ELISA 标准曲线 CurveExpert1.4的应用求助_百度知道
ELISA 标准曲线 CurveExpert1.4的应用求助
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【求助】关于Elisa标曲和CurveExpert的一些疑问，谢谢大家了
楼层直达：
这个帖子发布于3年零30天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在用夹心法测目的抗体的含量，有很多不解的地方，望各位解答了。1. 标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.2. 我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（Logistic Model），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？3. 实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。4. 利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的Elisa，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了 PS: 在免疫学板块也发了求助帖，版主我真的不是捣乱，是感觉统计学板块大家都特别热心，希望你不要删除，谢谢啦。
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missoulmate 最近在用夹心法测目的抗体的含量，有很多不解的地方，望各位解答了。1. 标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.2. 我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（Logistic Model），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？3. 实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。4. 利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的Elisa，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了 PS: 在免疫学板块也发了求助帖，版主我真的不是捣乱，是感觉统计学板块大家都特别热心，希望你不要删除，谢谢啦。1、要合理稀释，梯度稀释方便操作，且浓度分布相对均匀，你用非梯度稀释也行，但你要保证浓度点分布合理，尤其在你不知道标准曲线到底是何种类型曲线的情况，你的那个线性拟合R2很高是个假象，因为绝大多数数据点集中在浓度很小的地方，最高浓度和最低浓度相差得太悬殊，待会弄个图给你看看2、很多免疫方法的标准曲线是S型曲线，用Logistic曲线拟合正好，一般用到3P、4P的模型，但问题是你第一步没做好，浓度分布不好，高浓度部分寥寥2个点，中间怎么变化的你根本不知道，压根就没搞清楚标准曲线到底是何种曲线类型3、这个不好说，因为不同的酶标仪、不同的波长可能有所不同，我想尽量控制在2.0之内吧，后面的有点悬。我没记错的话，分光光度计的最佳吸光度值在0.4左右，理论误差最小，酶标仪实质上就是分光光度计，因此我觉得你的大多数样吸光度控制在0.2-0.8的范围，少部分高浓度超过1这样子才合理，个人看法错了勿怪3、免疫学方法标准曲线很少用线性的，至少我还没碰到过，顶多也就是做某种非线性转换后满足一条直线的情况，一般拟合方法都是Logistic、Spline等。
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受教啦许老师，我得好好回味一下你说的这些。再就是如果发表文章的话，CurveExpert这种软件会不会受到质疑，还是说一定要用Origin等专业的软件来进行定量分析呢？我现在打算好好的把问题都缕缕，然后再来做
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不是老师啦，共同学习交流1、数据点真实的分布情形2、用线性拟合是不合适的3、你的定标方式，根本没反映出第一张图各数据点的变化情况嘛，尤其你还不知道数据点究竟是怎么变化的附上你之前实验数据的标准曲线，你对比一下4、真正定标的时候不会取第1张图那么多点，用你的方式取点和合理分布取点，你看下有什么区别，前者明显能看得出来是个S形曲线，后者根本说不清是什么类型的，有可能是非线性的，也有可能是线性但有一个点没做好的情况
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jefferson_xu edited on
嗯，我也发现了这个问题，所以我打算把标准品按2倍浓度稀释再来，不能随机的去取点了，这样即便线性0.99却也是不能用的值。谢谢啦Xu
：） 这几天辛苦你了
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