 试样在 550℃灼烧后，其中的有机物灼烧后氧化逸出，所剩 下的白色或灰白色残渣就是灰分，然后定量即得灰分重。残渣中主 要是氧化物、盐类等矿物质，还有少量泥砂和杂质，故称粗灰分。 三、实验仪器 9． 实验室用样品粉碎机或研玻； 10． 分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 11． 分析天平。感量 0.0001g； 12． 高温电炉。可控温度（550±20）℃； 13． 坩埚。30mL，瓷质。 14． 干燥器。用变色硅胶或氯化钙做干燥剂。 四、操作步骤 1．烘坩埚：将带盖坩埚放入茂福炉内，在（550±20）℃温 度下烧灼 30 分钟（坩埚盖打开一部分） ，待炉温降至低于 200℃， 8将坩埚移入干燥器中，冷却 30min 后称重。再重复灼烧，冷却、称 重，直至两次质量之差小于 0.0005g 为恒重。 2．称样：在已知重量的坩埚内，称取 2～5 克试样（灰分质 量应在 0.05g 以上） 。 3．炭化：在电炉上低温炭化至无烟为止。 4．灰化：炭化后将坩埚移入高温炉中，在（550±20）℃温 度下烧灼 3-6h。待炉温降至低于 200℃，取出，在空气中冷却约 1min，移入干燥器内冷却 30 分钟，称重。再同样灼烧 1h，冷却、 称重，直至两次质量之差小于 0.0001g 为恒重。 五、结果计算 坩埚及粗灰分重-坩埚重 粗灰分（%） = —————————————×100% 坩埚及样重-坩埚重 六、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗灰分含量在 5％以上时，允许相对偏差为 1％； 当粗灰分含量在 5％以下时，允许相对偏差为 5％。 七、注意事项 -1 1． 新坩埚编号， 将带盖的瓷坩埚洗净烘干后， 用钢笔蘸 5g· L 氯化铁墨水溶液（称 0.5gFeCl3·H2O 溶于 100mL 蓝墨水中）编号， 然后在高温炉中 550℃灼烧 30min 即可。 2．试样开始炭化时，应打开部分坩埚盖，便于气流流通；温 度应逐渐上升，防止火力过大而使部分样本颗粒被逸出的气体带 走。 3．为了避免试样氧化不足，不应把试样压得过紧，试样应松 松地放在坩埚内。 4．炉温不得超过 600℃，否则某些易挥发的元素，象 S、P 等会损失，而影响测定结果。 5．灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关，含铁高时为红棕 色，含锰高为淡兰色。但有明显黑色炭粒时，为炭化不完全，应延 长灼烧时间。 实验六 饲料中钙的测定 一、适用范围 本方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩料和单一饲料中 钙的测定。 二、测定原理 将试样中有机物质破坏，钙变成溶于水的离子，并与盐酸反 应生成氯化钙，然后在溶液中加入草酸铵溶液，使钙成为草酸钙白 色沉淀，再用硫酸溶液溶解草酸钙沉淀，再用高锰酸钾标准溶液滴 定游离的草酸根离子。根据高锰酸钾标准溶液的用量，可计算出试 样中钙的含量。主要化学反应式如下： CaCl2+（NH4）2C2O4→CaC2O4↓+2NH4Cl CaC2O4+H2SO4→CaSO4+H2C2O4 2KMnO4+5H2C2O4+3H2SO4→10CO2↑ +2MnSO4+8H2O+K2SO4 三、仪器和设备 15． 实验室用样品粉碎机或研玻； 16． 分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 17． 分析天平。感量 0.0001g； 18． 高温电炉。可控温度（550±20）℃； 19． 坩埚。瓷质。 20． 容量瓶。50，100，1000mL； 21． 移液管。10，20mL； 22． 可调温电炉：1000W。 23． 酸式滴定管。25 或 50mL； 24． 玻璃漏斗。直径 6cm； 25． 定量滤纸； 26． 烧杯。200mL； 27． 凯式烧瓶。 四、试剂 1． 2． 3． 4．盐酸溶液：1：3（V：V） ； 硫酸溶液：1：3（V：V） ； 氨水溶液：1：1（V：V） ； -1 42g· 草酸铵溶液： L 溶解 42g 分析纯草酸铵 （HG 3-976） 于水中，稀释至 1000mL； 5． 甲基红指示剂：0.1g 分析纯甲基红（HG 3-958）溶于100mL95%乙醇中； 6． 浓硝酸； 7． 氨水溶液：1：50（V；V） ； -1 8． 高锰酸钾标准溶液：C（1/5 KMnO4）=0.05mol·L 。 配制： 称取高锰酸钾（GB643）约 1.6g，溶于 1000mL 蒸馏水中，缓 缓煮沸 10min，冷却置于阴暗处静置 1～2d，过滤后保存在棕色瓶 中。 标定： 称取草酸钠（基准物，105℃干燥 2h，存于干燥器中）0.1g， 称准至 0.0001g，溶于 50mL 蒸馏水中，再加硫酸 10mL，将此溶液 加热至 75～85℃。用配制的高锰酸钾溶液滴定。溶液出现粉红色 且 1min 不褪色为终点，滴定结束时，溶液温度在 60℃以上。同时 做空白试验。计算如下： m C = ———————— （V-V0）×0.0670 m：草酸钠的质量（g） ； V：消耗高锰酸钾溶液的体积（mL） ； V0：空白消耗高锰 酸钾溶液的体积（mL） ； 0.0670：1ml 高锰酸钾标准溶液相当 于草酸钠的克数。 五、操作步骤 1．灰分的制备与溶解：用已测定灰分的样本。在盛灰坩埚中 加入（1：3）的 HCl 10mL 和浓硝酸数滴，小心煮沸。将此溶液转 移到 100mL 容量瓶中，用热蒸馏水洗涤杯及滤纸数次，待滤液冷至 室温后，定容、摇匀，为试样分解液。此供试液可用以测定钙、磷。 2． 草酸钙沉淀： 准确移取试样分解液 10～20 mL （含钙量 20mg 左右）于烧杯中，加蒸馏水 100mL，2 滴甲基红指示剂，溶液即成 为红色。滴加氨水（1：1）至溶液为橙色，再加盐酸溶液使溶液恰 变红色 （PH 约为 2.5～3.0） 小心煮沸， 。 慢慢滴加草酸铵溶液 10mL， 并不断搅拌。 如溶液变橙色， 应补滴盐酸溶液至红色。 煮沸数分钟， 放置过夜使沉淀陈化（或在水浴上加热 2h） 。 3． 草酸钙沉淀的洗涤：次日用精密定量滤纸过滤， 弃去滤液， 草酸钙沉淀用（1：50）氨水溶液多次冲洗。直至草酸钙全都洗净 为止（测定草酸铵洗净的方法：用试管接滤液 2～3mL，在滤液中 加（1：3）硫酸数滴，加热试管，再加一滴高锰酸钾标准溶液，如 呈微红，30 秒钟不褪色即可。。 ） 4．沉淀的溶解与滴定：将滤纸和沉淀一起放入原烧杯中，而 后加（1：3）硫酸 10mL，蒸馏水 50mL，加热到 75～80℃。立即用 -1 0.05 mol·L 高锰酸钾溶液滴定，直至溶液呈微红色，且 30s 不褪 色为终点。 5．空白：在干净烧杯中加滤纸一张， 1：3 的硫酸 10mL，蒸 -1 馏水 50mL，加热到 75～80℃。用 0.05 mol·L 高锰酸钾溶液滴定， 直至溶液呈微红色，且 30s 不褪色为终点。 六、结果计算 （V3-V0） ·c·0.02 V1 Ca（%）=———————————— ×——×100% m V2 式中：m=样本重（克） V1=样本灰化液稀释体积（mL） V2=测定钙时样本溶液移取体积（mL） V3=滴定样本溶液消耗 KMnO4 标准溶液体积（mL） -1 c=KMnO4 标准溶液浓度（mol·L ） 0.02 为与 1.00mL KMnO4 标准溶液[C 1/5 KMnO4） （ =1.000 -1 mol·L ]相当的以克表示的钙质量。 七、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 当钙含量在 5％以上时，允许相对偏差为 3％； 当钙含量含量在 5％～1%时，允许相对偏差为 5％。 当钙含量在 5％以下时，允许相对偏差为 10％。 七、注意事项 1． 高锰酸钾溶液浓度不稳定，至少每月需要标定一次。 2． 每种滤纸空白值不同，消耗高锰酸钾标准溶液的量也不 同，至少每盒滤纸做一次空白测定。 3． 洗涤草酸钙沉淀时，必须沿滤纸边缘向下洗，使沉淀集 中于滤纸中心，以免损失。每次洗涤过滤时，都必须等 上次洗涤液完全滤净后再加，每次洗涤不得超过漏斗体 积的 2/3。 9实验七饲料中磷的测定一、适用范围 本方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩料和单一饲料中 -1 总磷量的测定。测定范围磷含量 0～20μ g·mL 。 二、测定原理 将试样中有机物质破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒 钼酸铵处理，生成黄色的磷-钒-钼酸复合体（ （NH4） ，在波长 420nm 下进行比色测定。根据所产生 3PO4NH4VO3·16MoO3） 黄色的深浅，应用比色计，即可计算样本中的磷量。 此法测得为总磷量，其中包括动物难以吸收的植酸磷。 三、仪器 28． 实验室用样品粉碎机或研玻； 29． 分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 30． 分析天平。感量 0.0001g； 31． 分光光度计，有 10mm 比色池，可在 420nm 下进行 比色测定； 32． 高温电炉。可控温度（550±20）℃； 33． 坩埚。瓷质。 34． 容量瓶。50，100，1000mL； 35． 刻度移液管。1.0，2.0，3.0，5.0，10mL； 36． 可调温电炉：1000W。 37． 酸式滴定管。25 或 50mL； 38． 玻璃漏斗。直径 6cm； 39． 定量滤纸。 四、试剂 1． 盐酸（GB 622，化学纯）溶液。1：1 水溶液（V：V） ； 2． 浓硝酸（GB 626） 。化学纯； 3． 钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵（HG 3-941，分析纯） 1.25g，加硝酸 250mL。另取钼酸铵（GB657，分析纯） 25g， 加蒸馏水 400mL 溶解， 在冷却条件下将此溶液倒入 上溶液，并加蒸馏水调成 1000Ml，避光保存，如生成沉 淀则不能使用。 4． 标准磷溶液：称取 105℃干燥 2h 的优级纯磷酸二氢钾 （KH2PO4） 0.2195 克， 用水溶解后移入 1000mL 容量瓶中， 加硝酸 3mL，用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此溶液为 50 -1 μ g·mL 的磷标准液。 五、操作步骤 -1 1．标准曲线绘制：准确移取磷标准溶液（50μ g·mL ）0、 1.0、2.0、5.0、10.0、和 15.0mL 于 50mL 容量瓶中，各加入钒钼 酸铵显色剂 10mL。用蒸馏水稀释至刻度摇匀，放置十分钟以上， 以 0mL 溶液为参比，用 10mm 比色杯，在波长 420nm 下，用分光光 度计测定各溶液的吸光度。以磷含量（毫克数）为横坐标，相应的 吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 2．试样测定：精确移取试样分解液 1～10mL（含磷在 50～750 μ g）于 50mL 容量瓶中，加显色剂 10mL，按五、1 进行比色测定， 以空白为参比， 测得试样分解液的吸光度。 由标准曲线查出磷含量， 并换算成总磷量。 六、计算 a×V/V1 磷含量（微克/克样品）=—————— m 式中：a——为标准曲线上查出的含磷量（mg） ； m——样品质量（g） ； V1——移取试样分解液的体积（mL） ； V——试样分解液的总体积（mL） 。 七、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 含磷量在 0.5％以上（含 0.5%）时，允许相对偏差为 3％； 含磷量在 0.5％以下时，允许相对偏差为 10％。 八、注意事项 1． 比色时，待测液磷含量不宜过浓，最好控制在 1mL 含磷 0.5mg 以下。 2． 待测液加入显色剂后应静置 10min 再进行比色，但不能 静置过久。 实验八 饲料中粗纤维的测定纤维素是植物细胞壁的主要成分，它是高分子化合物，不溶于 水和任何有机溶剂。在稀酸和稀碱中也相当稳定，根据这个性质， 测定时先将其与淀粉、蛋白质等物质分离，然后定量。常用的测定 方法有：酸碱洗涤法、中性洗涤剂法、酸性洗涤剂法等。本节主要 学习酸碱洗涤法。 一、适用范围 本方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩料和单一饲料 中粗脂肪的测定。 二、测定原理 用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去 醇可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量称为粗纤维。它不 是一个确切的化学实体，只是在公认的强制规定下，测出的概略养 分。其中以纤维素为主，并有少量半纤维和木质素等。 在用此法处理饲料时， 硫酸可水解饲料中全部淀粉和大部分半 纤维素，并可水解饲料中大部分蛋白质，氢氧化钠可溶解酸不溶解 的大部分半纤维素和水解饲料中大量木质素。 酒精处理饲料可溶解 饲料中的树脂、单宁和色素以及剩余的脂肪和蜡。 饲料中粗纤维的测定方法并非一个精确方法，所测结果只是 一个公认的强制条件下测定的概略养分， 粗纤维并不是一个固定的 （或明确的） 化学实体。 在测定粗纤维过程中相当数量的木质素 （碳 水化合物成分中惰性最大的一种）溶入煮沸的氢氧化钠溶液，因而 饲料中部分木质素并不包括在饲料粗纤维的测定数值内， 而被计算 入饲料的无氮浸出物结果中， 由此可见测出的饲料粗纤维量不包括 饲料中全部最粗糙的有机物质。 由于粗纤维本身是在强制规定下测得的概略养分，目前尚无 更好的测定粗纤维的方法， 因此现时已改用中性洗涤纤维和酸性洗 涤纤维测定方法代替粗纤维测定法的趋势， 但在大部分地区的饲料 概略营养成分测定法中仍沿用粗纤维测定法。 三、仪器 40． 实验室用样品粉碎机或研玻； 41． 分析筛。孔径 0.45mm（40 目） ； 42． 分析天平。感量 0.0001g； 43． 电热恒温烘箱。可控制温度在（130±2）℃； 44． 高温炉。可控温度 550～600℃； 45． 消煮器。有冷凝球的高型烧杯（500mL）或有冷凝 管的锥形瓶； 46． 抽滤装置：抽真空装置、吸滤瓶及漏斗； 47． 滤器： 使用 200 目不锈钢网或尼龙滤布， G2 号玻 或 璃滤器； 48． 古氏坩埚：30mL，预先加入酸洗石棉悬浮液。再抽 干，以石棉厚度均匀、不透光为宜； 49． 红兰两色石蕊试纸； 50． 干燥器。用变色硅胶或氯化钙做干燥剂。 四、试剂及配制 -1 1．硫酸溶液（0.128±0.005mol·L ） ：吸取比重 1.84 的浓 硫酸 （GB625） 6.89ml， 注入 800mL 蒸馏水中， 冷却后稀释至 1000mL。 用氢氧化钠标准溶液标定。 -1 2．氢氧化钠溶液（0.313±0.005 mol·L ） ：迅速称取分析 纯氢氧化钠 （GB629） 12.5g， 溶于 100mL 水中， 准确定容至 1000mL。 用基准邻苯二甲酸氢钾法标定。 3．酸洗石棉：将中等长度酸洗石棉（HG 3-1062）在 1：3 盐 -1 酸中煮沸 45min， 过滤后于 550℃灼烧 16h， 0.128±0.005 mol· 用 L 硫酸溶液浸泡且煮沸 30min,过滤，用水洗净酸；同样用 0.313± -1 0.005 mol·L 氢氧化钠溶液煮沸 30min,过滤，用少量硫酸溶液洗 一次，再用水洗净，烘干后，于 550℃茂福炉内灼烧 2h，其空白试 验结果为每克石棉含粗纤维小于 1mg。 4．95%的乙醇:化学纯。 5．无水乙醚：化学纯。 6．正辛醇：分析纯（防泡剂） 。 五、操作步骤 1、酸处理：称取 2 克样本（m） ，准至 0.0002g，用乙醚脱脂 （含脂肪大于 10％的样本必须脱脂，含脂肪小于 10％的样本可不 脱脂） 或用测定脂肪后的残渣， 置于洗净烘干的 500mL 刻度烧杯中， -1 加煮沸的 0.128±0.005 mol·L 硫酸溶液 200mL 和 1 滴正辛醇， 立即加热，使之在 2min 内沸腾并保持微沸 30 分钟。在煮沸期间， 注意保持酸浓度不变。 试样不应该离开溶液沾到瓶壁上。 随后抽滤， 残渣用沸蒸馏水洗至中性（用兰色石蕊试纸检查，遇酸变红） 。 2、碱处理：将上述不溶物放入原烧杯，内加已沸腾的氢氧化 10钠溶液（0.313±0.005 mol·L ）200mL 和 1 滴正辛醇，立即加热， 使之在 2min 内沸腾并保持微沸 30 分钟。在煮沸期间，注意保持氢 氧化钠浓度不变。 3、抽滤：将烧杯中的残渣全部转移至事先铺好石棉的古氏坩 埚中抽滤（上下铺两层玻璃纤维有助于过滤） ，先用 25mL 硫酸溶液 洗涤，将残渣无损失的转移到坩埚中，用沸蒸馏水洗至中性（用红 色石蕊试纸检查，遇碱变兰） ，再用 15mL95%的乙醇洗涤，抽干。 4、烘干、灰化：将坩埚置于（105±2）℃烘箱中烘 2h，取出 干燥器中冷却至室温，称重（m1） 。再于（550±25）℃高温炉中灼 烧 30min，待炉温下降至 200℃以下时，打开炉门，取出坩埚，置 于干燥器内冷却至室温后称重（m2） 。 六、结果计算 m 1- m 2 粗纤维（%）=————×100% m 七、重复性 每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗灰分含量在 10％以上时，允许相对偏差为 4％； 当粗灰分含量在 10％以下时，允许相对偏差为 0.4％。 八、注意事项 1、酸碱处理必须严格遵守处理时间及浓度要求。 2、处理后静置时间不要太长，以免引起误差。原则上待饲料 颗粒沉淀下来，即可抽滤。 3、碱处理时，烧杯有暴跳现象，应加以注意。 4、 烧杯壁上粘着的饲料残渣应洗涤干净， 转移残渣及抽滤时， 勿使损失。-111}