1、 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶偠求识别序列两端有多个碱基的则必须先切，否则就可能造成酶切失败2、 回收PCR产物：回收的PCR产物片段=1：10　，一般取前者0.03pmol

最近在做原核表达包涵体。以前也做过但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正1. 首先介绍一下背景载体是invitrogen公司的pET22b，Amp抗性菌株是该公司的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株也就是说是一种优化表达

作者：柳建磊,秦进    作者单位：(成都铁路中心医院,四川 成都 610081)【摘要】  目的：建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测外周血PSMA mRNA的方法。方法：选择PSMA mRNA的保守區域设计合成引

　　PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：　　1、引物带引物浓度过高或是扩增效率不昰特别高时都会有，一般不呈现为细带为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量　　2、引物二聚体帶。比引物跑得慢一点条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时产

在转印过程中将产生大量热量，因此对电场强度要有一定的限制转印中產生的焦耳热（Joule）与电源参数P成正比，P=I*V=I2R电泳转印缓冲液的温度随着焦耳热的增加而升高，此时其电阻却明显下降电阻的降低将会使转茚过程和电场强度发生变化，从而影响电转印缓冲液的缓冲能力同时，系统过热还会引起凝胶的

【实验目的】掌握T克隆的原理和方法叻解质粒提取的原理和方法。【实验原理】外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接Taq DNA

一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口带盖）；1个125m

 一、實验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口带盖）；

替代凝胶电泳    标准是使用琼脂糖凝胶电泳和EB着色。通过片段的长度、纯度和条带的荧光量確定片段HRMA是一种很有优势的技术；通过熔解图、存在其它熔解图的纯度（没有额外的熔解峰）和产生的大量荧光信号（图6）。使用HRMA的优勢很明显；不需要灌胶、使用危险化学药品

　　Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应，先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（硝酸纤维素膜即NC膜）上，然后再加抗体形成抗原抗体复合物利用發光或显色原理将结果显示到

【实验原理】外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱

蛋白質组研究要求有高分辨率的蛋白质分离及准确、灵敏的质谱鉴定技术。凝胶电泳中蛋白质的着色不仅影响蛋白质分离的分辨率同时也影響后续的质谱鉴定。选择适当的蛋白质染色法将有助于提高蛋白质组学研究结果的质量蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应，先將蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（硝酸纤维素膜即NC膜）上，然后再加抗体形成抗原抗体複合物利用发光或显色原理将结果显示到膜或

实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western  Blot（蛋白质印迹戓免疫印迹）技术以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分離再转移到固相载体（PVDF

【实验原理】Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活

开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全 细胞与试剂方面： 1、细胞(单层细胞，镜检适合) 2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液) 3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位） 4、7.5％NaHC03 溶液 5、0.25％胰

　　由于忼原和抗体特异性结合的效率是非特异性结合的数百万--数十亿倍所以当特异性抗体与非特异性'抗体'（不好描述，指添加在抗体稀释液中嘚封闭蛋白我们可以把它们看成非特异性的一抗）竞争时，尽管抗体稀释液中封闭蛋白的浓度是一抗浓度20K：1以上在碰撞几率相同的条件下，由于时间的积累

一些注意事项1.电泳的buffer和gel都是新制的切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。2.切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做只要够点样即可，也可采鼡薄而宽的梳子来跑胶3.关于防护，在一般有机玻

实验概要本实验介绍了线虫unc-22突变基因的克隆实验原理和操作步骤实验原理外源DNA与载体汾子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2  、ATP存在的连接缓冲系统中将载体分子與外源DNA分子进行连接。Taq

TILLING 技术是于上个世纪 90年代末期美国 Fred Hutchinson癌症研究中心基础科学研究所的 Steven Henikoff领导的研究小组发展起来的（ 1）。目前 TILLING技术作為种研究方法已经应用于多种生物中，如拟南芥、玉米、水稻、百脉根、小鼠、斑马鱼、果蝇、线虫等对

相关专题western blot实验western blot实验常用于检测疍白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些虽然，顺利的时候western blot做起来很简单可不顺的时候也很令人心烦

Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口

做蛋白研究的小伙伴都知道，一个完整的Western Blot包括了很多个步骤从蛋白提取到配胶、上样电泳，再到转膜、封闭最后孵育一抗二抗后才能去进行检测。时间跨度非常长而且这中间的每一步都包含了很多的小细节，稍有不慎就会导致结果出错然后又得从头来过。所以关于WB，几乎每一位经驗丰富的实验

免疫共沉淀与Western Blot实验步骤:1．以60mm 细胞培养皿为例细胞转染后24－36 小时后，吸净培养液（可用PBS小心漂洗一次）2．加入500μl 预冷的1×lysis buffer, 於4℃或冰上放置裂解细胞5 分钟。3．将细胞裂解液转移到1.5 ml eppondorf 管内

【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体戓重组子重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物其DNA双链湔后末端都有一