酵母rna的提取实验报告 　　生物化学实验实验报告　　实验三酵母核糖核酸的提取及测定　　生物103班赵宁宁　　搭档井恬　　一．研究背景及目的　　核酸是生命的最基本物质之一，广泛岑在于所有动植物细胞、微生物体内。对核酸　　的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。本次实验提取酵母的核糖核酸。RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA酶的作用。本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。　　通过前两次实验我们学会了测定蛋白质含量以及酶的活性，掌握了研究这两种生物　　大分子的基本方法，本次试验我们将学会如何分离纯化RNA，以及分离纯化的基本原则和操作细节，进而初步了解生物制品开发的基本思路。　　二．原理　　核酸都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷　　酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。　　提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。前者是利用碱使细　　菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，避免在20~70℃的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的一般方法。但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产[2]。本实验采取浓盐法。　　目前测定核酸含量的方法主要有以下四种：定磷法、戊糖测定法(RNA)、　　脱氧戊糖测定法和紫外吸收法。定磷比色法是有准确，微量，快速的特点，是测定核酸含量的最好方法，戊糖测定法和脱氧戊糖测定法是通过糖的颜色反应来测定RNA和DNA的，方法简单，快速，但是当样品中含有粘多糖和蛋白质存在的时候对测定会有干扰。紫外吸收法简单，快速，微量，但是容易受到蛋白质以及含有工而双肩的物质干扰。本实验采用的是紫外吸收法来测定RNA的含量。核酸所含嘌呤和嘧啶分子具有共轭双键，在260nm波长处有最大吸收峰，故通过测定提取到的RNA的OD260值便可以得到核酸的含量，进而计算产率。　　三．仪器与试剂　　1.仪器　　UV-9600紫外分光光度计；　　TDL-40B离心机；　　DL-101-3BS电热鼓风干燥箱；　　电磁炉，移液枪；　　中字牌架盘药物天平；　　型架盘药物天平；　　FA1004电子分析天平；　　2.主要器皿　　研钵；　　15ml具塞刻度试管、三角瓶、烧杯、玻璃棒；　　容量瓶。　　3.材料　　干酵母粉。　　4.试剂　　10%NaCl，6MHCl，95%乙醇，2%氨水，RNA沉淀剂。　　四．实验方法/操作步骤　　1.酵母核糖核酸的提取　　2.核糖核酸含量的测定　　制备匀浆：玻璃匀浆器内加入5ml蒸馏水→匀浆至均一的胶体溶液→转入小烧杯→混匀，2%氨水调节pH至→转入25ml容量瓶，定容，混匀。　　五．数据整理　　六．结果计算与讨论及分析　　1.结果计算　　制品纯度=1×5000××10-6×100%=%　　制品纯度×总制品重产率：RNA提取率=100%=%7　　2.讨论及分析　　通过本次我们学会了如何提取RNA以及测定其含量。从得到的数据来看，提取的样品　　纯度还不是太高，但查阅资料得知浓盐法提取得到的RNA纯度应该比稀碱法要高，由此可知，在实际的生产中，最常用的此两种方法的到的RNA产品的纯度都不是很高。本实验的提取率在实验过程中损失了不少，例如在用硫酸纸转移的时候因为硫酸纸的弹性而使得一小部分产物掉落。本实验中有很多操作细节需要相当严谨的完成，比如水浴时间，离心时间，沉淀取上清液等，只有小心翼翼充分细心的做好这些细节工作，产率会有一定的提高。　　七.结论与展望　　本次试验采用的是浓盐法来提取RNA。通过分析数据结果得知提取的RNA纯度不是很高。我在想如果市场上需要纯度很高的RNA去做研究的时候怎么办呢？当然，还有其他提取RNA的方法，如TROzlo法、CTAB法等。随着核酸在食品、医药、农业等领域的不断进一步的应用，更加廉价，简便的方法也会相应的被发明出来，以便在规模化生产上可以产生　　更多的效益[3]。现在利用稀碱法与浓盐法主要是对啤酒废酵母的再利用。这也反映了一个问题，就是在实际的生产中，要能做到尽量的利用副产物来生产更多的价值。本次试验中，提取了RNA以后，酵母细胞的其他成